多胎多浪羊群胚胎移植扩繁试验

张国庭，霍 飞，王辽远，斯依提，申明明，陈静波*（新疆畜牧科学院畜牧研究所，新疆 乌鲁木齐 830000；新疆喀什地区畜禽繁育改良站，新疆 喀什 844000）

多胎多浪羊群胚胎移植扩繁试验

张国庭1，霍 飞1，王辽远2，斯依提2，申明明2，陈静波1*
（1新疆畜牧科学院畜牧研究所，新疆 乌鲁木齐 830000；2新疆喀什地区畜禽繁育改良站，新疆 喀什 844000）

（目的）绵羊多胎基因在多浪羊品种群体中携带率较低，为增加携带多胎基因多浪羊群的数量，提高多浪羊的繁殖率和养殖效益，本试验选择携带多胎基因的多浪羊作为供体进行了胚胎移植扩繁试验。（方法）选取经检测携带有多胎基因的种公羊4只、母羊19只，通过同期发情、超数排卵和手术法采卵，腹腔镜移植技术给普通生产群的多浪羊受体移植。（结果）供体平均生产可用胚胎9.26枚（176/19），鲜胚移植受胎率为59.5%，另外制作A级冷冻胚胎57枚。（结论）结果表明胚胎移植技术能够有效地用于携带有多胎基因羊繁殖生产，达到迅速扩群的目的。

多浪羊；多胎基因；胚胎移植

10.16863/j.cnki.1003-6377.2017.02.005

多浪羊体格大，肉用型明显，体质结实，具有增重快、羔羊可当年育肥出栏的优良特性，还具有耐干旱、耐热、抗逆性好、抗病力强、适应性好等特点，并对荒漠化、半荒漠化恶劣生态环境具有较好的适应性；其所产羊肉色泽纯正，肉质鲜嫩多汁，无膻味，营养价值高[1]。多浪羊是新疆优秀的地方良种肉用羊品种，但是双羔率相对较低,作为肉羊品种产生的经济效益受到限制。

BMPR-IB基因在多胎多浪羊中存在3种基因型：野生型++，突变杂合型B+和突变纯合型BB；基因型频率分别为：++基因型0.741，B+基因型0.254，BB基因型0.005；等位基因频率B和+分别为0.132和0.868［2］。B+和BB基因型比例高，多浪羊产羔数增加，反之，产羔数减少。用多胎多浪羊种群进行羊肉生产，以可提高母羊的繁殖率，减少饲养繁殖母羊的数量；因此多胎多浪羊具有良好的发展前景。

新疆畜牧科学院畜牧研究所一直从事马、牛、羊等家畜胚胎移植［2］，本次试验旨在将胚胎移植技术应用于多胎多浪羊繁殖生产，以达到迅速扩繁多胎多浪羊群的目的

1 材料与方法

1.1试验动物

选取通过基因检测携带有多胎基因的多浪羊母羊19只为供体，其中纯合子母羊2只，杂合子母羊17只，年龄为1.5岁至2.5岁；通过基因检测无多胎基因的150只多浪羊生产母羊为受体，所选羊只健康，无传染病和繁殖疾病。

1.2 公母羊饲养管理

公羊饲喂混合精料量为玉米800 g、豆粕600 g、70 g预混料和食盐15 g，分早晚两次饲喂，苜蓿干草和麦草自由采食，鸡蛋4个，胡萝卜1 kg，分早晚两次饲喂，自由饮水。

供体母羊饲喂混合精料量为玉米800 g、麸皮200 g、50 g预混料和食盐10 g，分早晚两次饲喂，麦草自由采食，中午自由采食苜蓿干草，自由饮水。

受体母羊饲喂混合精料量为玉米300 g、麸皮100 g，分早晚两次饲喂，麦草自由采食，自由饮水。

1.3 试验药品和仪器

氯前列烯醇（PG-cl）和促排-3号（GnRH analogy）激素药品均由宁波三生药业公司生产;促卵泡素（FSH）有两种，一种为宁波三生药业公司生产，另一种为加拿大生产，已过期，冷冻保存。

B超仪为日本Aloka SSD-500B-型超声波诊断仪，5.0MHZ线阵探头；内窥镜由德国生产。

1.4 处理方法

供体发情后9~12 d开始超数排卵。10只供体用加拿大生产冷冻保存的过期药品FSH1.2倍剂量超排（总剂量12 mg），9只供体用宁波三生药业生产的FSH1倍剂量超排（总剂量10 mg）。发情后12 h公羊首次配种，同时注射促排-3号12.5 mg，再间隔12 h公羊第二次配种。发情当日为第0 d，第6 d冲胚胎移植。

