藏药“蒂达”6种原植物抗慢性肝损伤作用比较研究

郭永强，沈 磊，杨晓泉，夏从龙

（大理大学药学与化学学院，云南大理 671000）

藏药“蒂达”6种原植物抗慢性肝损伤作用比较研究

郭永强，沈 磊，杨晓泉，夏从龙*

（大理大学药学与化学学院，云南大理 671000）

目的：比较藏药“蒂达”主要来源青叶胆等6种药用原植物对化学性肝损伤的保护效应。方法：采用四氯化碳（CCl4）造成小鼠化学性肝损伤模型，检测血清肝损伤指标来比较6种药用植物的保肝作用。结果：与模型组相比，6种药用植物均能显著性降低小鼠血清中的谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）的活性，升高总蛋白（TP）及减少总胆红素（TBI）的含量。与等剂量青叶胆相比，川西獐牙菜、椭圆叶花锚、印度獐牙菜、紫红獐牙菜和唐古特虎耳草降低ALT、AST、TBI和升高TP的能力差异无统计学意义。结论：青叶胆和“蒂达”其他来源的5种药用植物对于化学性肝损伤的保护效应差异不显著。

藏药“蒂达”；青叶胆；CCl4；保肝效应

藏药“蒂达”是一类治疗肝胆疾病药物的总称，以干燥全草入药，具有清热利胆、强心、舒肝健胃、解毒等功效，是治疗热症、肝胆病及血液病的常用药物〔1〕。“蒂达”是藏茵陈片（胶囊）、肝泰舒胶囊、急肝宁、乙肝宁A、B片、藏降脂胶囊、流感丸等多种中成药的原料〔2-3〕。但是“蒂达”存在品种繁多，基原复杂，临床用药混乱，没有系统的质量标准等问题，根据前期在云南、四川、西藏等地的民间、药厂和药材市场调查得知，蒂达主要来源于龙胆科獐牙菜属植物，目前市场上流通的主流品种为：青叶胆Swertia mileensis、印度獐牙菜Swertia chirayita（Roxb.ex Flemi）Karsten、川西獐牙菜Swertia mussotii、紫红獐牙菜Swertia punicea、椭圆叶花锚Halenia elliptica和唐古特虎耳草Saxifraga tangutica 6个种，其中青叶胆为自1974年版及以后的历版中国药典收载。本研究选择上述“蒂达”6种药用原植物进行抗慢性肝损伤作用比较研究，为扩大资源、保障临床用药安全提供理论依据。

1 材料与仪器

1.1实验动物昆明种小鼠180只，体重16～22 g，雌雄各半，由昆明医科大学实验动物中心提供，动物许可证号：SCXK（滇）2011-0004。

1.2仪器冷冻干燥机（FD-1C-80，北京博医康实验仪器有限公司）；旋转蒸发仪（RE-2000，上海亚荣生化仪器厂）；循环水式真空磊（SHZ-D（Ⅲ），巩义市矛华仪器有限责任公司）；3-15型台式高速离心机（Sigma公司）。

1.3药品及试剂四氯化碳（CCl4）分析纯（汕头市西陇化工厂有限公司）；联苯双酯（浙江万邦药业股份有限公司，批号：A02131017）。

除唐古特虎耳草来自西藏外，其他5种药材均来自云南，由大理大学夏从龙教授鉴定。将药用植物粉碎，称取粗粉1 kg，蒸馏水热浸提取5次，过滤，合并滤液并离心，旋转蒸发仪浓缩上清液，冷冻干燥，得到药物干燥粉末，密封保存。青叶胆1 g干燥粉末相当于6.0 g生药，紫红獐牙菜1 g干燥粉末相当于6.5 g生药，椭圆叶花锚1 g干燥粉末相当于7.0 g生药，唐古特虎耳草1 g干燥粉末相当于7.5 g生药，川西獐牙菜1 g干燥粉末相当于7.0 g生药，印度獐牙菜1 g干燥粉末相当于5.5 g生药。给药前用生理盐水配制成所需浓度，药物剂量以g生药/kg表示。以上6种蒂达高、低剂量组剂量分别为3.0、1.5 g生药/kg。

2 方法

2.1分组及实验方法将180只小鼠按体重随机分15组（每组雌雄各半），分别为正常组、模型组，阳性药联苯双酯组（0.1 g/kg），青叶胆、紫红獐牙菜、椭圆叶花锚、唐古特虎耳草、川西獐牙菜、印度獐牙菜的高（3.0 g/kg）、低剂量（1.5 g/kg）组。除正常组给等体积生理盐水外，其余各组均皮下注射20%CC140.02 mL/10 g，每3 d 1次，连续5周。造模同时给药，除正常组和模型组灌胃等体积生理盐水外，其余各组灌胃给予相应的药物，每天1次，连续5周。末次给药后对各组小鼠禁食不禁水，24 h后眼内眦静脉丛取血，静置4 h后3 000 r/min离心10 min，分离血清。将血清送至大理白族自治州人民医院检验谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总蛋白（TP）及总胆红素（TBI）。

