湖北省武汉市某门诊犬细小病毒病病例统计分析

李文珂，薛明珠，李 丹，董 俊，王明月，张经纬，孙雅念，陈建国，，胡长敏，，周东海，，丁明星，，张安定，3，韩 丽，

（1. 华中农业大学动物医学院，湖北武汉 430070；2. 华中农业大学动物医院，湖北武汉 430070；3. 农业部兽用诊断制剂创制重点实验室，湖北武汉 430070）

湖北省武汉市某门诊犬细小病毒病病例统计分析

李文珂1，薛明珠2，李 丹1，董 俊1，王明月1，张经纬1，孙雅念2，陈建国1，2，胡长敏1，2，周东海1，2，丁明星1，2，张安定1，3，韩 丽1，2

（1. 华中农业大学动物医学院，湖北武汉 430070；2. 华中农业大学动物医院，湖北武汉 430070；3. 农业部兽用诊断制剂创制重点实验室，湖北武汉 430070）

[目的]了解武汉市犬细小病毒病（CPD）的流行情况和特点。[方法]以华中农业大学动物医院门诊为依托，应用胶体金试纸条和PCR检测技术，对2015年9月至2016年9月的犬门诊病例进行调查分析。[结果]共检测门诊犬病例2 728例，检出CPD阳性121例，阳性检出率为4.4%。从时间分布看，该期间大部分月份的阳性检出率在3%～5%之间，2015年10月的最高，2016年6—9月的最低。从群间分布看，阿拉斯加、边牧、哈士奇、比熊、萨摩耶、博美、巴哥等犬种的CPD阳性数量均占该品种就诊犬总数量的10%以上，而拉布拉多、雪纳瑞、德牧、贵宾、金毛犬则在5%以上；雄性犬的CPD阳性检出率明显高于雌性；在阳性病例中，2～4月龄幼犬的占比最高，在40%～60%之间；未免疫或未按规定免疫犬的CPD阳性数量与总阳性数量的占比高达86.7%，而按规定免疫犬仅为13.3%。[结论]CPD的发生与犬的品种、年龄、性别、免疫状况和气候等因素存在一定的关系，尤其是其年龄和免疫状况。本研究有助于了解该病的流行特点，并可为该病的防治提供参考。

犬细小病毒病；流行病学；病例统计分析；武汉市

犬细小病毒病（Canine parvovirus disease，CPD）是由 犬 细 小病毒（Canine parvovirus，CPV）感染引起的一种高度接触性传染病，可分为肠炎型和心肌炎型，主要以剧烈的呕吐、出血性肠炎和白细胞显著减少，以及急性非化脓性心肌炎为特征[1]。CPV对幼犬危害较大，引起的发病率和病死率较高，对成犬主要引起剧烈呕吐和出血性坏死性肠炎。1982年我国首次分离出CPV，随后由CPV引发的疫情在我国大范围流行，对毛皮动物养殖业和伴侣动物行业造成了重大经济损失[1]。华中农业大学动物医院的传染病临诊病例不仅数量多，而且覆盖了武汉市各个地区，是武汉市最具代表性的动物医院。因此，本研究以华中农业大学动物医院的临诊病例为代表，对2015年9月至2016年9月的CPD就诊病例及其发病情况和特点进行调查分析，以便掌握该病的流行特点，为该病的防治提供参考。

1 材料和方法

1.1 主要仪器

高速冷冻离心机（Eppendorf）；核酸扩增仪（博日科技有限公司）；核酸电泳系统（北京六一公司）。

1.2 主要试剂

DNAiso Reagent，TaKaRa公司产品；ExTaq Buffer、dNTPs、ExTaq DNA聚 合 酶、DL-2000 DNA Marker，宝生物工程（大连）有限公司产品。

1.3 病料及处理

2015年9月至2016年9月，在华中农业大学动物医院采集2 728份患病犬的大肠拭子。将大肠拭子浸泡在含有青霉素和链霉素的灭菌生理盐水中，迅速送往实验室进行检测。

