蒙成药给喜古讷-3汤对肥胖小鼠的影响△

桂利斯 孟永梅

(内蒙古医科大学，内蒙古 呼和浩特 010110)

蒙成药给喜古讷-3汤对肥胖小鼠的影响△

桂利斯 孟永梅*

(内蒙古医科大学，内蒙古 呼和浩特 010110)

目的：建立食源性肥胖小鼠模型，观察蒙成药给喜古讷-3汤对肥胖小鼠的体重、肥胖度、Lee’s指数、腹腔脂肪重量、体脂比和血常规的影响。方法: 实验分空白组、模型组、阳性给药组、蒙成药给喜古讷-3汤高、中、低3个剂量组，共6组；空白组喂养普通饲料，其他5组喂养高脂饲料16周；用体重、Lee’s指数和肥胖度3个指标确定造模成功后，药物干扰16周，测脂肪重量和体脂比以及剪尾采血法做血常规检验。结果: 喂养高脂饲料16周后，高脂组小鼠的体重和Lee’s指数与空白组小鼠比较有极显著性差异(P<0.01)；肥胖度计算：肥胖率分别是雌鼠为75%、雄鼠为100%；药物干扰后体重：高剂量组与低剂量组比较有显著性差异(P<0.05),低剂量组与空白组比较有显著性差异(P<0.05)；脂肪重量：高剂量组与空白组、模型组、阳性给药组、低剂量组比较有显著性差异(P<0.05)，阳性给药组和中剂量组与模型组比较有显著性差异(P<0.05)；体脂比：高剂量组与空白组、模型组、阳性给药组、低剂量组比较有显著性差异(P<0.05)，中剂量组与模型组比较有显著性差异(P<0.05)；Lee’s指数：6组间没有显著性差异；血常规中单核细胞等9个指标有统计学意义(P<0.05)。结论: 用高脂饲料制作食源性肥胖小鼠模型致肥胖效果极明显；蒙成药给喜古讷-3汤对肥胖小鼠的治疗有一定的影响。

食源性肥胖小鼠；蒙成药；给喜古讷-3汤；血常规

肥胖是多种疾病的危险因素，包括心脑血管疾病、2型糖尿病、肌肉骨骼疾病、消化系统疾病、睡眠呼吸暂停或呼吸障碍及某些癌症等[1]，而这些疾病的发生大多是由慢性炎症引起的[2]。慢性炎症是链接肥胖、胰岛素抵抗和机体代谢紊乱的关键机制[3]，研究表明，肥胖时脂肪组织为慢性炎症的主要来源，脂肪组织中巨噬细胞为慢性炎症的主要效应细胞、炎症因子的来源[4]。附睾脂肪组织研究还表明巨噬细胞标记物F4/80与脂肪细胞大小和体重有显著性相关[5]。总之越来越多的研究结果表明，慢性低度炎症是腹部肥胖的一个关键特征。

血常规是当前临床检测的最常用的方式，主要针对血液中的白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板等进行检测，对疾病诊断和治疗具有重要的指导意义。随着现代医学的进步和发展，临床检验结果在疾病的诊断、治疗和抢救方面发挥着重要作用[6]。其中与慢性炎症有关的指标有淋巴细胞、巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞等。

蒙成药给喜古讷-3汤来源于《蒙医传统验方》[7]，具有缓泻功能，主要用于大便燥结、胃胀、腹痛、闭经。通过研究蒙成药给喜古讷-3汤治疗食源性肥胖小鼠的影响，为临床使用该药辨证施治提供实验依据。

1 试验动物、材料及仪器

1.1 试验动物：清洁级昆明种小鼠((20±2)g)，雌雄各半，100只，由内蒙古大学实验动物中心提供，合格证号：京东8806M35。

1.2 实验材料

1.2.1 高脂饲料：配方：胆固醇1%、猪胆盐0.1%、猪油10%、鸡蛋黄粉5%、全脂奶粉5%、基础饲料78.9%。胆固醇：由河南万嘉生物科技有限公司提供，批号：USP30EP5。猪胆盐：由广东环凯微生物科技有限公司提供，批号：3203091。猪油、鸡蛋黄粉、全脂奶粉：由郑州瑞林食品添加剂有限公司提供。基础饲料：由呼和浩特市金宇保灵生物药品有限公司提供并制作高脂饲料。

