2016年245个规模猪场7种病毒类疾病病原流行病学调查与2017年防控建议

夏 伟，牟 迪，唐志芬，马迪杨，张宇辉，朱庆虎，袁 远，熊永忠

（哈尔滨维科生物技术开发公司，黑龙江 哈尔滨 150069）

猪病防制与保

2016年245个规模猪场7种病毒类疾病病原流行病学调查与2017年防控建议

夏 伟，牟 迪，唐志芬，马迪杨，张宇辉，朱庆虎，袁 远，熊永忠

（哈尔滨维科生物技术开发公司，黑龙江 哈尔滨 150069）

2016年1—12月份，哈兽维科技术服务部检测实验室共收到来自全国245个规模猪场的692份病料（肺脏、脾脏和淋巴结等组织）样品和305份（粪便或肠道组织）样品，采用PCR和RT-PCR方法对7种病毒类疾病病原如猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）、传染性胃肠炎病毒（TGEV）和猪轮状病毒（PoRV）等进行检测。通过对检测数据进行整理和统计分析得知，CSFV阳性检出率（10/692）1.45%，PRRSV阳性检出率（166/665）24.96%，PCV2阳性检出率（210/585）35.90%，PRV阳性检出率（100/593）16.86%，PEDV阳性检出率（125/305）40.98%，TGEV阳性检出率（9/295）3.05%，PoRV阳性检出率（14/289）4.84%。其中 PRRSV、PCV2、PRV、PEDV、PoRV等5种病原检出率高，仍是危害规模猪场的主要病原。CSFV、TGEV检出率低，说明猪场控制的较好。第一、二季度保育猪慢性消瘦和呼吸道病严重病例PRRSV、PCV2检出率高，保育猪均匀度差，死淘率高。第一季度和第四季度新生仔猪暴发腹泻病例PEDV、PoRV检出率高，造成哺乳仔猪成活率下降，损失惨重。总之，2017年我国规模猪场要把PRRSV、PCV2、PRV、PEDV、PoRV等5种常见病毒类疾病病原作为防控重点，但混合感染和新毒株出现是目前疫病防控的难点，建议猪场加强疫病监测制度，优化防疫方案和避免防疫误区。

1 材料与方法

1.1 样品来源及分布

由图1可知，样品来源于全国29个省市，样品包括肺脏、脾脏和淋巴结等组织以及肠道内容物和粪便，通过调查了解猪场免疫背景和临床发病情况以及剖检典型发病猪取组织样品，-20℃冷冻送检。

图1 样品分布（圆圈代表样品来源区域）

1.2 主要试剂和仪器

PCR和RT-PCR扩增试剂盒、饱和酚、TaqDNA聚合酶、dNTPs、EB、DEP水、TRIZOL（总RNA抽提试剂，主要成分苯酚等）、DL 2 000 Marker、TaKaRa RNA PCR Kit（AMV）Ver 3.0均购自宝生物工程（大连）有限公司。生物安全柜、分析天平、高速离心机、迷你掌上离心机、涡旋振荡器、PCR扩增仪、电泳仪、电泳槽、紫外凝胶成像仪、冰箱、微波炉、水浴锅、高压蒸汽灭菌锅等。

1.3 引物设计与合成

根据 GenBank登陆的 PRRSV、CSFV、PRV、PCV2、PEDV、TGEV、PoRV的基因序列，用Oligo 6.0软件设计引物，由宝生物工程（大连）有限公司合成。引物序列见表1。

表1 用于PCR和RT-PCR反应的引物

1.4 样品处理及核酸提取

按检测需求分别对肺脏、脾脏、淋巴结样品混合，对肠内容物和粪便混合用研磨器充分研磨，利用MEM营养液进行10倍稀释，然后利用DNA和RNA提取试剂盒进行核酸抽提。

1.5 病毒核酸检测

1.5.1 PRRSV、CSFV、PEDV、TGEV、PoRV的扩增分别用BIOZOL总RNA提取试剂盒（博日公司）从病毒培养液提取总RNA为模板，采用TaKaRa One Step RNA PCR Kit（AMV）试剂盒进行RT-PCR扩增，反应条件RT：50℃ 30 min，94℃ 2 min；PCR：（94℃30 s，58℃30 s，72℃1 min）×35个循环，72℃延伸7 min，PCR产物经1.2%琼脂糖凝胶电泳鉴定。