2.2统计学处理应用SPSS 17.0软件进行统计学处理，数据用（xˉ±s）表示，计数资料组间差异比较使用非参数t检验。

3 结果

对于CCl4诱导的小鼠慢性肝损伤实验中，模型组ALT、AST含量明显升高，与正常组比较差异具有统计学意义（P<0.01），说明造模成功。与模型组比较，阳性药组、青叶胆、紫红獐牙菜、椭圆叶花锚、唐古特虎耳草、川西獐牙菜、印度獐牙菜6种药用原植物各高、低剂量组的ALT、AST含量均明显降低，差异具有统计学意义（P<0.01）。与阳性药组AST含量进行比较，椭圆叶花锚3.0 g/kg组含量差异具有统计学意义（P<0.05），椭圆叶花锚1.5 g/kg组和其他5种蒂达高、低剂量组的含量差异均具有统计学意义（P<0.01）。与阳性药组ALT含量进行比较，青叶胆3.0 g/kg组、椭圆叶花锚1.5 g/kg组、川西獐牙菜3.0 g/kg组和印度獐牙菜1.5 g/kg组含量差异具有统计学意义（P<0.05），紫红獐牙菜1.5 g/kg组、3.0 g/kg组、椭圆叶花锚3.0 g/kg组、唐古特虎耳草1.5 g/kg组和3.0 g/kg组的含量差异均具有统计学意义（P<0.01），青叶胆1.5 g/kg组、川西獐牙菜1.5 g/kg组和印度獐牙菜3.0 g/kg组含量差异无统计学意义（P>0.05）。与青叶胆1.5 g/kg组ALT、AST含量进行比较，紫红獐牙菜1.5 g/kg组和唐古特虎耳草1.5 g/kg组ALT、AST含量差异具有统计学意义（P<0.01）；椭圆叶花锚1.5 g/kg组和印度獐牙菜1.5 g/kg组ALT含量差异具有统计学意义（P<0.05）；川西獐牙菜1.5 g/kg组AST含量差异具有统计学意义（P<0.05）。与青叶胆3.0 g/kg组ALT含量进行比较，紫红獐牙菜3.0 g/kg组、椭圆叶花锚3.0 g/kg、唐古特虎耳草3.0 g/kg组、川西獐牙菜3.0 g/kg组、印度獐牙菜3.0 g/kg组ALT含量差异均具有统计学意义（P<0.01）；与青叶胆3.0 g/kg组AST含量进行比较，椭圆叶花锚3.0 g/kg组、唐古特虎耳草3.0 g/kg组、川西獐牙菜3.0 g/kg组、印度獐牙菜3.0 g/kg组AST含量差异均具有统计学意义（P< 0.01）。紫红獐牙菜3.0 g/kg组AST含量差异无统计学意义（P>0.05）。

对总蛋白（TP）的影响，与正常组比较，模型组TP含量降低，差异具有统计学意义（P<0.01）。与模型组比较，阳性药组、青叶胆、紫红獐牙菜、椭圆叶花锚、唐古特虎耳草、川西獐牙菜、印度獐牙菜6种药用原植物各高、低剂量组的TP含量均明显升高，差异具有统计学意义（P<0.01）。与阳性药组TP含量进行比较，青叶胆1.5 g/kg组、紫红獐牙菜3.0 g/kg组、椭圆叶花锚1.5 g/kg、川西獐牙菜1.5 g/kg组、印度獐牙菜1.5 g/kg组的TP含量差异均具有统计学意义（P<0.05），青叶胆3.0 g/kg组和唐古特虎耳草1.5 g/kg组TP含量差异均具有统计学意义（P<0.01），紫红獐牙菜1.5 g/kg组、椭圆叶花锚3.0 g/kg组、唐古特虎耳草3.0 g/kg组、川西獐牙菜3.0 g/kg组和印度獐牙菜3.0 g/kg组TP含量差异无统计学意义（P>0.05）。与青叶胆1.5 g/kg组的TP含量进行比较，紫红獐牙菜、椭圆叶花锚、唐古特虎耳草1.5 g/kg组TP含量差异具有统计学意义（P<0.01），川西獐牙菜、印度獐牙菜1.5 g/kg组TP含量差异具有统计学意义（P<0.05）。与青叶胆3.0 g/kg组TP含量进行比较，紫红獐牙菜、唐古特虎耳草、川西獐牙菜、印度獐牙菜3.0 g/kg组TP含量差异具有统计学意义（P<0.01），椭圆叶花锚3.0 g/kg组TP含量差异无统计学意义（P>0.05）。

