2014—2015年新疆家养动物小反刍兽疫病原学监测

（新疆维吾尔自治区动物卫生监督所，新疆乌鲁木齐 830063）

2014—2015年新疆家养动物小反刍兽疫病原学监测

马晓艳，王 文，李 舵，居马别克·夏拉巴依，美热木古丽·巴依待拉提，沙那瓦尔·塔西，盛卓君

（新疆维吾尔自治区动物卫生监督所，新疆乌鲁木齐 830063）

为了解新疆地区家养动物小反刍兽疫防控情况，对2014—2015年从新疆14个地州的种畜场、商品代养殖场、散养户养殖场、交易市场及屠宰场采集的羊眼鼻分泌物等3 812份样品，利用荧光反转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）方法，进行了小反刍兽疫病原学检测，结果未检测出病原学阳性样品。监测结果表明，新疆各地采取的小反刍兽疫防控措施行之有效，尤其是疫苗免疫对防控小反刍兽疫起到了关键性作用。

小反刍兽疫；荧光反转录–聚合酶链式反应；监测

小反刍兽疫（PPR）是由副黏病毒科麻疹病毒属的小反刍兽疫病毒（PPRV）引起的一种小反刍动物急性、高度接触性传染性疾病[1]。世界动物卫生组织（OIE）将该病列入须通报动物疫病名录，我国将其列为一类动物疫病，是《国家中长期动物疫病防治规划（2012—2020年）》优先防控的外来动物疫病之一。PPR目前主要分布在非洲和亚洲地区[2]，主要感染绵羊和山羊等小反刍动物，严重威胁养羊业生产安全。该病的临床表现与牛瘟类似，故也称伪牛瘟（Pseudorinderpest），其特征是发病急剧、高热稽留、眼鼻分泌物增加、口腔糜烂、腹泻和肺炎。对于PPR的诊断，通常先是临床检查、病理剖检及组织学观察，然后采用实验室方法确诊。现在已有多种血清学和分子生物学方法用于PPR检测[3]。

2007年，PPR首次传入我国西藏阿里地区。2013年11月底，PPR再次传入我国，并波及多个省份，农业部会同当地政府采取有效措施，迅速控制了疫情[4]。我国是养羊大国，年养殖量约为6亿只。因此切实做好PPR防控工作，事关我国养羊业的持续健康发展，事关农牧民的增收，意义重大。目前新疆已建立了百万肉羊产业生产基地，来保证养羊产业的可持续发展，保障羊肉市场供给。因此，切实做好PPR防控，是今后新疆地区动物疫病防控工作的重中之重。

本研究主要对新疆14个地州的家养动物进行了PPR病原学监测，为新疆PPR防控提供数据支撑。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要仪器设备。核酸提取仪（西安天隆有限责任公司）；荧光PCR仪（型号7500，ABI公司）；离心机（Sigma公司）。

1.1.2 试验试剂。PPRV荧光RT-PCR检测试剂盒，购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司，批号PPR20141128P、PPR20150528P、PPR20150626P、PPR20151108P。动物疫病病毒RNA自动核酸提取试剂盒（磁珠法），购自苏州天隆生物科技有限公司，批号E0112102211、E0115040411。

1.2 检测方法

1.2.1 样品采集。按照随机抽样原则，在每个地州选择1个县，每个县选取1～2个种羊场或养殖场、1～2个屠宰场、5个以上散养户、1个交易市场，共计8～10个采样点。每个采样点，在春、秋各采集病原学样品（眼、鼻棉拭子或组织样品）5份。

1.2.2 病原学检测方法

1.2.2.1 病毒RNA的提取。（1）在真空包装的预封装深孔板的第1、7列中，分别加入20 μL蛋白酶k、200 μL样本。（2）按表1程序进行自动化提取；（3）自动化程序结束后，将第6、12列的洗脱液转移至干净的，装有灭菌无核酸酶的离心管中。

1.2.2.2 实时荧光RT-PCR扩增。设被检样品、阴性和阳性对照总和为N，反应体系配制如下：灭菌无核酸酶水2.7×（N+1）μL， RT-PCR反应液10×（N+1）μL，酶混合液 0.4×（N+1）μL，荧光探 1.9×（N+1）μL。将以上配制的反应体系充分混匀后，分装在每个反应PCR管中各15 μL。分别取5 μL 模板RNA，加入相应反应管中，混匀并作好标记，在荧光PCR仪上进行反应：45 ℃ 15 min，95 ℃ 1 min；循环95 ℃ 5 s，60 ℃ 35 s，共40个次，在每次循环第2步（60 ℃ 35 s），收集荧光信号（报告基团“FAM”，淬灭基团“None”）。

表1 病毒RNA提取程序

1.3 结果判定

阳性对照Ct≤30并出现特定的扩增曲线，阴性对照无Ct值并且无特定扩增曲线，实验结果成立；被检样品Ct≤30并出现特定的扩增曲线为PPR病毒阳性；被检样品30＜Ct＜37并出现特定的扩增曲线，需重新取样提取RNA，扩增后进行结果判定，如仍是可疑，可判定为阳性；被检样品Ct≥37时，判定为阴性。

2 结果

2.1 总体监测情况

2014—2015年共监测场点434个，涉及种畜场、商品代养殖场、散养户、交易市场、屠宰场，共检测PPR病原学样品3 812份。各采样场点采样量占比分别为种畜场3.16%（120份）、商品代养殖场23.74%（905份）、散养户50.28%（1 917份）、交易市场1.94%（74份）、屠宰场20.88%（796份）。具体采样情况见表2、图1。