1.5 数据统计分析

各数据之间差异显著性检验采用SPSS13.0统计软件进行，试验数据结果均用平均值±标准差表示。

2 结 果

获得可用胚胎176枚，鲜胚移植119只受体，冷冻胚胎 57枚，平均出可用胚胎9.26枚，移植妊娠率59.50%。

2只纯合子母羊体况瘦弱，未冲出可用胚胎。

加拿大生产冷冻保存的过期药品FSH1.2倍剂量和宁波三生药业生产的FSH1倍剂量超排效果见表1。

表1 不同激素的超排效果

不同体况供体超排后黄体与冲出可用胚胎数比较结果见表2。

表2 不同体况供体超排效果

供体年龄对超排效果的影响见表3。

表3 年龄对超排效果的影响

供体体重对超排效果的影响见表4。

表4 供体体重对超排效果的影响

3 讨 论

3.1 多浪羊携带有多胎基因可能是影响超排效果的因素之一

大量的生产实践证明，绵羊经过同期发情超数排卵后，每只供体平均冲出可用胚胎5~7枚。2011年，在新疆温宿县每只黑萨福克羊平均冲出可用胚胎7.5枚，2012年，在新疆阿勒泰每只阿勒泰羊平均冲出可用胚胎5.3枚，2014年，在新疆伊吾县每只黑头杜泊羊平均冲出可用胚胎6.2枚。本次试验中，每只携带有多胎基因的多浪羊供体平均冲出可用胚胎9.26枚，较以往超排获得较高的出胚率。供体绵羊冲出可用胚胎的数量受到多种因素的影响，诸如营养状况、年龄和公羊精夜品质等，携带有多胎基因是否是影响超排效果的因素有待于进一步验证。

3.2 多浪羊母羊携带有纯合子基因可能影响体况

通过基因检测所选19只多浪羊供体母羊，2只携带有纯合子基因，其余的携带有杂合子基因。2只纯合子基因母羊，1只1岁，1只2岁。在同一羊群同样饲养管理条件下，2只纯合子母羊身体瘦弱，超数排卵后未冲出可用胚胎，其余杂合子母羊体况明显优于2只纯合子母羊，且每只杂合子母羊均冲出可用胚胎。本次试验中，由于携带有纯合子基因母羊数量少，携带有纯合子基因是否是影响母羊体况和超数排卵效果的一个因素有待于在以后的试验中继续验证。

3.3 不同来源激素和超排剂量影响超排效果

本次试验中，宁波三生药业生产的FSH1倍剂量相较加拿大生产冷冻保存的过期药品FSH1.2倍剂量超排生成平均黄体数和平均可用胚胎数分别提高1.34和1.61。此次试验表明，FSH过期后在冰箱中冷冻保存，虽然仍具有良好的药效，但是效力有所下降，超排后生成黄体数和可用胚胎数有所降低，从生产胚胎的效益和超排药物的经济成本核算来看，在超数排卵、胚胎移植中尽量避免使用过期超排药品，而在生产中为充分利用药品，可用过期超排药品治疗家畜卵巢静止、排卵延迟等卵巢疾病，诱导家畜发情。

3.4 母羊体况影响超排效果

在胚胎生产、胚胎移植中供体母羊在不同的饲养管理条件下体况差异较大，即使在相同的饲养条件下，不同个体间体况也有差异。从本次试验可以看出，体况良好和中等的母羊与体况较差的母羊生成黄体数和出胚胎数差异显著。膘情良好、膘情中等和膘情差的母羊生成黄体数和生产可用胚胎数分别为19.22±6.61和12.44±7.32，15.80±5.54和10.00±4.74，8.60±2.97和2.80±4.65。母羊膘情好，出可用胚胎数多，母羊膘情差，出可用胚胎数少。当母羊膘情处于中等以下水平时，冲不出胚胎的母羊比例大幅增加，胚胎生产成本相对增加。供体母羊每做一次冲卵手术，子宫粘连的几率增加，影响下次冲卵手术，因而母羊膘情较差时不建议做超数排卵和胚胎移植。

3.5 母羊年龄影响超排效果

本次试验中，青年母羊和成年母羊通过超数排卵后生成的黄体数和获得可用胚胎数分别为14.92± 7.71，8.00±7.31和15.16±5.04，12.00±6.35。成年母羊较青年母羊平均每只可用胚胎数增加4枚，在胚胎生产中对供体羊年龄的选择具有指导意义。动物对激素的敏感性随着年龄的增长而提高，但是高龄动物超排效果较差[5]。丁红[6]等研究显示，母羊在2.5～4.5岁之间，随着年龄的增长可用胚数增加。。洪琼花[7]等用3／4剂量的FSH相同的超排方案对育成羊进行超排，结果显示，经产羊平均回收胚胎数明显高于育成羊。周岁龄德国美利奴羊对超排敏感，较成年羊超排效果略差[8]。体内胚胎生产中经常遇到一种现象，青年母羊冲出未受精卵和退化胚胎较多，而成年母羊冲出未受精卵和退化胚胎较少，可能原因是外源激素更易扰乱青年母羊生殖激素水平，而对成年母羊影响较小，因而成年母羊更易提供胚胎发育的良好条件。

