肾透明细胞癌中Rac1和WAVE2的表达及其相关性

关有良 臧东钰 王 丹

(锦州医科大学附属第一医院泌尿外科，辽宁 锦州 121001)

肾透明细胞癌中Rac1和WAVE2的表达及其相关性

关有良 臧东钰1王 丹2

(锦州医科大学附属第一医院泌尿外科，辽宁 锦州 121001)

目的 研究Rac1和WAVE2蛋白在肾透明细胞癌中的表达及其相关性。方法 采用免疫组织化学SP法对肾透明细胞癌标本Rac1和WAVE2的表达进行检测。结果 肾癌组Rac1和WAVE2表达阳性率明显高于癌旁组。且Rac1和WAVE2的表达水平与患者年龄、性别无明显关联，而与肿瘤转移有关。Rac1和WAVE2在肾癌中的表达呈正相关。结论 肾癌中Rac1和WAVE2蛋白阳性表达率高于正常肾组织，并呈正相关性，可能在肾透明细胞癌的发生发展过程中起关键作用。

肾透明细胞癌；Rac1；WAVE2

肾癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤，其中60%～85%为肾透明细胞癌。目前认为肿瘤细胞的侵袭和转移是造成肺癌治疗失败的主要原因〔1〕。Rac1作为Rho家族成员之一，参与包括细胞骨架重构、基因转录、细胞增殖以及细胞生存等过程〔2〕。在肿瘤组织中的研究表明Rac1通过参与肿瘤细胞的增殖分化与凋亡、细胞运动、侵袭与转移及肿瘤血管生成，影响肿瘤细胞的生物学特性，并且已陆续有研究报道表明Rac1在鼻咽癌、肝癌组织中过表达〔3,4〕。WAVE2作为一种新的肌动蛋白调节蛋白，参与细胞信号的转导，调节肌动蛋白的聚合及细胞骨架的重排，在片状伪足的形成和细胞迁移中的作用备受人们关注。而片状伪足的形成则主要是由Rac来介导的，WAVE2作为Rac的下游效应物〔5〕。本研究采用免疫组织化学法检测合Rac1与WAVE2在肾癌组织中的表达水平，分析Rac1和WAVE2在肾癌组织中的表达及其与肾癌的临床病理特征的关系。

1 材料与方法

1.1 标本 26例肾透明细胞癌标本均来自辽宁医学院第一附属医院2013年10月至2014年10月肾癌手术的患者，男17例，女9例，年龄50～75(平均62岁)。并随机选取10例组织标本的癌旁组织标本作对照。所有病例均于术后病理证实为肾透明细胞癌。

1.2 实验试剂和仪器 小鼠抗人Rac1兔多克隆抗体(Abaom公司)，WAVE2兔多克隆抗体(Santa Cruz公司)，兔超敏二步法检测试剂盒、DAB显色系统均购于中杉金桥生物技术有限公司，光学显微镜(Olympus BX51)。

1.3 免疫组织化学方法 采用免疫组织化学PV二步法检测Rac1、WAVE2蛋白在石蜡包埋病理标本的表达情况。实验操作步骤按试剂盒说明，以PBS代替一抗为阴性对照。

1.4 结果判定 两种蛋白的免疫组化阳性染色细胞中均呈现粗大棕黄色颗粒，参考相关文献〔6〕随机取5个高倍视野，计算每个高倍视野中阳性细胞数占肿瘤细胞总数的百分比，最后计算5个高倍视野的平均百分比，(1)阳性染色细胞数:≤10%为1分；11%～50%为2分；51%～75%为3分；>75%为4分(2)阳性染色强度分级:无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。以上两项积分乘积为最终评定结果，0分为阴性(-)，1～2分为弱阳性(+)，3～4分为阳性()，5分为强阳性()，另规定:0～2分视为低表达，3～4分视为中度表达，5分为高表达。

1.5 统计学处理 采用SPSS17.0软件进行χ2检验及Spearman等级相关分析。

2 结 果

2.1 Rac1和WAVE2在肾癌组织与癌旁组织中的表达 肾癌组织中Rac1阳性表达为19例(73.1%)，阳性染色呈现粗大棕黄色颗粒；WAVE2阳性表达17例(65.4%)，阳性着色在胞质、细胞核可表达。而在癌旁组织Rac1及WAVE2均无表达。见图1、图2。

2.2 Rac1和WAVE2表达与临床病理特征的关系 Rac1、WAVE2的表达水平与年龄、性别无明显关联，而与肿瘤转移有关(P<0.05)，见表1。

图1 Rac1在肾细胞癌与癌旁组织中的表达(DAB，×200)

图2 WAVE2在肾细胞癌与癌旁组织中的表达(DAB，×200)

临床病理参数nRac1P值WAVE2P值性别 男1712(706)069411(647)0920 女97(778)6(667)年龄(岁) <601511(733)097310(667)0873 ≥60118(727)7(636)淋巴结转移 无94(444)00173(333)0012 有1715(882)14(824)