1.4 胶体金试纸条检测

将所采集的大肠拭子，采用韩国Bioindist公司生产的胶体金试纸条进行检测。

1.5 PCR检测

参照张仁舟等[2]、林鹏等[3]建立的CPV PCR检测方法，根据GenBank中报道的CPV VP2核酸序列，用Primer 5.0软件设计CPV鉴定引物，扩增的片段长度为451 bp，引物P1：5´-GTACATTTAAATATGCCAGA-3´；P2：5´-ATTTAATGTTCTATCCCATTG-3´。引物由上海生物工程公司合成。将所采集的大肠拭子，首先进行胶体金试纸条检测，若为阴性，但该样品来源犬的CPD临床症状明显，就再采用如下PCR方法复检。将所采集的大肠拭子，按照DNAiso Reagent使用说明提取病毒基因组；按照94 ℃预变性5 min，94 ℃变性30 s，45 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，30个循环，最后72 ℃延伸10 min的程序进行PCR扩增；对扩增产物采用琼脂糖电泳方法进行鉴定。

2 结果与分析

2.1 时间分布

本研究统计了华中农业大学动物医院自2015年9月至2016年9月就诊犬的CPD发病情况，共采集2 728份门诊病例样品，采用韩国Bioindist公司生产的CPV胶体金检测试纸检测，结果检出阳性121份。随机选取20份胶体金检测为阳性的病料，利用PCR复检，结果仍为阳性，未见临床症状明显但胶体金检测为阴性的样品。因此，在2 728临床病例中，CPD的总阳性检出率为4.4%（表1）。

对各月份的CPD检出阳性率进行分析，发现大部分月份的阳性检出率在3%～5%之间，只有2015年10月份的最高，为15.0%，这很可能与武汉市10月份气温多变有关。另外，2016年6—9月的CPD阳性检出率较低，均在2.5%以下，其原因可能与这期间的临床就诊病例数量多有关，同时也因为该阶段武汉市的气温适宜，适合幼犬的保温护理及成长，但其真正原因需进行深入探究。

表1 各月份的CPD病例数和就诊犬数统计

2.2 群间分布

本研究对CPD阳性就诊犬的品种、性别、年龄进行了分析，发现阿拉斯加、边牧、哈士奇、比熊、萨摩耶、博美、巴哥等犬种的CPD阳性数量均占该品种就诊犬总数的10%以上，而拉布拉多、雪纳瑞、德牧、贵宾、金毛犬的占比在5%以上。虽然罗威纳犬的占比达到了50%，但该品种的就诊总病例数只有4例，因此并不能真实反映实际情况。相比较而言，其他犬（主要是田园犬）的占比则不到 2%。因此，本研究结果提示，对阿拉斯加、边牧、哈士奇、比熊、萨摩耶、博美、巴哥等犬种，应特别注意防范CPV感染（表2）。

表2 各品种就诊犬的门诊数量及CPD阳性统计

对CPD阳性犬的性别进行分析，发现雌性犬占31.5%，雄性则高达68.5%。由于不清楚本地区雌性和雄性犬的准确饲养数量，因此并不能根据该结果确定雄性犬更易感，但从某种程度上可以反映出雄性犬的感染比例较高。

对CPD阳性犬的年龄进行分析，发现2月龄以内仔犬的数量很少，原因可能是该年龄段的犬存在母源抗体，具有一定的保护力。8岁以后成年犬的数量也很少。阳性病例主要为2～4月龄幼犬，占比为40%～60%，显著高于其他年龄段（p＜0.01，t检验）（表3），这与CPD的流行特点基本一致[1-4]。

表3 各品种不同年龄段的阳性犬数量统计（单位：只）

本研究还对CPD阳性就诊犬的免疫状态进行了分析，发现未免疫或未按规定免疫犬的占比高达86.7%，而按规定免疫犬仅为13.3%。另外，处于免疫期内（首免后至完成免疫的时期）的CPD阳性犬占比为18.3%，但该年龄段未免疫的阳性犬数量占比高达56.45%。这意味着免疫可有效降低CPD发病率。由于难以对犬的饲养规模和免疫状态进行大规模调查，所以本研究仅从就诊阳性犬是否免疫进行分析，不能准确反映免疫对降低发病率的影响，但本研究可提示免疫对防控该病的重要性。