3.6 母羊体重影响超排效果

相同的饲养管理条件下，通常成年母羊体重大，体况好，青年母羊体重小，体况稍差，通常情况下，个体体重与体况呈正相关关系。青年母羊摄取的营养物质一部分用于自身的生长需要，一部分用来维持体况，因而青年母羊体况稍差。同时，成年母羊有稳定的激素水平，因而超数排卵后获得可用胚胎较多。

3.7 营养状况影响超排效果

经过近些年来多批次超排羊出胚胎的结果来看，供体母羊在良好的营养状况时出胚胎数量多，质量好，在低营养状况时，出胚胎数量少，质量差；在超数排卵前供体注射适宜剂量的维生素ADE和亚硒酸钠维生素E有助于胚胎数量和质量的提高。王峰等在2003年做不同营养状况下的牛超排试验，供体牛第一组259头，饲喂青干草和每天补饲精料4 kg；第二组238头，饲喂低营养的玉米秆，每天补饲只有2 kg左右。结果表明：第一组的平均可用胚数(5.90±3.01)枚，第二组平均可用胚数(3.48±2.97)枚，两者之间差异极显著(P＜0.01)[4]。

本次试验提示，体况好、体重大的成年母羊较体况差、体重小的青年母羊经超数排卵后获得较多的可用胚胎；在胚胎生产中应选用保存良好的未过期超排药品；超数排卵、胚胎移植技术能够迅速增加多浪羊多胎多羔基因，达到迅速扩群的目的。

[1]金森.多浪羊细管冷冻精液和超数排卵的研究[D]．乌鲁木齐：新疆农业大学硕士学位论文，2008.

[2]王旭.多胎多浪羊及其F1高繁殖力候选基因研究[D]．乌鲁木齐：新疆农业大学硕士学位论文，2010.

[3]龚成润．新疆畜牧科学院志[M]．乌鲁木齐：新疆人民出版社，1992．

[4]王峰，黄春华，张东，等.多种因素对牛超数排卵效果影响的研究[J]．中国农学通报，2013，（17）：19-24.

[5]李建栋，柏学进，吴铁荣，等．浅析影响奶牛超排效果四项因素的研究[J]．养殖技术顾问，1997，(03)：7-9．

[6]丁红，玛依拉，杨冬梅，等．促卵泡素和年龄对绵羊超数排卵效果的影响[J]中国畜牧杂志，1998，（03）：18-20．

[7]洪琼花，邵庆勇，马兴跃，等．山羊超数排卵与胚胎移植技术的研究与应用[J]．生物技术通报，2004，(4)：39～43．

[8]阿依努尔·亚森，董红，陈静波，等.胚胎移植在德国美利奴青年羊应用的初步研究[J].草食家畜2012，（4）：34-36.

Embryo Transfer in Dao-lang Sheep

ZHANG Guo-ting1,HUO Fei1,WANG Liao-yuan2,SIYITI2,SHEN Ming-ming2,CHEN Jing-bo1*
（1.Institute of Animal Science,Xinjiang Academy of Animal Science,Urumqi 830000,China;
2.Kashgar Livestock and Poultry Improvement Station,Kashgar 844000,China）

（object）The multiple-fetus gene of sheep has low carrying rate in dao-lang sheep breeds population,，In this study,dao-lang sheeps carrying multiple-fetus genes were selected as donor to carry out embryo transfer and propagation experiments to increase the number of dao-lang sheep group carrying multiple-fetus genes and,Improve the reproduction rate of dao-lang sheep and Breeding benefits,（method）Four rams and 19 ewes with multiple-fetus genes were selected by gene testing.Ovums obtained by Synchronous estrus and superovulation was transferred to dao-lang sheep recipients.in common yielding group by surgery collecting oyums and Laparoscopic transplantation technique.(Results)Average Donor producted 9.26 (176/19)embryos,The Pregnancy,rate of fresh embryo transfer was 59.5%,and 57 A-grade frozen embryos was producted.（conclusion）The result shows that the embryo transfer technique can be effectively applied in breeding production of sheep with multiple-fetus genes To achieve the purpose of rapid expansion group.

duo-lang sheep；multiple-fetus gene;embryo transfer

S814.8

A

1003－6377（2017）02－0023-05

新疆农财项目（2013年）“多浪羊多胎（多羔）新品系培育联合育种计划”

张国庭（1976-），男，助理研究员，硕士，主要从事家畜繁殖与胚胎工程研究。E-mail:zhangguoting3@sina.com

陈静波（1956-），男，研究员，博士，主要从事家畜繁殖研究。E-mail:chenjb126@126.com

2016-12-11，

2017-01-17