HPLC法测定民族药材天仙子中金丝桃苷的含量

杜 鹃 杨宏昕

(1.内蒙古自治区中医医院,内蒙古 呼和浩特 010020； 2.内蒙古自治区人民医院，内蒙古 呼和浩特 010017)

HPLC法测定民族药材天仙子中金丝桃苷的含量

杜 鹃1杨宏昕2

(1.内蒙古自治区中医医院,内蒙古 呼和浩特 010020； 2.内蒙古自治区人民医院，内蒙古 呼和浩特 010017)

目的：测定天仙子不同药用部位中金丝桃苷为含量。方法：HPLC法， C18柱，流动相为甲醇-水-磷酸-三乙胺溶液(225∶30011)，流速1.0mL·min-1，检测波长为360nm，柱温为30℃。结果：金丝桃苷在0.007～0.464μg范围内呈良好的线性关系，r=0.9999；平均回收率=104.33%，RSD为1.85%。结论：天仙子籽、花、叶、茎、根金丝桃苷含量分别为<0.01%、0.198%、0.132%、0.061%、<0.01%，花、叶、茎金丝桃苷平均含量为 0.130%。

HPLC法；天仙子；金丝桃苷

天仙子为茄科植物莨菪Hyoscyamus niger·L.的干燥成熟种子。莨菪、小颠茄子、熏牙子，蒙药名特讷格-乌布斯，药用种子与叶子，我区均有分布。蒙医用来驱虫，藏医用于治疗鼻疳、梅毒、头神经麻痹、虫牙等，中医用于胃脘挛痛，喘咳，癫狂。天仙子含莨菪碱、阿托品、东莨菪碱等。药理实验提示天仙子可抑制腺体分泌，对活动过强或痉挛状态的平滑肌有驰缓作用，并有扩大瞳孔、解除迷走神经对心脏的抑制作用，具有阿托品类药物的作用特点，故临床定位有大毒[1]。本文测定天仙子全草不同部位金丝桃苷的含量，以期作为药材质量评价指标之一。

1 仪器与试剂

1100型高效液相色谱仪 (美国安捷伦公司)，TJ-912型色谱分析平台(太极计算机公司)。金丝桃苷对照品(111521-200303)由中国药品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯；其他均为分析纯试剂；水为纯化水；天仙子采自内蒙古大青山坝口子村。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件：Kromasi -C18柱(20mm×4.6mm,5μm)，流动相甲醇-水-磷酸-三乙胺溶液(225：300： 1：1)，流速1mL·min-1，温度30℃，检测波长360nm nm，进样量10μL。

2.2 对照品溶液的制备：精密称取金丝桃苷对照品适量，加甲醇制成0.058mg·mL-1的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备：取本品,粉碎，过100目筛，精密称定0.1g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL， 超声处理50min ，放冷，滤过，滤液转移至10mL量瓶内 ，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.4 专属性考察： 精密吸取甲醇金丝桃苷阴性溶剂，金丝桃苷对照品溶液，供试品溶液各10μL注入液相色谱仪，金丝桃苷对照品色谱峰峰纯度尚好；供试品溶液中色谱峰保留时间与金丝桃苷对照品一致，甲醇阴性溶剂无吸收，表明该含量测定方法专属性好，阴性溶剂无干扰，见图1。

图1 金丝桃苷色谱峰

2.5 线性关系考察：取对照品溶液为A溶液。精密吸取对照品A溶液1.0mL，加到10mL量瓶中，加甲醇稀释到刻度为对照品B溶液，分别吸取对照品B溶液1、2、4μL ，对照品A溶液1、2、4、8μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积；以峰面积为纵坐标(Y)，进样量为横坐标(X)做线性回归, 回归方程为Y = 2284159 X +58465，r=0.9999。结果表明，金丝桃苷在0.007～0.464μg范围内呈良好的线性关系。

2.6 稳定性试验：取同一份供试品溶液(叶)，分别在0，2，4，8，12h测定， RSD为0.85%。

2.7 精密度试验：吸取同一批供试品溶液(叶)，在上述色谱条件下重复测定6次，平均峰面积RSD为0.54%。

2.8 重复性试验：取同一批样品(叶)，按2.3供试品溶液制备方法制备6份样品溶液，分别测定并计算含量，平均含量为0.198%，RSD为1.37%。

2.9 加样回收率试验：取同一批已知含量的样品(叶)6份，每份取约50mg，精密称定，分别精密加入金丝桃苷对照品溶液0.5ml(0.21mg/ml)，按2.3供试品溶液制备方法制备样品溶液，同法操作，分别注入液相色谱仪测定含量，计算回收率。平均回收率为104.33%，RSD为1.85%。

3 样品测定

分别取天仙子不同要用部位，按上述方法测定。籽、花、叶、茎、根金丝桃苷含量分别<0.01%、0.198%、0.132%、0.061%、<0.01%，花、叶、茎金丝桃苷平均含量 0.130%(n=3)。

3 讨论

天仙子主要含莨菪类生物碱，其毒性取决于生物碱含量，对于其他药用部位是否含生物碱未见报道。本文通过HPLC法测定天仙子不同要用部位金丝桃苷含量，结果表明，种子与根金丝桃苷含量较低，主要集中在花叶茎部。天仙子是一个有深度开发价值的天然药材，特别是花叶茎，毒性小产量高。金丝桃苷是一类黄酮类化合物，具有多种生物活性，是目前天然药物常用的含量检测标志性化合物，金丝桃苷含量高低在一定程度上决定药材的质量。本研究结果可为天仙子的质量评价提供进一步的依据。

[1]内蒙古自治区卫生局.内蒙古中草药[M].内蒙古自治区人民出版社，1972，708-709.

2016年8月18日收稿

R291.2

B

1006-6810(2017)02-0048-01