1.5.2 PRV、PCV2的扩增 分别用天根生物科技有限公司DNA提取试剂盒，从病毒培养液提取DNA为模板，采用TaKaRa One Step DNA PCR Kit试剂盒进行PCR扩增，反应条件94℃2 min；（94℃30 s，55℃ 30 s，72℃ 1 min）×35个循环，72℃延伸10 min，PCR产物经1.2%琼脂糖凝胶电泳鉴定。

2 结果与分析

（1）2016年对29个省245个规模猪场送检692份肺脏、脾脏和淋巴结等组织样品与305份肠道内容物，粪便等组织样品，分别进行了PRRSV、CSFV、PRV、PCV2、PEDV、TGEV、PoRV等7种病原的检测。结果显示，CSFV（10/692）阳性检出率1.45%，PRRSV（166/665）阳性检出率24.96%，PCV2（210/ 585）阳性检出率35.90%，PRV（100/593）阳性检出率16.86%，PEDV（125/305）阳性检出率40.98%，TGEV（9/295）阳性检出率3.05%，PoRV（14/289）阳性检出率4.84%。7种常见感染猪的病原中PEDV、PCV2、PRRSV、PRV等4种病原检出率明显高于其他3种病原，其中CSFV检出率最低（图2）。

图2 2016年全年各常见病毒检出率统计

（2）2016年送检样品中CSFV在第一、二、三、四季度检出率分别为0.87%、1.66%、0、2.78%，检出率均较低。PRRSV在第一、二、三、四季度检出率分别为28.57%、29.17%、9.16%、28.70%，检出率较高，其中一、二、四季度检出率高，三季度明显下降。PRV在第一、二、三、四季度的检出率分别为13.67%、12.80%、5.93%、28.36%，检出率最高的季度为四季度，其次为一季度。PCV2在第一、二、三、四季度检出率分别为34.82%、51.18%、28.23%、27.37%，检出率最高为二季度，其次为一季度。4种病原PCV2检出率显著高于其他3种病原。检出率的动态变化见图3。

图3 不同季度CSFV、PRRSV、PRV、PCV2 4种病毒检出率动态变化

（3）2016年送检肠道内容物和粪便中PEDV在第一、二、三、四季度的检出率分别为46.07%、28.77%、35.71%、49.43%，检出率均较高，尤其第一和四季度检出率明显高于第二季度。TGEV在第一、二、三、四季度的检出率分别为4.88%、1.39%、7.14%、0，检出率较低。PoRV在第一、二、三、四季度的检出率分别为0、2.78%、15.79%、3.70%，检出率略高于TGEV，明显低于PEDV（图4）。

图4 PEDV、TGEV、PoRV 3种病毒检出率动态变化

（4）对166份检测到PRRSV阳性样品统计PRRSV单独感染和PRRSV与PCV2、PRV、PEDV等病原混合感染情况。其中PRRSV单一检出率为33.73%，PRRSV与PCV2混合感染检出率为42.77%，PRRSV与PRV混合感染为9.64%，PRRSV与PEDV混合感染检出率5.42%，PRRSV与PCV2、PEDV 3种病原混合感染检出率为1.20%，PRRSV与PRV、PEDV 3种病原混合感染检出率为1.80%，PRRSV与PCV2、PRV、PEDV 4种病原混合感染检出率为0.60%（图5）。

图5 2016年1—12月PRRSV与其他病毒混合感染变化

（5）对210份PCV2抗原阳性样品统计PCV2与PRRSV、CSFV、PRV、PEDV等病原混合感染情况，PCV2单独感染和PCV2与PRRSV、PRV、PEDV等混合感染情况。其中PCV2单一检出率为41.43%，PCV2与PRRSV混合感染检出率为29.52%，PCV2与PRV混合感染为16.19%，PCV2与PEDV混合感染检出率3.81%，PCV2与PRRSV、PEDV 3种病原混合感染检出率为2.38%，PCV2与PRV、PEDV 3种病原混合感染检出率为2.38%，PCV2与PRRSV、PRV、PEDV 4种病原混合感染检出率为0.48%（图6）。