1.2.2 药物：试验药：蒙成药给喜古讷-3汤，组份：大黄、碱花、诃子，由济南人和中药饮片有限公司统一提供，符合2015年版药典。阳性对照药：奥利司他胶囊，由重庆华森制药有限公司提供，批号：国药准字H20103180。

1.2.3 仪器： 血常规检测用日本光电工业株式会社生产的MEX—7222K型全自动血球分析仪。

2 实验方法

2.1 动物分组及造模方法：小鼠随机分为空白组、模型组、阳性给药组、蒙成药给喜古讷-3汤高、中、低3个剂量组，共6组。适应性喂养10天后空白组喂养普通饲料，其他5组喂养高脂饲料16周。用体重、肥胖指数(大于20%视为肥胖成功)和Lee’s指数3个指标判断制作肥胖模型成功与否并挑出肥胖抵抗体质小鼠，但保证每组的数量。肥胖度和Lee’s指数的公式如下：

2.2 给药方法：把大黄、碱花和诃子3种中药饮片粉碎、过60目筛子，根据蒙药方剂学里的汤药做法作出试验药[8]后按0.3ml/10g的给药量灌胃。中剂量定为人的正常用药量：15g/60kg×10=2.5mg，中剂量的2倍定为高剂量、1/2倍定为低剂量。阳性对照药按人的正常用药量换算后灌胃。空白对照组和模型组灌胃蒸馏水。

2.3 测血常规方法：药物干扰后剪尾采血法取20μL血，用全自动血球分析仪做血常规检验。

2.4 统计学方法：将收集到的计量资料中制作模型后的体重和Lee’s指数采用SPSS22.0统计软件进行独立样本t检验，药物干扰后的数据组间比较用方差分析和近似方差分析法以及秩和检验法，结果用均数和标准差(±s)表示，以P<0.05为有统计学意义。

3 结果与分析

3.1 食源性肥胖小鼠模型的建立结果：从表1我们可以看出喂养高脂饲料的5组的体重和Lee's指数与空白组比较都有极显著性差异(P<0.01)，表明高脂饲料制作食源性肥胖小鼠模型致肥胖效果极明显。

表1 高脂饲料对小鼠体重和Lee’s指数变化(±s，n=7)

注：与空白组比较**表示差异极显著(P<0.01)。

3.2 药物干扰后小鼠体重、腹腔脂肪重量、体脂比和Lee’s指数的变化：从表2我们可以看出药物干扰后体重：高剂量组与低剂量组比较有显著性差异(P<0.05),低剂量组与空白组比较有显著性差异(P<0.05)；脂肪重量：高剂量组与空白组、模型组、阳性给药组、低剂量组比较有显著性差异(P<0.05)，阳性给药组和中剂量组与模型组比较有显著性差异(P<0.05)；体脂比：高剂量组与空白组、模型组、阳性给药组、低剂量组比较有显著性差异(P<0.05)，中剂量组与模型组比较有显著性差异(P<0.05)；Lee’s指数：6组间没有显著性差异；表明蒙成药给喜古讷-3汤对肥胖小鼠的体重、脂肪重量和体脂比有一定的影响，对Lee’s指数没有显著性影响。

表2 给药后体重、脂肪重量、体脂比和Lee’s指数变化(±s，n=7)

注：*表示方差分析组间比较P<0.05，#表示秩和检验组间比较P<0.05，△表示与实验各组比较P<0.05。

3.3 蒙成药给喜古讷-3汤对小鼠血常规指数的影响：从表3中我们可以看出，药物干扰后，中性细胞数：高剂量与空白组、模型组、阳性给药组、中剂量组比较有显著性差异(P<0.05)；淋巴细胞比率：高剂量组与模型组和阳性药组比较有显著性差异(P<0.05)；血红蛋白和红细胞压积：高剂量组与模型组比较有显著性差异(P<0.05)；平均血红蛋白浓度：高剂量组与中剂量比较有显著性差异(P<0.05)；血小板：高剂量组与空白组比较有显著性差异(P<0.05)；单核细胞比率、单核细胞数和红细胞分布宽度：高剂量组与其他5组都有显著性差异(P<0.05)；表明蒙成药给喜古讷-3汤对肥胖小鼠的血常规指标有一定的影响。

