棕背的实验室繁育

王元智，马芹，陆涛峰，张圆圆，杨春文，陈洪岩*

(1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，哈尔滨 150000；2.牡丹江师范学院，黑龙江牡丹江 157000)

研究报告

王元智1，马芹1，陆涛峰1，张圆圆1，杨春文2，陈洪岩1*

(1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，哈尔滨 150000；2.牡丹江师范学院，黑龙江牡丹江 157000)

目的 建立棕背的实验室繁育方法，测定棕背生长和繁殖数据，为开展棕背实验动物化研究提供基础。方法 将黑龙江省牡丹江市牡丹峰林地的野生棕背引入实验室，于大型硬壁式啮齿动物负压隔离器内进行人工饲育、繁殖，测定棕背生长和繁育数据，评价棕背实验室繁育效果。结果 棕背在实验室条件下可以实现人工饲育、繁殖。妊娠率54.55%,平均妊娠期为20.4 d(18～22 d)；一个繁殖期内平均繁殖2.9次，最高繁殖次数为7次，远远超过自然条件下所统计到的繁殖次数(1～4次)；平均窝产仔数(4.3±1.22)只，单窝最高产仔数为8只；幼仔离乳率94.8%，生长发育状况良好。结论 实现了棕背的实验室繁育，测定了棕背在实验室条件下的生长和繁育数据，为棕背实验动物化打下了基础。

棕背；繁育；实验动物化

1 材料与方法

1.1 动物来源

2015年7～10月份分3批引进共116只长白山亚种的野生棕背，由牡丹江师范学院于牡丹峰林地捕获。牡丹峰林地位于黑龙江省牡丹江市郊东南，地处长白山脉和完达山脉相交的老爷岭山系，东与太平岭相接，西与张广才岭毗邻，坐标为129°52′42″E，44°21′4″N。牡丹峰海拔1008 m，总面积约400 km2，为针阔混交林型，是天然次生林生态系统自然保护区。

1.2 动物捕获及隔离检疫

动物通过0.3%溶敌百虫药浴5 min，驱除体表寄生虫(药液灭菌处理)，再进行隔离观察并取样检测。每只动物取咽拭子及直肠拭子于无菌生理盐水管中，设计引物进行汉坦(流行性出血热)病毒、森林脑炎病毒、普马拉病毒和淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒检测，死亡动物取血及组织进行检测。

1.3 饲育器具

负压隔离环境实验动物使用设施专用饲育室一间【SYXK(黑)2011-022】，内置4台大型硬壁式啮齿动物负压隔离器(避免动物携带未知疫病病原体扩散至环境并致工作人员感染)，其中3台用于亲代饲育，1台用于离乳子代饲育。笼盒为标准大鼠繁殖笼，木质垫料经高压灭菌，巢材为灭菌棉絮。

1.4 食性分析

采用胃内容物和粪便显微分析法分析主要食物的类别。将分别于4月、7月和10月捕获的棕背麻醉后测量体尺并解剖，取出胃内容物和直肠中的粪便，浸于70%酒精中保存。将保存的样品取出后，放入蒸馏水、甘油和乳酚为1∶1∶1的混合液中，分开至肉眼可见的颗粒，用醋酸洋红染色制成装片标本，显微镜镜检胃内容物和粪便成分。在100倍下选取10个视野统计记录植物、动物组织残片，用碘化钾染色判断种子成分，计算各成分所占比例。

1.5 饲料调配

根据GB14924.1-2001实验动物配合饲料通用质量标准、GB14924.3-2010实验动物配合饲料营养成分，以及棕背食性分析结果，配制临时饲喂饲料，营养成分为：水分7.82%，灰分7.45%，蛋白质23.09%，脂肪5.85%，磷0.78%，钙1.80%，粗纤维4.02%。维持饲料为小鼠颗粒维持饲料，每周1次胡萝卜块；生长饲料在维持饲料的基础上每周添加1次松籽；繁殖饲料为小鼠颗粒维持饲料，每日添加胡萝卜块、松籽、拌有鸡蛋的软料，每周补充维生素合剂。

1.6 环境控制与饲养管理

饲育室执行GB14925-2010实验动物环境及设施，全年温度控制在(22±1)℃，湿度控制在60%～80%，光照周期16L∶8D，明期开始于每天2:00，am。饲养管理同清洁级小鼠饲养管理，动物自由采食及饮水，每周更换2次垫料，换下的笼盒、饮水瓶、垫料高压灭菌后再清洗。工作人员着无菌防护服，防止未知传染源传染。