图6 2016年1—12月PCV2与其他病毒混合感染变化

（6）比较2015与2016年7种病原检出率的变化显示，2015年CSFV检出率20.59%，2016年1.45%呈明显下降趋势。PRRSV检出率由2015年32.54%下降到2016年的24.96%。PCV2检出率由2016年的39.35%下降至35.90%。PRV的检出率由2015年的6.5%上升到2016年16.86%。PEDV检出率由56.38%下降至40.98%。TGEV检出率由2015年的7.04%下降到2016年的3.05%。PoRV检出率由2015年0上升到2016年的4.84%（图7）。

图7 2015年与2016年7种病原阳性检出率对比变化

3 讨论

（1）2016年通过对245个规模猪场的692份肺脏、脾脏和淋巴结等组织样品和305份粪便或肠道组织，采用PCR和RT-PCR方法对常见7种病毒类疾病病原检测和数据统计分析得知，CSFV阳性检出率（10/692）1.45%，PRRSV阳性检出率（166/665）24.96%，PCV2阳性检出率（210/585）35.90%，PRV阳性检出率（100/593）16.86%，PEDV阳性检出率（125/ 305）40.98%，TGEV阳性检出率（9/295）3.05%，PoRV阳性检出率（14/289）4.84%。其中PRRSV、PCV2、PRV、PEDV、PoRV等5种病原检出率高，仍是危害规模猪场的主要病原。CSFV、TGEV等2种病原检出率低，说明猪场控制的较好。

（2）第一、二季度对保育猪慢性消瘦和呼吸道病严重病例PRRSV、PCV2检出率高，保育猪均匀度差，死淘率高；第一季度和第四季度对新生仔猪暴发腹泻病例PEDV、PoRV检出率高，造成哺乳仔猪成活率低，损失严重。可见冬季和春季两个季节是因气温下降和昼夜温差大等环境因素导致猪体抗病能力下降容易感染PRRSV、PCV2、PEDV、PoRV等病原。所以季节来临前应加强猪场保温和强化免疫等措施。

（3）对7种病原混合感染情况可看出，PRRSV与PCV2的共感染现象最为严重，另外PCV2、PRRSV单独感染的情况也比较普遍，PCV2、PRRSV与PRV的混合感染也占有一定的比例，零星有与PEDV混合感染发生。建议猪场做好PCV2、PRRSV、PRV等3个病原的防疫工作，感染阳性场猪场引种要慎重。

（4）比较2015年与2016年7种病原CSFV、PRRSV、PRV、PCV2、PEDV、TGEV、PoRV阳性检出率，其中CSFV、PRRSV、PCV2、PEDV、TGEV等5种病原检出率下降，而PRV、PoRV等2种病原阳性检出率呈上升趋势。

（5）对检测PRRSV的样品，要求有临床症状并剖检取肺脏病变部位、脾脏和淋巴结混合作为检验样品，采用RT-PCR方法，不同引物检测能区分经典株、变异株和类NADC30株，但做数据统计时不同毒株的阳性样品均判定PRRSV阳性。从送检单位反映的信息和实验室的检测结果分析得知PRRSV的不同毒株在临床上均有致病性，生长猪感染后会表现不同程度的发烧、咳喘、消瘦、生长抑制、精神沉郁，剖检以肺脏病变为主，部分样品来自早产和正常分娩所产死胎。PRRSV导致的母猪繁殖障碍与生长猪的呼吸道病仍是临床常见的表现形式。而调查发现加强蓝耳病活疫苗和灭活疫苗科学合理使用可降低发病率。检测PRV的样品主要以发病猪脑为主，临床上表现典型神经症状，如肌肉震颤，精神沉郁，口吐白沫等哺乳仔猪和保育猪发病为主。部分猪场暴发时以母猪流产、早产、死胎等，保育猪神经症状和育成猪严重呼吸道病为典型临床表现。剖检后脑出血病变严重。选用合适的引物，通过PCR方法检测特异性好，敏感度高。检测PCV2的样品主要为淋巴结和脾脏等免疫器官为主。因PCV2感染猪体免疫器官造成白细胞水平下降，机体免疫机能下降，在临床上表现断奶后仔猪至生长猪阶段慢性消瘦、生长抑制以及与PRRSV等病毒和细菌感染增加此阶段猪死淘率。临床PCV2疫苗应用广泛，但因疫苗品质和免疫方法不正确导致免疫效果不理想，临床检出率较高。检测PEDV、TGEV、PoRV等病毒的样品只要来自腹泻猪的粪便和小肠内容物，采用RT-PCR方法检测特异，敏感，方法可靠，也可以采取胶体金的方法检测。PEDV感染发病急，传播快，哺乳仔猪死亡率高为典型特征。通过检测发现PEDV流行已经无明显季节性特征，并且临床上感染各生理阶段猪群。所以，猪场要加强群体免疫和全年免疫的理念，做好保温、消毒及营养等措施能降低发病率和发病死亡率。

