清热败毒散的解热、抗炎及体外抑菌作用研究

2017-05-17宋志元孙雪峰梁群超梁留川张要齐

中兽医学杂志 2017年2期

关键词：家兔沙门氏菌黄芩

刘炜,崔敏,宋志元,孙雪峰,梁群超,储君,梁留川,张要齐*

（1.郑州市动物疫病预防控制中心，河南郑州 450016；2.新郑市科学技术局，河南新郑 451199；3.河南惠通天下生物工程有限公司，河南新郑 451162）

清热败毒散的解热、抗炎及体外抑菌作用研究

刘炜1,崔敏2,宋志元3,孙雪峰3,梁群超3,储君3,梁留川3,张要齐3*

（1.郑州市动物疫病预防控制中心，河南郑州 450016；2.新郑市科学技术局，河南新郑 451199；3.河南惠通天下生物工程有限公司，河南新郑 451162）

为了评价清热败毒散的解热、抗炎和体外抑菌作用，采用家兔蛋白胨发热法，小鼠耳廓二甲苯致炎法和体外二倍稀释法，观察清热败毒散的解热、抗炎和体外抑菌作用。结果显示，清热败毒散高、中、低剂量组的家兔体温变化明显，4 h时达到正常体温水平，明显优于阴性对照组和阳性对照组（P＜0.05）；清热败毒散高、中和低剂量组的肿胀抑制率分别为38.2%、32.3%和19.6%，高和中剂量组达到了氢化可的松的抑制效果；清热败毒散对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的MIC分别为0.031 g/mL、0.063 g/mL和0.125 g/mL，对大肠杆菌的抑制作用最强。表明清热败毒散具有良好的解热、抗炎和体外抑菌作用。

清热败毒散；解热；抗炎；体外抑菌

清热败毒散是以中医辨证施治为原则，通过现代药理学技术研制的一种中药复方制剂，由板蓝根、金银花、鱼腥草、黄芩等多味中药组成，主要用于细菌、病毒等引起的猪温热病的防治。本文采用家兔蛋白胨发热法，小鼠耳廓二甲苯致炎法和体外二倍稀释法，考察了清热败毒散的解热、抗炎及体外抑菌作用，为清热败毒散的临床应用提供依据。

1 材料

1.1 药物

清热败毒散，由河南惠通天下生物工程有限公司制备。

阿司匹林片，拜耳医药保健有限公司生产，规格100 mg/片，批号2015070412。氢化可的松注射液，山西兆益生物有限公司生产，规格20 ml: 100 mg，批号201511232。

1.2 试验动物

家兔和昆明种小鼠均来自河南省实验动物中心。

1.3 菌种

大肠杆菌（CVCC 2801）、沙门氏菌（CVCC 1803）、金黄色葡萄球菌（CVCC 1883）均购自中国兽医微生物菌种保藏中心。

2 方法

2.1 中药提取

称取清热败毒散100 g，浸泡1 h，慢火水煎2次，每次煎煮30 min，合并2次煎液，低速离心浓缩定容至 100 mL，相当于 1 g生药 /mL，用NaHCO3溶液调pH至7.0，经高压灭菌、分装，于4℃保存备用。

2.2 清热败毒散的解热作用[1]

2.2.1 家兔预处理

家兔40只，雌雄各半，雌者无孕，平均体重为2.0±0.2 kg。在给药前，每隔1 h测量一次体温，共测量4次。每次体温均在38.0℃～39.6℃的范围内，且最高和最低的体温差不超过0.4℃，各兔之间的体温相差不超过1℃。家兔耳静脉注射过滤灭菌蛋白胨生理盐水溶液，剂量为1 mL/kg。观察家兔体温变化，每1 h记录1次。选取注射1 h后体温上升超0.5℃的家兔作为试验用兔。

2.2.2 家兔的分组与给药

将家兔随机分成5组，每组6只。阴性对照组分别灌服8 mL的生理盐水作为对照。阳性对照组分别灌服8 mL阿司匹林水溶液（浓度为25 mg/mL，给药量为100 mg/kg体重）。试验组为清热败毒散组，分为高、中、低剂量组，分别灌服1、4、8 mL不同浓度的清热败毒散水煎液（给药量分别为0.5、2.0、8.0 g/kg体重）。给药后0.15h、1h、2h、3h、4h各测体温一次，观察药物对发热兔的解热效果。

2.3 清热败毒散的抗炎作用[5]

2.3.1 小鼠分组及给药

取昆明种小鼠50只，体重为18～22 g，分为5组，雌雄各半。3个试验组分高、中、低剂量组，3个剂量组的给药量分别为 0.5 g/kg、2.0 g/kg、8.0 g/kg体重，氢化可的松对照组腹腔注射氢化可的松，给药量为0.005 g/kg体重，阴性对照组灌服同体积的生理盐水作为对照。以上各组剂量每日分两次给药，间隔5 h，连续3天。

2.3.2 检测指标

于末次给药1.5 h后，分别将每只小鼠右耳外侧均匀涂抹二甲苯0.2 mL，左耳不涂。致炎后20 min将小鼠拉颈处死，用8 mm打孔器迅速在两耳相同部位打下耳片，精确称重，按照以下公式计算鼠耳肿胀度、耳肿胀率和肿胀抑制率。

耳肿胀度=左耳重量-右耳重量

2.4 清热败毒散的体外抑菌作用[6]

2.4.1 牛肉膏汤液体培养基的制备

称取牛肉膏0.3 g，蛋白胨1.0 g，氯化钠0.5 g。放入烧杯内，加少量蒸馏水加热熔化后，再加蒸馏水至100 mL，用0.5 mol/L的氢氧化钠调节pH值到7.2～7.6，过滤，121℃，高压灭菌30 min。