对检测阳性和免疫情况进行分析发现，所有检测为强阳性（++++）的均为非免疫或未按规定免疫犬；弱阳性（+）犬在非免疫犬中的占比为62.1%，而在未按规定免疫犬中的占比为63.6%，在按规定免疫犬中为68.8%，说明在发病犬中，疫苗免疫犬的病毒含量也相对较低，而且临床症状相对较轻，并且免疫犬的治疗后成活率高，这进一步说明了疫苗免疫对防控该病具有重要效果。

3 讨论

本研究以华中农业大学动物医院为代表，对武汉市2015年9月至2016年9月期间的CPD门诊犬阳性情况进行了统计分析。整体而言，武汉市CPD门诊犬阳性率略低于彭春平等[6]所调查的洛阳地区比例（4.77%），明显低于刘静等[4]所调查的泰州地区（16.46%）、罗厚强等[7]调查的温州地区（19.6%）、艾静等[5]所调查的苏州地区（22%）以及吴洁等[8]所调查的石河子地区（33.4%）。但这些调查研究中的样本数差别较大，因此很难确认各地区的CPD发病情况具有可比性，这也更加表明系统的流行病学分析十分必要。

CPD门诊阳性犬的时间分布结果显示，武汉市大部分月份的CPD阳性检出率较平稳，主要在3%～5%之间，但2015年10月份的检出阳性率最高（15.0%），2016年8月和9月的阳性率较低，低于2%。比较文献报道的各地门诊犬CPD阳性率发现，河南省CPD的阳性率表现出每年12月至次年2月份相对较高，而6—8月相对较低[10]，与其他地区的调查结果相差较大[8-9]，这可能是受地域和气候差异以及饲养规模和饲养习惯等影响造成的。因此各地区应根据实际CPD流行特点，有针对性地进行指导和防治。

就诊犬群间分布结果显示，阿拉斯加、边牧、哈士奇、比熊、萨摩耶、博美、巴哥等犬种的CPD阳性数占该品种就诊犬总数的10%以上，拉布拉多、雪纳瑞、德牧、贵宾、金毛犬在5%以上，相比而言，其他犬（主要是田园犬）的占比则不到2%。这与其他相关研究结论一致，品种犬更易发生CPD。因此，在武汉市，应特别注意这些犬种的CPD防范。

另外分析发现，患病犬中雌性占31.5%，雄性则高达68.5%，结合刘静等所调查的泰州地区与艾静等调查的苏州地区的CPD流行情况，表明雄性犬比雌性犬具有更高的感染比例，这很可能与公犬饲养率以及公犬活动性较母犬高、与其他犬接触更加频繁有关[4-5]。当然，关于CPD阳性率与性别的关系，需结合其他地区的CPD发病情况进一步明确。

CPD的发病与犬的年龄存在一定的关系。各品种的CPD阳性病例中，2～4月龄幼犬占比最高，基本为40%～60%。其原因可能是2～4月龄犬的母源抗体基本消失，而其免疫系统尚未发育完善。因此应特别注意对2～4月龄幼犬的CPD预防和治疗。

本研究发现，患病犬中疫苗免疫犬的比例远低于非免疫犬以及未按规定免疫犬，表明疫苗免疫可有效降低CPD的发生率，这与各地的调查结果相符[6-10]。疫苗免疫犬就诊时的病毒含量相对较低，临床发病也相对较轻，进一步表明疫苗免疫对防控该病具有重要效果。因此，疫苗免疫是有效减少CPD发生的重要措施。CPD的发病与犬的品种、年龄、免疫与否、温度的剧烈改变以及性别等存在一定的关系，尤其与年龄和免疫状况有着密切的关系。因此，无论是畜主，还是兽医工作人员，都应在这几方面多加注意，不断完善CPD的防控措施。

[1] 陈溥言. 兽医传染病学[M]. 6版. 北京：中国农业出版社，2015：438-444.