4 免疫建议（仅供参考）

4.1 猪瘟兔化弱毒疫苗

种公猪/母猪一年普免3～4次，2头份/头或母猪产后21 d跟胎免疫2头份/头，仔猪28～35日龄首免2头份/头，56～63日龄二免2头份/头；后备猪配种前免疫1次，2头份/头。

4.2 猪伪狂犬病活疫苗

种公猪/母猪一年普免3～4次，2头份/头，仔猪1～3日龄滴鼻1头份/头（PRV-gE抗体阴性的猪场可不滴鼻），45～55日龄二免2头份/头，90～100日龄三免2头份/头。

4.3 猪圆环病毒2型灭活疫苗

种公猪/母猪一年普免3～4次（产前15 d至分娩慎重免疫），2 mL/头，或者母猪产前30 d，产后14 d加强免疫2 mL/头，仔猪7～14日龄首免1 mL/头，28～35日龄二免1 mL/头，断奶仔猪和保育中后期出现典型断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）问题应在发病前2～3周建立坚强免疫。

4.4 猪流行性腹泻疫苗

种公猪/母猪8月份1年普免1次，1头份/头，间隔3周加强免疫，过30 d对产前40～50 d妊娠母猪免疫1头份/头，产前20～30 d加强免疫1头份/头（建议常年跟胎次免疫），猪病毒性腹泻三联活疫苗，产前10～15 d免疫PED灭活疫苗4 mL/头，仔猪断奶时免疫1头份/头，后备猪配种前免疫2次，1头份/头，间隔21 d加强免疫。

（编辑：郭玉翠）

多年无解怪病 全因荔枝惹祸

【英国广播公司网站2月2日报道】题：印度北部儿童死亡怪症病因竟是“空腹吃荔枝”

困扰了印度北部荔枝产地的医生多年的儿童怪病，竟然是由于空腹吃荔枝引起的。都20多年了，明明健康的孩子突然就不行了，丧失知觉，其中差不多一半的孩子会丧命，让医生们不得其解。日前，科学家查明，这个神秘怪病的病根就是“空腹吃荔枝”。美国和印度的科学家从此解开了每年导致印度北部比哈尔邦超过100名孩子丧生的怪病之谜。科学家们在发表的研究报告中称，这些孩子都死于“荔枝中毒”。

虽然中国古代早有对服用荔枝的专述，尤其是对不能空腹吃荔枝的告诫。但远在印度荔枝主产区的孩子们对此一无所知。他们大多家里很穷，所以当荔枝成熟季节到来时，孩子们就疯抢着吃熟透掉在地上的荔枝。荔枝进入他们体内后，分泌的毒素抑制身体产生葡萄糖，从而给孩子们带来危害。这些穷孩子们本来身体里的血糖就低，加上通常还没吃饭，所以到晚上病发时，就会从睡梦中惊醒尖叫。发病的孩子很快由于急性脑肿而抽搐、失去知觉。研究人员在检查这些患病的孩子时，注意到他们发病的样子与加勒比海地区出现在孩子们身上的一种脑肿和抽搐的病症很像。那种病是由西非荔枝果引起的。随后，科学家们对荔枝进行化验，发现荔枝中含有和西非荔枝果肉里同样的毒素：次甘氨酸。现在，医生们告诫当地孩子的家长：吃荔枝不能过量。一旦发生“荔枝中毒”，则需要马上按低血糖接受救治。

（转自参考消息[N]，2017-02-03）

S858.28

A

1002-1957(2017)02-0089-04

2017-03-01

夏 伟（1977-），男，黑龙江哈尔滨人，兽医师，执业兽医师，硕士，主要从事动物传染病防治及技术服务工作.

E-mail：747360879@qq.com