不同贮存方法对沅江荻芦嫩茎总氨基酸含量的影响

廖颖妍 谭颖贤 方宇希 李荣东

摘要[目的]建立沅江荻芦嫩茎总氨基酸含量测定方法，研究4种荻芦的贮存方法对荻芦嫩茎总氨基酸含量的影响。[方法]采用茚三酮比色法测定荻芦中总氨基酸的含量，筛选以谷氨酸为标准溶液的最佳工作条件，在401 nm 处测定各样品吸光度。[结果]新鲜荻芦中总氨基酸含量占22.0%，各贮存方式下的总氨基酸含量为4.9%～21.2%。平均回收率为99.3%～99.6%，RSD为0.06%～0.52%。[结论]通过比对4种贮存方式下的总氨基酸含量，减压贮存是最有利于减少营养成分氨基酸的贮存方式。该方法简便有效，污染少，可行性好。

关键词荻芦；嫩茎；总氨基酸；茚三酮比色法；贮存方式

中图分类号S509.3文献标识码A文章编号0517-6611（2017）05-0120-01

Abstract[Objective] To establish a method for determination of total amino acid content in tender stem of Triarrhena lutarioriparia from Yuanjiang， to study the effects of four storage methods on amino acid content.[Method] Using ninhydrin colorimetry method to determinate total amino acid content in T. lutarioriparia，screen the best working conditions by glutamate as the standard solution，and measure absorbance at its maximum absorption wavelength at 401 nm.[Result] The total content of amino acid in fresh T. lutarioriparia accounted for 22.0%，the amino acid content under each storage method was in 4.9%-21.2%， average recovery was in 99.3%-99.6%， RSD was in 0.06%-0.52%. [Conclusion] By comparing the contents of total amino acids in four ways， reduced pressure storage is the most beneficial way to reduce the amino acid. The method is simple and effective， less pollution and good feasibility.

Key wordsTriarrhena lutarioriparia L.；Tender stem；Amino acid；Ninhydrin colorimetry method；Storage mode

基金項目沅江市政府科研合作基金项目（科函〔2015〕14号）。

作者简介廖颖妍（1992—），女，湖南益阳人，硕士研究生，研究方向：新药研究与开发工作。

*通讯作者，教授，博士，硕士生导师，从事创新药物的研究与开发工作。

收稿日期2016-12-05

荻芦（Triarrhena lutarioriparia L.Liu，sp.nor.），禾本科、黍亚科、须芒草超族、甘蔗族、芒亚族、荻属，也叫作南荻，其嫩茎因为形似小竹笋所以也被称为芦笋[1]。荻芦中含有丰富的多糖、黄酮、氨基酸等活性成分，是荻芦发挥药理药效的物质基础[2]。与其他蔬菜相比，荻芦富含18种氨基酸，总氨基酸含量高于许多蔬菜。目前食品中氨基酸的测定主要有茚三酮显色法、甲醛滴定法和HPLC法[3-4]。

因新鲜荻芦嫩茎含水量高，采后由于呼吸作用增强，极易失水、失鲜、腐烂和组织木质化增加，常温下荻芦采后的保鲜期仅为24～48 h，随着贮存时间的延长，荻芦品质逐渐下降。长期受到贮藏问题的干扰，现已影响了荻芦的经济效益。目前对荻芦营养成分的研究很少，对于产品的保鲜技术也缺乏相应的科学研究。笔者采用茚三酮比色法测定荻芦中总氨基酸的含量[5]，筛选以谷氨酸为标准溶液的最佳工作条件，在401 nm处测定各样品吸光度，建立沅江荻芦嫩茎总氨基酸含量测定方法，研究不同保存方法对荻芦嫩茎总氨基酸含量的影响，以期为采后产业化、延长荻芦贮藏时间和提高食用品质提供理论依据和实践指导，也可为荻芦的质量控制提供参考。

1材料与方法

1.1试材

标准品谷氨酸（上海金穗生物科技有限公司）、无水乙醇（安徽安特食品有限公司）、磷酸二氢钾（国药集团）、十二水合磷酸钠（国药集团）、氯化亚锡（南京化学试剂有限公司）、茚三酮（上海邦景有限公司），荻芦来自沅江河滩湿地。