[2] 张仁舟. 犬细小病毒分离鉴定及遗传进化分析[D]. 北京：中国人民解放军军事医学科学院，2010.

[3] 林鹏，赵航，王建科，等. 犬细小病毒的分离鉴定及其VP2基因序列分析[J]. 中国畜牧兽医 2015，42（10）：2587-2593.

[4] 刘静，赵学刚，陆江，等. 犬细小病毒病流行病学调查[J]. 中国畜牧兽医，2013，40（3）：199-201.

[5] 艾静，袁玉国，彭秋玲，等. 犬细小病毒病的流行病学调查[J]. 中国畜牧兽医，2012，39（11）：200-202.

[6] 彭春平，丁轲，赵战勤，等. 洛阳地区犬细小病毒病的流行病学调查[J]. 河南农业科学， 2014，43（7）：156-159.

[7] 罗厚强，宋显章，王清艳，等. 温州地区犬细小病毒病门诊的流行病学调查[J]. 浙江农业学报，2014，26（4）：887-891.

[8] 吴洁，刘强，侯宇成，等. 新疆石河子市犬细小病毒病流行病学调查[J]. 北京农业， 2011（15）：26-28.

[9] 柏丽华. 北京地区犬细小病毒病的分子流行病学调查研究[D]. 北京：中国农业科学院， 2011.

[10] 金霞，张宇，任一鸣，等. 河南省犬细小病毒病的流行病学调查[J]. 中国工作犬业， 2010（3）：21-22.

（责任编辑：朱迪国）

Statistical Analysis on Cases of Canine Parvovirus Disease in an Animal Clinic in Wuhan City of Hubei Province

Li Wenke1，Xue Mingzhu2，Li Dan1，Dong Jun1，Wang Mingyue1，Zhang Jingwei1，Sun Yanian2，Chen Jianguo1，2，Hu Changmin1，2，Zhou Donghai1，2，Ding Mingxing1，2，Zhang Anding1，3，Han Li1，2
（1. College of Veterinary Medicine，Huazhong Agricultural University，Whuhan，Hubei 430070；2. Animal Hospital of Huazhong Agricultural University，Whuhan，Hubei 430070；3. Key Laboratory of Veterinary Diagnostic Products Development，Ministry of Agriculture，Whuhan，Hubei 430070）

[Objective] In order to investigate the epidemic status and characteristics of Canine parvovirus disease（CPD）in Wuhan city. [Methods] Taking the animal hospital outpatient clinic of Huazhong Agricultural University as the basis，using Colloidal gold detection and RT-PCR，a total of 2 728 CPD cases collected from September 2015 to September 2016 were investigated and analyzed. [Results] 121 of the cases were tested positive，accounting for 4.4%. According to the time distribution，an average positive rate of 3%～5% in most months was observed during the investigation period. In particular，the positive rate was highest in October，2015，while the lowest values occurred in the time period of June to September of 2016. According to the group distribution，the detection rates were over 10% when diagnosing the following canine breeds：Alaska，Border shepherd，Husky，Bichon，Samoyed，Bomei and Bago. Compared with this，the detection rates in breeds of Labrador，Schnauzer，German Shepherd，Poodle and Goldena were over 5%. Besides，the male canines were much more susceptible than the females. Otherwise，the ages of canines infected by CPD were mainly 2～4 months old，occupying 40%～60% of all the positive cases. Canineswithout vaccination or vaccination not following the standard regulations showed a high CPD positive rate of 86.7%，which was in contrast to the rate of 13.3% in canines adopted proper immunization. [Conclusion] There were certain relationship between CPD infection and some factors including the breeds，ages，genders，immunization status and climate，especially the ages and immunization status. This investigation would contribute to better recognize the CPD epidemic characteristics and provide reference for its prevention and control.

Canine parvovirus disease（CPD）；epidemiology；cases statistical analysis；Wuhan city

S854.4

：B

：1005-944X（2017）05-0012-04

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.05.004

科技部重点研发专项（2016YFD0501007）；中央高校基本科研业务费专项（2014QC002）

韩 丽