CCl4损伤小鼠模型组血液中TBI含量与正常组相比明显升高（P<0.01），椭圆叶花锚3.0 g/kg组与模型组相比，TBI含量显著降低（P<0.01），其他组TBI含量与模型组TBI含量相比差异无统计学意义（P> 0.05），但TBI含量下降。与阳性药组TBI含量进行比较，青叶胆1.5 g/kg组、紫红獐牙菜1.5 g/kg组、紫红獐牙菜3.0 g/kg组、椭圆叶花锚1.5 g/kg组、川西獐牙菜1.5 g/kg组、川西獐牙菜3.0 g/kg组、唐古特虎耳草1.5 g/kg组、唐古特虎耳草3.0 g/kg组、印度獐牙菜1.5 g/kg组和印度獐牙菜3.0 g/kg组的TBI含量差异均具有统计学意义（P<0.05），椭圆叶花锚3.0 g/kg组TBI含量相比差异具有统计学意义（P<0.01），青叶胆3.0 g/kg组TBI含量相比差异无统计学意义（P> 0.05）。青叶胆高、低剂量组与紫红獐牙菜、椭圆叶花锚、唐古特虎耳草、川西獐牙菜、印度獐牙菜5种药用原植物各高低剂量组的TBI含量相比差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

表1 “蒂达”6种药用植物对小鼠慢性肝损伤指标的影响

表1 “蒂达”6种药用植物对小鼠慢性肝损伤指标的影响

注：与正常组比较**P<0.01；与模型组比较#P<0.05，##P<0.01；与青叶胆1.5 g/kg组比较□P<0.05，□□P<0.01；与青叶胆3.0 g/kg组比较●●P<0.01；与阳性药组比较▲P<0.05，▲▲P<0.01。

组别正常组模型组阳性药组青叶胆组低剂量组青叶胆组高剂量组紫红獐牙菜低剂量组紫红獐牙菜高剂量组椭圆叶花锚低剂量组椭圆叶花锚高剂量组唐古特虎耳草低剂量组唐古特虎耳草高剂量组川西獐牙菜低剂量组川西獐牙菜高剂量组印度獐牙菜低剂量组印度獐牙菜高剂量组TBI/（μmol/L）1.17±0.38 11.05±2.71**8.27±1.48#10.53±2.22▲9.71±2.31 10.84±2.29▲10.74±3.04▲10.11±1.91▲5.84±0.57##▲▲10.40±3.00▲10.34±1.42▲10.88±2.51▲10.32±1.69▲10.74±5.41▲10.11±2.32▲ALT/（U/L）135.00±23.69 10 778.89±2 474.60**5 045.45±861.19##5 862.00±1 222.50##6 978.08±920.43##▲9 047.30±933.53##□□▲▲7 362.00±749.04##●●▲▲6 240.01±630.14##□▲2 606.36±639.80##●●▲▲9 738.57±878.02##□□▲▲8 520.00±303.81##●●▲▲5 684.44±879.22##4 195.71±1 244.59##●●▲6 768.33±1 802.16##□▲4 900.00±1 683.07##●●AST/（U/L）34.00±5.16 13 108.75±2 766.30**1 551.82±342.75##6 396.36±1 208.46##▲▲8 359.96±1 281.43##▲▲10 051.54±1 303.21##□□▲▲8 630.00±1 267.32##▲▲6 981.25±1 434.67##▲▲2 573.00±297.99##●●▲11 172.86±884.11#□□▲▲9 006.00±948.20##●●▲▲5 326.67±1 215.71##□□▲▲4 024.28±973.87##●●▲▲6 795.00±1 846.25##▲▲4 297.50±1 131.62##●●▲▲TP/（g/L）76.57±5.84 55.80±2.44**68.13±2.49##61.98±5.27##▲58.12±8.01##▲▲72.41±7.97##□□73.99±6.77##●●▲73.38±5.39##□□▲59.45±3.88##58.63±17.47##□□▲▲65.54±3.99##●●63.00±4.08##□▲64.69±2.57##●●63.32±5.04##□▲66.76±4.37##●●