1.2仪器与设备

TU-1900紫外分光光度计（日本岛津）；PB203-N电子精密天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；超声波清洗机（杭州法兰特超声波有限公司）；DELTA 320PH计（杭州联测自动化科技有限公司）；电热鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）。

1.3方法

1.3.1贮存方法。

1.3.1.1

（新鲜荻芦）减压冷藏贮存。将荻芦放入真空袋中，抽真空，放入冰箱（0～2 ℃）贮存。

1.3.1.2

（速冻荻芦）速冻贮存。将荻芦去除老皮，再将荻芦放于漂烫筐中，置于140 ℃左右。漂烫结束后立即转到10 ℃以下的冷水进行冷却。待其冷却后，将它从水中捞出，沥干表面水分，在-30 ℃条件下迅速冷冻，使荻芦的中心温度达-18 ℃，然后将速冻后的荻芦装入真空袋中，封口后置于冰箱中。

1.3.1.3

（甩干荻芦）土法贮存。将荻芦去除老皮，再将荻芦放于漂烫筐中，置于140 ℃左右。漂烫结束后立即转到10 ℃以下的冷水进行冷却。冷却后将荻芦用纱布包裹并扎紧于甩干机中甩干水分，然后用较高浓度的食盐混合均匀，用真空袋装好，窖藏保存。

1.3.1.4

（新鲜荻芦）化学保鲜。将荻芦去外皮后，置于烫漂筐内烫漂60 min，然后立即用冰水冷却，沥干水分后用1%脱氢乙酸钠浸泡，并分装成真空包装，放在冷藏箱中保存。

1.3.2缓冲溶液和茚三酮溶液的制备。

2%茚三酮溶液制备：称取茚三酮1.000 g加入35 mL热水的烧杯使其溶解，加入0.040 g氯化亚锡（防腐剂），搅拌过滤，滤液置冷暗处过夜（12 h），隔天再加水至50 mL，摇匀，备用。

pH 8.04磷酸缓冲溶液制备：准确称取磷酸二氢钾0184 g于烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，转入100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀备用。准确称取十二水合磷酸钠（Na2HPO4·12H2O）1.203 g于烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，转入100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀备用。

取上述配好的磷酸二氢钾溶液2.0 mL与120 mL磷酸氢二钾溶液混合均匀，再用pH计配制成pH为8.04的磷酸缓冲溶液。

1.3.3标准品的配制。

称取干燥至恒重谷氨酸对照品0.010 7 g，加蒸馏水制成6.42 μg/mL的溶液作为对照品。

1.3.4检测波长的选择。

先以未加入谷氨酸对照品溶液的空白溶液做基线扫描，再将谷氨酸对照品溶液置比色皿中，从800～200 nm进行光谱扫描，最后检出波峰波谷位置，确定最大吸光度为401 nm。

1.3.5供试品溶液的配制。

取4种不同保存方式下贮存0、30、90、180 d的荻芦适量，各打成匀浆，各取0.5 g精密称定，置于锥形瓶中，各加已配制好的70%乙醇30 mL，然后超声处理60 min。过滤，收集滤液，再用少量乙醇反复洗涤滤液，合并滤液并用70%乙醇定容至50 mL，混匀，作为供试品溶液。

1.3.6方法学考察。

1.3.6.1线性关系考察。

精密称取干燥至恒重的谷氨酸对照品0.010 7 g，定容至10 mL容量瓶。取对照品溶液1 mL置于试管中，加0.5 mL茚三酮、1 mL磷酸缓冲溶液，沸水加热15 min，再取出用冰水冷却15 min，冷却至室温，再定容至10 mL容量瓶中。分别精密量取0.3、0.6、0.9、1.2、1.5 mL于10 mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀。按紫外分光光度法规定进行操作，在波长401 nm處测定吸光度。以谷氨酸对照品浓度（μg/mL）为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

1.3.6.2精密度试验。

精密吸取谷氨酸对照品溶液（质量浓度为6.42 μg/mL）5份，按照茚三酮比色法显色，并随行做空白试验，分别在波长401 nm处测定吸光度。

1.3.6.3稳定性试验。

精密吸取新鲜荻芦样品溶液6份，按照茚三酮比色法显色，并随行做空白试验，再分别精密吸取样品溶液和空白试剂3.0 mL置50 mL容量瓶中，每隔一段时间在波长401 nm处测定吸光度。