4 讨论

2013年6月18日，美国医学会协会(American Medical Association，AMA) 在其历史上第一次正式宣称肥胖为一种疾病，需要医学干预措施来预防和治疗[9]。2016年4月2日，英国《柳叶刀》杂志刊登的一项大型研究结果表明，现今全球人口首次肥胖者多于羸瘦者而且以原因以不良的生活方式更为重要。不良生活方式指的是不良的饮食和生活习惯，包括运动较少，摄食大量的脂肪和蛋白质，主要是动物性食物，以及氢化油[10]。刘芳等的实验研究还表明高脂饲料诱导所致的单纯性肥胖模型与人类肥胖最为接近，应用最为广泛，国外研究使用小鼠作为肥胖动物模型时主要选择C57BL/6J和ICR小鼠，而国内除使用这2种品系小鼠外，还大量使用 KM 小鼠建立肥胖模型[11]。因此在本次试验中，我们用食源性肥胖小鼠模型来研究蒙成药给喜古讷-3汤对肥胖的影响，而体重、肥胖度、Lee’s 指数、腹腔脂肪重量、体脂比等指标是判断肥胖的主要标准。从结果中我们得到喂养高脂饲料小鼠的体重和Lee’s指数与空白组比较有极显著性差异，肥胖度计算，雌鼠肥胖率为75%、雄鼠肥胖率为100%，但是雌鼠的肥胖率不如雄鼠，原因可能与雌激素或雌性小鼠的生理机能有某种联系，亦或是其他原因，有待下一步继续研讨。药物干扰后我们得出蒙成药给喜古讷-3汤对肥胖小鼠的体重、腹腔脂肪重量和体脂比有显著性影响，而对Lee’s 指数没有显著性影响，原因可能是给药时间太长导致空白组小鼠的Lee’s指数随着体重和体长增大而增大最后与实验组的Lee’s指数无明显差异，再者空白组里也有易胖体质小鼠而随着长时间的自由饮食而体重和体长过分增加导致与模型组小鼠的体质量差别不大。

表3 给药后血常规指数变化(±s，n=7)

注：*表示方差分析组间比较P<0.05，#表示近似方差分析组间比较P<0.05，△表示与实验各组比较P<0.05。

脂肪组织是最先被发现炎症与肥胖症有关的部位[12]，而炎症的一个重要特征就是炎症组织的免疫细胞如中性粒细胞、嗜酸细胞和巨噬细胞的浸润[13]。从血常规检验结果中我们得到高剂量组的淋巴细胞比率、血红蛋白、红细胞压积、平均血红蛋白浓度、血小板等5个指标的指数显著低于其他5组，而这些指标与肥胖可能没有直接关系。中性细胞数、单核细胞比率、单核细胞、红细胞分布宽度等4个指标的指数显著高于其他5组，这种直接原因可能与给药后长期腹泻导致电解质紊乱或者感染引起，而内在机制等原因我们尚未检测，有待进一步研究。

肥胖是一种慢性疾病，而药物治疗目前仍是肥胖症治疗的辅助手段并且其安全性也有很大的研究空间。没有药物可以产生永久的减肥疗效，或许只有长期服药才能降低或者保持体重。另外不同机理的减肥药物联合使用，增加疗效，减少各自的副作用，也是未来的发展方向。面对数量持续上升的肥胖患者，用药需求显然未被满足，减肥药的市场仍十分巨大。因此本着蒙成药给喜古讷-3汤的缓泻功能做了此次的试验研究，相信随着对肥胖机制不断深入的研究，更多新的药物靶点会被发现，更加安全有效的减肥药物会被研发和使用。

[1] 崔家玉，谢晓慧.肥胖症的药物治疗进展[J].中国新药杂志，2016(25)2，163-169.

[2] 詹莉莉，杨志秋，傅正伟.肥胖与慢性炎症的研究进展[J].中国细胞生物学学报，2011，33(3)：297-305.