2.4.2 药物液体培养基的制备

取灭菌试管8只，依次编号，排列于试管架上。在超净工作台内，按无菌操作原则，用移液管吸取无菌生理盐水加入各试管，每管2 mL，再吸取清热败毒散水煎液（1 g生药/mL）2 mL加入第1管，反复吹吸；从第1管吸出2 mL放入第2管，吹匀；又从第2管吸出2 mL放入第3管。依此法逐管按二倍稀释至第7管，从第7管吸取的2 mL溶液弃去，第8管作为对照管。第1管到第7管药液依次被稀释成 2、4、8、16、32、64、128倍，即浓度分别为0.50、0.25、0.125、0.063、0.031、0.016、0.008 g/mL。

2.4.3 菌株的接种与培养

将大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌接种于肉汤培养基中在37℃培养箱内培养16～18 h，取出后用麦氏比浊管确定各试验用菌的近似浓度。根据所得浓度，用灭菌生理盐水将各个试验用菌稀释到大约1×106CFU/mL。每种菌株稀释液均接种于含有不同浓度药物的试管和对照管，每管0.1 mL，接种好后置37℃培养箱内培养24 h取出，观察不同细菌在不同浓度的药物试管中的生长情况。使细菌不生长的最低药物浓度即为药物对该菌株的MIC（最小抑菌浓度）。

3 结果与分析

3.1 清热败毒散的解热作用情况

给药后体温变化为家兔实时体温与家兔正常体温的差值。由表2-1可知，与阴性对照组相比，阿司匹林组和清热败毒散组有明显的解热作用，且清热败毒散的解热作用明显优于阿司匹林，但清热败毒散高、中、低剂量组之间的解热作用差异不明显。结果说明清热败毒散具有较好的解热作用。

3.2 清热败毒散的抗炎作用情况

由表2-2可知，清热败毒散高、中、低剂量组与阴性对照组相比差异显著（P＜0.05），且高和中剂量组明显优于低剂量组（P＜0.05）；清热败毒散高和中剂量组与氢化可的松对照组相比差异不明显（P＞0.05），但氢化可的松对照组明显优于低剂量组（P＜0.05）。结果表明清热败毒散可显著抑制鼠耳肿胀，达到与氢化可的松相同的抑制效果，其肿胀抑制率分别为38.2%、32.3%、19.6%，说明清热败毒散具有较强的消炎作用。

表2-2 清热败毒散对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响

表2-1 清热败毒散对家兔的解热作用

3.3 清热败毒散的体外抑菌作用情况

由表2-3可知，清热败毒散对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌均有一定的抑制作用。其中，清热败毒散对大肠杆菌的抑制作用最强，其最小抑菌浓度为0.031 g/mL；清热败毒散对沙门氏菌的抑制作用较弱，其最小抑菌浓度为0.125 g/mL。

表2-3 清热败毒散对各菌株的最小抑菌浓度

4 讨论和小结

传统中医理论认为“热毒”是由火热壅盛所致，主要体现在温热病和热毒炽盛症，皆为里热。现代研究认为，发热主要是外源性致热原作用于体内内生致热原细胞产生并释放内生致热原（EP）而致。EP是多种致热性细胞因子，其作为发热信息可直接或间接作用体温调节中枢，导致下丘脑中枢性发热介质的释放，进而引起温度敏感神经元的兴奋性改变，使体温调定点上移，产热增加，散热减少而发挥致热作用[7]。

清热败毒散多由清热类中药组成，具有解热、抗炎、抗菌和抗病毒等药理作用。清热解毒类中药的药理作用主要包括抗病原微生物作用，抗细菌内毒素作用，抗炎作用，对免疫功能的影响[5]。板蓝根提取物中酸性、中性和两性化合物抗炎作用不明显，而碱性化合物具有明显的抗炎作用[8]，其发挥清热解毒功效的有效成分主要为生物碱类、有机酸类、结合性氨基酸类和多糖类，它们通过调节不同机制和不同途径相互协调，共同发挥作用[9]。金银花具有清热解毒、凉散风热之功效，富含挥发油，还有黄酮类、三萜类及有机酸等[10]。有研究表明，金银花的解热机制可能与逆转致热原引起的温度敏感神经元放电频率的改变有关[11]。黄芩含有黄芩素和黄芩苷，具有抗菌抗病毒作用和解热镇痛抗炎作用。黄芩素是体内的有效成分，在血液中迅速转化为黄芩苷及其他代谢物；而黄芩苷口服不易吸收，其在肠道经酶水解为黄芩素后方可吸收入血，并在体内也迅速转变为黄芩苷[12]。鱼腥草含黄酮类化合物、挥发油和有机酸等[13]，研究表明鱼腥草也具有解热抗炎[14]和抗菌抗病毒的作用[15]。中草药的抑菌机理目前尚未完全明了，体内外抗菌效果可能不一致，体外抑菌试验对中草药的抗菌作用只能是一种参考型方法，还需通过临床试验加以比较、验证。

中药讲求的是药物的组方配伍，中药单味药的功用各有所长，也各有所偏，通过合理的配伍可以增强其原有的功用。本试验研究表明，清热败毒散具有较好的解热、抗炎和抗细菌作用，为其临床应用提供依据。

综上，清热败毒散的高、中和低剂量有较好的解热作用；高和中剂量具较强的抗炎作用，低剂量有一定的抗炎作用；体外抑菌试验表明清热败毒散对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌均匀抑制作用，由强到弱依次为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌。

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