1.3.6.4重复性试验。

取新鲜荻芦匀浆6份，每份各称定05 g，按照“1.3.5”方法配制供试品溶液，按照茚三酮比色法显

〖LL〗

色，并随行做空白试验，分别在波长401 nm处测定吸光度。

1.3.6.5回收率试验。

称取新鲜荻芦匀浆0.5 g共9份，按照“1.3.5”方法配制，分别取1 mL供试品溶液，加入浓度分别为96.37、96.88、97.51、129.83、130.76、128.45、160.80、161.33、160.52 mg/mL的标准品溶液1 mL，按照茚三酮比色法在波长401 nm处检测。

2结果与分析

2.1方法学考察

2.1.1线性关系的考察。按照“1.3.6.1”方法操作，以谷氨酸标准品的浓度（μg/mL）为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线（图1），得出线性方程为Y=0.110 75X-0.134 9（r=0.999 9），表明谷氨酸浓度在3.21～16.05 μg/mL时与吸光度有良好的线性关系。

2.1.2

精密度试验。按照“1.3.6.2”方法操作，测定吸光度，计算RSD为1.61%，表明该方法精密度良好。

2.1.3稳定性试验。按照“1.3.6.3”方法精密吸取新鲜荻芦样品溶液6份，测得不同放置时间下的样品吸光度，计算RSD为0.14%，表明荻芦样品中总氨基酸含量在12 h内稳定。

2.1.4重复性试验。按照“1.3.6.4”方法操作，计算平均氨基酸含量为21.24%，RSD为0.22%，表明该方法重复性良好。

2.1.5

回收率试验。按照“1.3.6.5”方法操作，结果发现（表1），加入低、中、高3个浓度标准品的平均回收率分别为996%、99.3%、99.5%，RSD分别为0.06%、0.52%、0.32%。表明该方法准确、可靠，可用于测定荻芦中总氨基酸含量。

2.2样品含量测定

由表2可见，同一品种、同一产地所采集的荻芦，经不同的处理方式（减压冷藏贮存、速冻贮存、土法贮存、化学贮存），得到其各自提取液均在401 nm附近有最大吸收；通过比较可知，减压冷藏贮存法保存的荻芦所含总氨基酸含量较高。

3小结与讨论

该试验通过对荻芦采用不同的绿色保鲜技术，测定一段时间内总氨基酸含量，来寻求最佳的保鲜技术。从试验结果可知，在3个月内，减压冷藏贮存和土法贮存都可以有效地减少新鲜荻芦中总氨基酸的损失，既保持产品良好的外观，提高消费者购买欲望，又是绿色无添加的荻芦保鲜方法。目前荻芦加工产品在市场上比较少，对荻芦中有效成分的提取开发还不够深入。因此，荻芦作为一种经济作物，有着非常好的发展前景和开发利用价值[6]。而该研究建立了紫外分光光度法测定谷氨酸含量的具体方法，并对其方法学进行了验证，结果表明，该方法简便可行、准确度较高、重复性好，且相对于其他方法，紫外分光光度法成本较低，适于氨基酸的测定，可广泛应用。但要注意试验前必须除去样品中的糖类、苷类、生物碱及醇溶性蛋白等干扰性成分，该研究采用70%乙醇提取除去杂质。

参考文献

[1] 党宁，黄志刚，李合松.纤维型植物南荻的生物学及其应用研究进展[J].热带亚热带植物学报，2012，20（4）：418-424.

[2] 肖骏玖，赵玲艳，石星波，等.洞庭湖区南荻嫩茎营养成分分析与重金属含量测定[J].食品科学，2015，36（12）：104-107.

[3] 章丽，刘松雁.氨基酸测定方法的研究进展[J].河北化工，2009，32（5）：27-29.

[4] 徐洁，钱爱萍.茶叶游离氨基酸测定前处理方法探讨[J].福建省农科院学报，1993，8（4）：39-43.

[5] 刘美，马叶萍，柳阳阳，等.茶叶中游离氨基酸含量的测定[J].微量元素与健康研究，2016，33（1）：51-52.

[6] 王萌，王玉彬，陈章和.芦苇的种质资源及在人工湿地中的应用[J].应用与环境生物学报，2010，16（4）：590-595.