1.7 饲育繁殖方法

2 结果

2.1 检测

2.2 毛色观察

2.3 行为观察

2.4 食性分析

图1 棕背毛色观察Fig.1 Observation of the Myodes rufocanus coat color

图2 棕背喜食食物的类别分析Fig.2 Analysis of the diet type of Myodes rufocanus

2.5 生长情况

在生物学研究中，经常使用体重与身体大小指数(长轴)建立评估生理、营养状况的指数，国内一般将这类指数称为肥满度。一般认为，同样身体大小(长轴)的个体中，体重越大的个体生理和营养状况越好，其肥满度值也就越高[17]。肥满度的计算采用公式：

式中：K为肥满度；W为体重(g)；L代表体长(cm)，计算实验室条件下，雌性成年棕背的肥满度为2.20 g/cm3，雄性成年棕背的肥满度为2.24 g/cm3，略小于相同季节野生成年棕背的平均肥满度(雌性2.79 g/cm3，雄性2.83 g/cm3)[18]。

注：野生棕背各年龄组体重引自参考文献[6]图3 棕背生长曲线Note. The body weight of wild Myodes rufocanus was cited from reference [6]Fig.3 Growth curves of the Myodes rufocanus

2.6 繁殖情况

图4 各月产仔总量Fig.4 The amount of birth in each month

3 讨论

动物的育肥状况除了与食物条件有关外，与气候因素也有一定的关系。野外气温较低，动物需要增加脂肪、体重、减少热量散失，以适应寒冷的环境。本研究发现，经过人工饲养的棕背在体重和体长的指标上均超过了野生状态下的棕背，而在肥满度的指标上却略低于野生棕背，表明人工饲养的棕背在体型大小上较野生棕背有明显增加，而在体脂的积累上并没有明显增加，这种现象跟所处的环境有直接的相关性。实验室条件下，充足的饮食和恒定的温度、湿度环境，使得棕背不再需要自身储存过多能量抵御寒冷。同时，也说明人工饲养条件能够满足棕背的生理需要，也能使棕背发挥出最佳的生产性能。

另外，在实际操作中，本研究参与人员也开展了尾静脉血液采集、被毛采集、腹腔注射、眼球采血等实验操作，在浅度麻醉与适度保定条件下，相关操作均能正常开展，说明野生棕背经实验室驯化后可以作为实验动物开展相关研究工作。

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A standardized breeding study of gray red-backed voles(Myodesrufocanus)in the laboratory

WANG Yuan-zhi1, MA Qin1, LU Tao-feng1, ZHANG Yuan-yuan1, YANG Chun-wen2, CHEN Hong-yan1*

(1. State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150000, China; 2.College of Life Science and Technology, Mudanjiang Normal University, Mudanjiang 157000)

Objective To establish a breeding method ofMyodesrufocanusin the laboratory, collect their growth and reproduction data, and provide a basis for carrying out the experimental animalization.Methods WildMyodesrufocanuscaught in the Moranbong woodland were brought back to the laboratory. They were bred artificially in a large hard wall rodent negative pressure isolator. Their growth and reproduction data were recorded for evaluating the results of breeding. Results TheMyodesrufocanuswere successfully bred in the laboratory. The pregnancy rate was 54.55%.The average pregnancy length was 20.4 days(8 to 22 days). During one breeding period,they gave birth 2.9 times on average. The maximum number of births was 7 times,far more than the number tested under field conditions.The average litter size was 4.3±1.22. The highest litter number of a single nest was 8. The weaning rate of pups was 94.8%. The growth and development of pups were good. Conclusions The breeding method forMyodesrufocanusis established. The growth and reproduction data are tested too. The results of our study laid a foundation for the experimental animalization ofMyodesrufocanus.

Myodesrufocanus; Breeding; Experimental animalization

CHEN Hong-yan, E-mail: chenhongyan@caas.cn

哈尔滨市实验动物质量检测平台(编号：2014QA3BN002)；国家科技支撑计划(编号：2015BAI07B02-02)。

王元智(1991-)，男，硕士研究生，专业：兽医学。E-mail: 282216566@qq.com

陈洪岩(1963-)，男，研究员，研究方向：实验动物与比较医学。E-mail： chenhongyan@caas.cn

Q95-33

A

1005-4847(2017) 02-0169-05

10.3969/j.issn.1005-4847.2017.02.010

2016-12-21