2.3 肾癌组织中Rac1、WAVE2蛋白表达的相关性 肾癌组织中Rac1与WAVE2呈正相关(r=0.47，P=0.015)。

3 讨 论

Rac1蛋白属于Rac1超家族中的Rho亚家族，Rac1的表达和激活对肿瘤细胞的渗出起重要作用。Rac1在人类的正常组织中呈现低水平表达或不表达，但在胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌等多种恶性肿瘤组织或细胞中表达增高，而且Rac1的高表达同肿瘤细胞的分化程度、病理分型、TNM分期等表型密切相关，肾癌组织的研究也表明激活Rac1可导致肾脏癌症浸润〔6～9〕。本文显示肾癌组织中Rac1阳性表达明显升高，与年龄、性别无明显关联，与肿瘤有无转移相关。与上述文献报道一致。

WAVE2涉及细胞骨架的重组，可以引发细胞伪足形成和细胞运动，表明WAVE2可能与肿瘤的侵袭转移相关。文献研究显示喉癌组织中WAVE2蛋白的表达显著高于癌旁黏膜组织；WAVE2蛋白表达与临床分期、肿瘤大小和淋巴结转移等临床病理特征显著相关；在喉癌组织中的表达水平与性别、年龄、肿瘤原发部位、病理学分级等无关〔10〕。WAVE2的过量表达与肝细胞癌的发生发展和侵袭转移密切相关，可以作为评价肝癌预后的指标之一〔11〕。本研究结果与上述文献报道一致，但与黄琰菁等〔12〕的研究结果有所不同。我们考虑，原因可能与肿瘤组织不同有关，WAVE2在胃癌组织的研究显示下调WAVE2是抑制胃癌肿瘤转移机制之一〔13〕，但也有文献报道显示在胃癌组织中WAVE2下调意味着淋巴转移〔14〕。因此WAVE2与肿瘤的确切关系仍需进一步研究。

Eden等〔15〕研究发现:细胞信号从Rac传递至肌动蛋白的过程与活化的WAVE复合物密切相关。研究表明Rac1基因上调时，WAVE2表达增加〔16〕。Rac1引发特定的细胞突起通过WAVE2板状伪足。本研究显示Rac1与WAVE2呈显著正相关，针对Rac1和WAVE2的表达及作用机制尚需进一步探讨。

1 Makale M.Cellular mechanobiology and cancer metastasis〔J〕.Birth Defects Res C Embryo Today,2007;81(4):329-43.

2 Bosco EE,Mulloy JC，Zheng Y.Rac1 GTPase:a"Rac"of all trades〔J〕.Cell Mol Life Sci,2009;66(3):370-4.

3 齐 岩，黄 波，司晋源，等.Rac1和Cdc42在鼻咽癌组织中的表达及预后相关性研究〔J〕.中国实验诊断学,2013;17(9):1594-8.

4 肖 冰.肝细胞性肝癌组织中GST-π和Rac-1的表达及其临床意义〔J〕.中国普通外科杂志,2013;22(7):944-8.

5 彭慧娟，张 瑜，高一萌，等.Rac1蛋白在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞株SKOV3增殖及迁移的作用〔J〕.第三军医大学学报,2013;35(13):1402-5.

6 魏世平，王克猛.结直肠癌中Rac1的表达研究〔J〕.河北医药，2011;33(24):3701-2.

7 Kato T,Kawai K,Egami Y,etal.Rac1-dependent lamellipodial motility in prostate cancer PC-3 cells revealed by optogenetic control of Rac1 activity〔J〕.PLoS One，2014;9(5):e97749.

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10 高水超.WAVE2在喉鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义〔D〕.长沙：中南大学，2013.

11 陶一明.WAVE2在肝细胞癌侵袭转移中的关键作用〔D〕.长沙：中南大学，2005.

12 黄琰菁，于世英，王江玲，等.乳腺癌中Abi1和c-Abl及WAVE2的表达及其相互关系〔J〕.中国组织化学与细胞化学杂志，2010;19(3):216-20.

13 Xu XY,Zhang LJ,Yu YQ,etal.Down-regulated MAC30 expression inhibits proliferation and mobility of human gastric cancer cells〔J〕.Cell Physiol Biochem,2014;33(5):1359-68.

14 Jia S,Jia Y,Weeks HP,etal.Down-regulation of WAVE2,WASP family verprolin-homologous protein 2,in gastric cancer indicates lymph node metastasis and cell migration〔J〕.Anticancer Res，2014;34(5):2185-94.

15 Eden S,Rohatgi R,Podtelejnikov AV,etal.Mechanism of regulation of WAVE1-induced actin nucleation by Rac1 and Nck〔J〕.Nature，2002;418(6899):790-3.

16 Takahashi K.WAVE2 protein complex coupled to membrane and microtubules〔J〕.J Oncol，2012;2012:590531.

〔2016-02-13修回〕

(编辑 曹梦园)

辽宁省自然科学基金项目(No.2013022009)；辽宁省高等学校优秀人才支持项目(LJQ2013092)；辽宁医学院校长基金项目(No.XZJJ20130243)

王 丹(1974-)，女，讲师，博士，主要从事肥胖、神经退行性相关疾病研究。

关有良(1973-)，男，副主任医师，硕士，主要从事肾癌发病机制研究。

R737.11

A

1005-9202(2017)09-2121-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.09.017

1 锦州医科大学附属第三医院胸外科

2 锦州医科大学组织胚胎学教研室