2.2 病原学监测情况

2014—2015年，利用荧光定量RT-PCR方法，共检测PPR病原学样品数3 812份，没有检测出阳性（表3）。

3 讨论

一步法荧光定量RT-PCR方法被广泛用于PPRV检测[5-6]。荧光定量RT-PCR方法特异性好、敏感性高、检测周期短、重复性很好[7]，其检测快速、结果准确，能有效节约时间，为疫情的快速处置提供了保障，对大量的PPR样品检测提供了强有力的技术支撑，是一种行之有效的快速诊断方法。通常而言，患病羊只眼鼻分泌物中的PPRV含量较高，因此检测时采集的样品来源于此。

表2 2014—2015年集中监测场点小反刍兽疫样品的检测数量及分布情况（单位：个/份）

图1 2014—2015年病原学集中监测场点采样数比例

表3 2014—2015年小反刍兽疫病原学（荧光RT-PCR）集中监测情况（单位：份/%）

从本研究的采样分布情况看，采样场点分布不均匀，监测场点中的散养户数量较多，其它场点采样数量由多到少依次为规模场、屠宰场、种畜场、交易市场。上述监测场点分布与新疆地区的饲养规模有关，主要是因为该地区的羊以传统方式的散养为主。其它原因可能是没有合理安排采样场点，采取就近采样原则，因此易选择散养户等易于采样的场点。

为有效控制新疆PPR疫情，2014—2015年在新疆14个地州开展了PPR病原学监测，没有检测到阳性样品，这与新疆各个地州采取的免疫措施有关，家养动物免疫抗体水平保持在80%以上，疫苗免疫对防控PPR起到了关键性作用。

2014年至今，新疆PPR疫情呈逐年下降趋势，自2014年9月，最后一起PPR疫情结束后，未再发生家养动物疫情。但从2014年底开始，新疆天山、昆仑山等地又发生了3起北山羊、盘羊、黄羊的野生动物PPR疫情。

PPR是重要的跨境动物疫病[8]，具有高度传染性。2014年初，当家羊大范围发生疫情时，要求对全部家羊进行紧急免疫，而忽视了具有迁徙习性的野生羊已经被感染可能。野生羊在迁徙过程中与家羊、放牧羊接触，导致疫情扩散，进一步增加了野生羊感染PPR的概率，从而增大了野生羊在疫病传播中的作用[9]。

时间和空间分析结果表明，野山羊PPR疫情在缓慢地沿天山山脉线路扩散。PPR病原已经广泛存在于该地区的野生动物中，目前疫情由野生动物向家养动物传播的风险较大。今后应进一步做好疫源追踪，在野生羊与家养动物接触活动区域开展实时监测，科学分析疫情形势，为迅速有效扑灭疫情做好技术支撑。同时，还要与林业部门合工作，建立联防联控机制，做好野生羊疫区的流行病学调查工作。

[1]ADAMA D. Peste des petits ruminants[EB/OL].（2015-01-08）[2016-12-07]. http://www.indiaveterinary community. com / profperspective.

[2] 王华，吴晓东，包静月. 我国小反刍兽疫疫情现状与防控策略[J]. 动物医学进展，2015，36（6）：142-155.

[3] 邱立新. 小反刍兽疫[J]. 湖南畜牧兽医，2009（1）：1-2.

[4]陆则基，王志亮，刘雨田，等. 西藏阿里地区小反刍兽疫流行病学调查研究[J]. 中国动物检疫，2008，25（12）：44-47.

[5]包静月，李林，王志亮，等. 一步法实时定量RT-PCR检测小反刍兽疫病毒方法的建立[J]. 中国动物检疫，2007，24（8）：21-23.

[6]王琦，吴燕，文明，等. 小反刍兽疫一步法RT-PCR检测方法的建立[J]. 西北农业学报，2015，24（8）：11-15.

[7]吕建强，杨俊兴，宗卉，等. 小反刍兽疫疫苗毒与野毒实时荧光RT-PCR鉴别检测方法的建立[J].中国兽医学报，2012，12（32）：1795-1798.

[8]王华，包静月，吴晓东. 内蒙古和西藏自治区野生反刍动物小反刍兽疫监测[J]. 动物医学进展，2016，37（3）：124-126.

[9]夏咸柱，马建章. 野生动物资源保护与疫病防控研究进行进展[M]. 北京：高等教育出版社，2009：120-125.

（责任编辑：朱迪国）

Pathogenic Surveillance of Peste des Petits Ruminants of Domestic Animals in Xinjiang during 2014—2015

Ma Xiaoyan，Wang Wen，Li Duo，Jumabieke Xialabayi，Meiremuguli Bayidailati，Shanawaer Taxi，Sheng Zhuojun
（Animal Health Supervision Institution of Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi，Xinjiang 830063）

Objective to recognize the status of Peste des Petits Ruminants（PPR）control in domestic animals in Xinjiang，a total of 3 812 clinical samples of eye and nasal secretions were collected from sheep breeding farms，intensive farms，backyard farms，trading markets and the slaughterhouses in 14 prefecture-level cities of Xinjiang during 2014—2015，and then PPRV detection was conducted using real time quantitative RT-PCR（qRT-PCR）. Results showed all the samples were PPRV negative，which indicated the good effectivity of prevention and control measures，especially the critical role of PPR vaccination .

Peste des petits ruminants（PPR）；qRT-PCR；surveillance

S855.2

：B

：1005-944X（2017）05-0009-03

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.05.003

盛卓君