4 讨论

CCl4诱导的肝损伤是广泛应用于肝病防治药物筛选的经典模型〔2-4〕。化学性肝损伤导致肝细胞受损，使肝细胞膜通透性增强，导致存在于肝细胞内的ALT，AST通过细胞膜进入血液的量大大增加。所以血清中转氨酶水平的高低是反应肝损伤的敏感指标，可直接反应肝受损伤程度〔5〕。实验中，在成功复制化学性肝损伤的病理模型上，以药典中规定的药用植物——青叶胆为参照，评价其他5种药用原植物同青叶胆的药效等同性和差异性。“蒂达”6种植物药可以降低由CCl4导致的血液中ALT，AST升高的水平。1.5 g/kg组川西獐牙菜对ALT、AST的降酶作用效果好于青叶胆。3.0 g/kg组椭圆叶花锚、川西獐牙菜、印度獐牙菜对ALT、AST的降酶作用效果好于青叶胆。青叶胆1.5 g/kg组、川西獐牙菜1.5 g/kg组和印度獐牙菜3.0 g/kg组对于ALT的降酶作用效果和阳性药相当。

肝脏也是蛋白质合成和分解代谢的重要场所，肝脏受损时，由于其结构和功能破坏，蛋白质含量也受影响。血清总蛋白（TP）是血清白蛋白与球蛋白的总和，肝功能损伤可导致肝脏合成蛋白质的能力下降，引起低蛋白血症〔6-7〕。阳性药联苯双酯可以升高TP的含量。6种药用原植物均有升高TP的趋势。表明6种药用原植物在促进肝脏蛋白合成中起到了一定的作用。

综上所述，本实验研究青叶胆和“蒂达”其他5种药用原植物的保肝作用在化学性肝损伤的保肝效应上差异不显著，由于本研究只用了一个肝损伤模型观察，是否在其他模型上作用有差异，有待进一步研究。

〔1〕文检，张艺，刘川，等.藏药“蒂达”的基原、药性及功效的考证〔J〕.中国中药杂志，2016，41（4）：609-612.

〔2〕钟国跃，王昌华，刘翔，等.常用藏药“蒂达（藏茵陈）”的资源与使用现状调查〔J〕.世界科学技术（中医药现代化），2010（1）：122-128.

〔3〕王伟晶，白亚东，陶劲.藏药獐牙菜属植物的研究进展〔J〕.青海科技，2011（1）：18-20.

〔4〕黄铁军，余琼华，戴列军.虾青素对四氯化碳诱导的慢性肝损伤大鼠的保护作用〔J〕.实用肝脏病杂志，2014，17（4）：404-407.

〔5〕张东梅，黄欣，闫春雷，等.实验性肝损伤模型的研究进展〔J〕.中国医院药学杂志，2013，33（22）：1871-1874.

〔6〕WEN T，GUAN L，ZHANG Y L，et al.Dynamic changes of heme oxygenase-1 and carbon monoxide production in acute liver injury induced by carbon tetrachloride in rats〔J〕.Toxicology，2006，228（1）：51-57.

〔7〕卢冰贤，陈淑贞，周云英.血清前白蛋白检测在肝脏疾病诊断中的应用〔J〕.中国校医，2011，25（5）：373-374.

Comparative Study on Six Kinds of Medicinal Plants in Tibetan Medicine"Dida"on Preventing Chronic Hepatic Injury

Guo Yongqiang,Shen Lei,Yang Xiaoquan,Xia Conglong*
（College of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China）

Objective:To compare the protective effect of six kinds of medicinal plants in Tibetan medicine"Dida"on chemical hepatic injury.Methods:Carbon tetrachloride（CCl4）was used to cause chemicalhepatic injury in mice to form the modelgroup.The serum hepatic injury index was used to detected the hepatoprotective effect of six medicinal plants of liver injury induced by serum indicators to compare the effect of 6 species of medicinal plants.Results:Compared with the model group,six medicinal plants can significantly reduce serum alanine transaminase（ALT）and aspartate aminotransferase（AST）activity,and increase total protein（TP）and totalbilirubin reduction（TBI）content.Compared with equivalentdose Swertia mileensis,Swertia chirayita（Roxb.ex Flemi）Karsten,Swertia mussotii,Swertia punicea,Halenia elliptica,Saxifraga tangutica reduced ALT,AST,TBI and increased TP without significant difference.Conclusion:Hepatoprotective effect on chemical hepatic injury of Swertia mileensis and other five kinds of medicinalplants in"Dida"had no significantdifference.

Tibetan medicine"Dida";S wertia mileensis;CCl4;hepatoprotective effect

R285

A

2096-2266（2017）04-0016-04

10.3969/j.issn.2096-2266.2017.04.005

（责任编辑 李 杨）

国家自然科学基金资助项目（81260677）

2016-11-29

2016-12-20

郭永强，硕士研究生，主要从事天然药物资源调查与品质评价研究.

*通信作者：夏从龙，教授.