[3] 贺强，季浏.一次急性耐力游泳运动对DIO小鼠脂肪组织巨噬细胞介导的慢性炎症的影响[J].北京体育大学学报，2016，(39)2：61-68.

[4] Hotamisligil GS． Inflammation and metabolic disorders[J].Nature，2006，444(7121):860-867．

[5] CHEN Ying-Ying,YAN Yan,ZHAO Zheng，Bofutsushosan ameliorates obesity in mice through modulating PGC-1αexpression in brown adipose tissues and inhibiting inflammation in white adipose tissues[J].Chinese Journal of Natural Medicines 2016, 14(6): 0449-0456.

[6] 邓艳玲，刘又嘉，肖新云,等.抗生素相关性腹泻对小鼠血常规的影响[J].湖南农业科学，2016(10)：23-25

[7] 内蒙古卫生厅.内蒙古蒙成药标准[S]．赤峰：内蒙古科学技术出版社，1987:26.

[8] 巴根那.蒙药方剂学[M].内蒙古人民出版社，2007:21-22.

[9]http://www．ama-assn．org/ama/pub/news/news/2013/2013-06-18-new-ama-policies-annual-meeting[EB/OL].(2013-06-18)．page．

[10] 李芸芸.这是肥胖的时代也是赢瘦的时代[J].百科知识,2016(10)：4-7

[11] 刘 芳，高南南，杨润梅,等.不同品系小鼠肥胖模型比较及C57BL/6J小鼠肥胖机制研究[J].中国药理学通报,2013(3)：360-365.

[12]方思佳，周时高，何颂华,等.单纯性肥胖中医药治疗进展[J].辽宁中医药大学学报.2016(4)：142-145.

[13]孙鑫，新鞠消膏方治疗单纯性肥胖症的临床研究及机制探讨[J].中国中医科学院,2011.5(17):1-98.

2016年12月8日收稿

Blood routine examination

Effect of Mongolian medicine geixigune-3 decoction on obese mice

Guilisi MENG Yong-mei*

Inner Mongolia Medical University, Inner Mongolia, Huhhot (010110)

Objective: Build obese mice model by fat diet,then observe the effect of the Mongolian medicine Geixigune—3Tang on body weight、Lee's index、 obesity、fat weight、body fat ratio and blood routine of the obese mice.Method: First,the obese mice are divided into six groups include the blank control group、the model group、the positive drug control group、the Mongolian medicine Geixigune—3Tang high、medium and low dose group.Second,these groups are all feeded with high fat diets for 16 weeks,except the blank control group,which is feed by normal diet for equal time.Then,make evalution of the model by body weight、Lee's index and obesity to make sure the model are successfully made.Finally,give Geixigune—3Tang to certain groups according to the design for another 16 weeks,then measure fat weight and body fat ratio by tail-cut blood sampling method.Result: After 16 weeks, the body weight and Lee's index of high fat group mice were significantly higher than those of the blank group(P<0.01);The obesity rate was 75% in the female and 100% in the male;After taking Geixigune—3Tang,body weight: the high dose group and low dose group had significant difference(P<0.05),low dose group and the control group had significant difference(P<0.05);fat weight: high dose group and blank group, model group, positive drug group, low dose group had significant differences(P<0.05),positive drug group、medium dose group and model group had significant differences(P<0.05);body fat ratio: the high dose group and blank group, model group,positive drug group,low dose group had significant differences(P<0.05),middle dose group and model group had significant difference(P<0.05);Lee’s index:there was no significant difference between the 6 groups;Blood mononuclear cells and other 9 indicators were statistically significant(P<0.05).Conclusion: The obese mice model can be made successfully with fat diet.The Mongolian medicine has a certain effect on the treatment of obesity mice.

Diet-induced obesity mice；Mongolian medicine Geixigune—3Tang；

内蒙古医科大学博士启动基金项目—“三味大黄汤对肥胖小鼠的药理实验研究”(YKD2013BQ03)； 国家自然基金项目—“利用microRNA芯片技术寻找慢性心衰血瘀证素相关的血清标志物研究”(81260596)。

R291.2

A

1006-6810(2017)02-0061-04

*通讯作者：孟永梅，博士，教授，硕士研究生导师，从事中蒙医药研究工作。7063@qq.com.