HPLC法测定氯霉素滴眼液含量的不确定度分析

宋增炫?陈媛?蓝红梅

[摘要] 目的 建立HPLC 法测定氯霉素滴眼液含量的不确定度分析的一般方法。 方法 建立计算氯霉素滴眼液含量的不确定度的数学模型， 找出影响不确定度的因素， 并对各个不确定度分量进行评估。 结果 计算各变量的不确定度分量，最终给出测量结果的扩展不确定度和置信水平。含量测定的标准不确定度为0.522%，扩展不确定度为1.0%。含量测定结果表示为（94.64±1.0）%，包含因子k=2。 结论 建立的不确定度评估方法适用于对HPLC 法测定的氯霉素滴眼液含量进行不確定度分析。

[关键词] 测量不确定；氯霉素滴眼液；HPLC

[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2017）05-31-04

[Abstract] Objective To establish the general method of determination of chloramphenicol eye drops by HPLC. Methods A mathematical model for calculating the uncertainty of chloramphenicol eye drops content was established. Factors affecting uncertainty was selected. The uncertainty components were evaluated. Results The uncertainty components of each variable were calculated， and the extended uncertainty and confidence level were given. The standard uncertainty of measurement was 0.522%， and the expanded uncertainty was about 1%. The results were expressed as （94.64±1）%， including factor k = 2. Conclusion The method of uncertainty evaluation is suitable for the determination of the content of Chloramphenicol Eye Drops by HPLC.

[Key words] Measurement uncertainty； Chloramphenicol eye drops； HPLC

近年来广东省省级及以上食品药品检验实验室均开展了大量的测量不确定度评定工作，但地方市级食品药品检验检测室则对测量不确定度评定工作了解不多。笔者结合日常药品检验的实际工作，对监督抽样中重点关注品种氯霉素滴眼液的含量测定进行不确定分析。食品药品检验的结论取决于测量所得到的数据或量值（测得值），显然测得值的质量优劣或可信程度至关重要。其评价指标就是测量不确定度[1]，本文根据《测量不确定度评定与表示》（JJF1059.1-2012）和《化学分析测量不确定度评定》（JJF1135-2005）中的有关规定[2-3] ，对《中国药典》2010年版氯霉素滴眼液中HPLC法测定氯霉素含量的不确定度进行分析，初步建立了适用于评估氯霉素滴眼液含量测定的不确定度方法，以控制测量结果的有效性和适宜性。

1 仪器与试药

日本岛津LC-20AT高效液相色谱仪；METTLER AG135电子分析天平；氯霉素滴眼液（规格8mL：25mg， 广东宏盈科技有限公司，批号：15042401） 氯霉素对照品（由中国食品药品检定研究院提供，批号：130555-201203。含量：99.8%）。

2 方法与结果

照《中国药典》2010年版氯霉素滴眼液项下含量测定方法[4]进行试验，规定本品含氯霉素（C11H12Cl2N2O5）应为标示量的90.0%～120.0%。

2.1 色谱条件

色谱柱：Inertsil ODS-3（5μm 4.6mm×250mm）；流动相A为含0.01mol/L庚烷磺酸钠缓冲溶液（取磷酸二氢钾6.8g，用0.01mol/L庚烷磺酸钠溶液溶解并稀释至1000mL，再加三乙胺5mL，混匀，用磷酸调节pH值至2.5）；流动相B为甲醇，按下表进行线性梯度洗脱；流速为1.0mL/min；柱温为 30℃； 进样量为10μL；检测波长为277nm。

2.2 溶液制备

2.2.1 供试品溶液（2份） 取供试品5支混匀，精密量取2mL，置50ml量瓶中，用流动相A-B（68：32） 稀释至刻度摇匀，制成每1mL中含氯霉素0.1mg的溶液，作为供试品溶液。

2.2.2 对照品溶液（2份） 精密称取氯霉素对照品10mg置100mL量瓶中，加甲醇1mL使溶解，用流动相A-B（68：32）稀释至刻度，摇匀，制成每1mL中含氯霉素0.1mg的溶液，作为对照品溶液。

2.3 测定

精密量取对照品溶液和供试品溶液各10?L注入液相色谱仪，按外标法以峰面积计算供试品中氯霉素（C11H12Cl2N2O5）的含量，并计算与标示量（2.5mg/mL）的百分比。

2.4 结果

试验结果见表2。

3 标准不确定度的评定[5-8]

3.1 对照品取样量的相对标准不确定度urel（m对）

对照品取样量m对的不确定度由天平引入，天平称量重复性不确定度查天平检定证书：RDJZ-20130301给出重复性误差为± 0.02 mg，认为矩形分布，则Urel（R1）=0.02/=0.0115。天平示值不确定度查天平检定证书：RDJZ-20130301给出示值误差为± 0.03 mg，认为矩形分布 ，Urel（R2）=0.03/=0.0173 。因称量为减重法，即2 次称量，每份对照品称量的相对标准不确定度为：

3.2 对照品溶液体积n对的相对标准不确定度urel（n对）

对照品溶液定容产生的不确定度，包括容量瓶允差、温度带来的不确定度，认为线性叠加。

3.2.1 查JJG196-2006《常用玻璃量器》检定规程，A级100mL量瓶的允许误差为±0.10mL，因历年校准结果实际误差都较小，故按三角分布考虑：

u允差（100）=0.10/=0.0408（mL）

4.2 計算测得值的合成标准不确定度

报告值的不确定度还应包含测量重复性的影响，为提高可信度，对样品平行操作6份，以贝塞尔公式计算标准差，数据见表3。

5 扩展不确定度的评估

取包含因子k=2，扩展不确定度为：U= uc测得值（c氯霉素）×2=1.0%。

6 报告

氯霉素滴眼液中氯霉素相当于标示量的含量测量结果为C=（94.64±1.0）%，k=2。

7 讨论

通过对不确定度测量的评定可帮助我们在日常检验工作中找到影响检测结果准确性的关键因素，提高我们检验结果的准确性和可靠性[11-15]。分析不确定的每一个来源，对其影响因素进行分析，结果见表3。由表3可见对照品取样量的相对标准不确定度urel（m对）是分析中不确定度的主要因素，因此，试验过程中应采用精密度高、性能佳的天平；实验室要经常对天平进行维护保养。供试品取样量的相对标准不确定度urel（V供）是第二影响因素，对吸量管、容量瓶等玻璃仪器一定要经校正后再使用，HPLC法中，仪器的进样量，流速、检测器的灵敏度、积分的准确性等均会影响测定结果，无法一一进行评估，因此，我们平时在试验中因此应加强对实验仪器的维护保养， 保持其稳定的工作状态， 同时要加强实验过程的控制，可选定一种或几种较为稳定的样品作为平时对仪器性能的监测和内控。

多参加各种实验室测试能力比对。并加强试验人员基本操作以及减少各种人为因素对结果的影响。

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（收稿日期：2016-01-04）