食品中多种兽药残留的同时筛查检测

朱万燕++徐文远++杨晓玉

摘 要：建立了食品中7类兽药残留的定性筛查检测方法。样品采用QuEChERS方法进行前处理（乙腈提取，Al2O3吸附剂净化），采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱仪（UPLC-Q-TOF MS）检测，以化合物的色谱保留时间和精确质量数定性，在Target MS/MS采集模式下，通过碎片离子的精确质量数进一步确证化合物。该方法简便、快速、灵敏，适用于食品中多种兽药残留的同时定性筛查。

关键词：食品 多类兽药残留 数据谱库 筛查 确证 QuEChERS UPLC-Q-TOF MS

中图分类号：S859.84 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2017）02（a）-0051-02

近年来，兽药的过量和违禁使用不可避免地引起动物源性食品中兽药残留，危害消费者身体健康，这使得人们对于食品中兽药残留这一问题越来越关注。现在的检测标准主要是分种类检测[1-3]，方法费时、费力，现在分析人员开始尝试多类兽药同时检测分析[4，5]。该文拟建立目前常用的7类兽药残留（磺胺类、喹诺酮类、四环素类、硝基咪唑类、大环内酯类、β-内酰胺类、三苯甲烷类）的同时检测方法。

1 试验部分

1.1 仪器与试剂

Agilent 6530B Accurate-mass Q-TOF LC/MS；分离柱：ZORBAX SB-C18；净化粉：C18、PSA、NH2、中性Al2O3、PAX、PCX、PEP、GCB；纯水机：美国Millipore。

1.2 标准溶液配制

分别准确称取适量的标准品于容量瓶中，用甲醇溶解定容，得到1 mg/mL的标准储备液，待用。上机标准溶液现用现配。

1.3 样品前处理

称取上述制备好的样品4.0 g，于50 mL离心管中，加入提取液（12 mL乙腈），超声波振荡提取2 min，9 000 r/min均质提取1 min，9 000 r/min离心5 min，上清液转移至50 mL离心管中；另取一50 mL离心管加入15 mL乙腈，洗涤匀浆刀头10 s，洗涤液移入前一离心管中，用玻璃棒捣碎离心管中的沉淀，超声波振荡提取2 min，9 000 r/min离心5 min，上清液合并至50 mL离心管中，待净化。在上清液中加入500 mg中性氧化铝粉，充分振荡，以尽可能多得除去提取液中的干扰性杂质，最后取上清液浓缩、定容，待上机测定。

1.4 仪器工作条件

色谱柱：ZORBAX SB-C18，3.5 μm，100×2.1 mm；流动相：有机相为乙腈，水相为0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱；流速：0.3 mL/min；进样量：20 μL。

Ion Source：ESI+；Capillary：4 000 V；Nebulizer：35 psi；Drying Gas Temp：325 ℃；Drying Gas：10 L/min；Sheath Gas Temp：325 ℃；Sheath Gas：11 L/min。

2 结果与讨论

2.1 定性测定

在上述色谱、质谱条件下测定待测样液，LC-Q-TOF-MS在MS模式下进行一级全扫描，获得MS全扫描数据。通过样品中化合物的实测分子量、保留时间与TOF数据库中的精确质量数及保留时间匹配，在质量精确度绝对值小于10 ppm，保留时间偏差在0.3 min之内，且得分≥70时，可初步确定为疑似兽药，待由Q-TOF进一步确证。

对于TOF数据库侦测疑似兽药，需要进行Q-TOF数据库的核查确证。在Q-TOF方法条件下，对实际样品进行再次测定，获得样品碎片离子全扫描信息，经过与Q-TOF数据谱库中的碎片离子信息检索比对，得到二级检索得分和对应的化合物，对于检索得分≥70的化合物被确证为目标兽药。对于检索得分<70的化合物通过背景扣除来降低杂质离子对检索的影响；对于仍不能达到得分要求的化合物需对比其主要碎片离子，若有两个或两个以上的主要碎片离子匹配，则可确证为目标兽药。

2.2 提取方式的选择

实验比较了振荡、超声和均质三种提取方式对提取效果的影响。结果发现，均质提取取得了最好结果，所有待测化合物的平均回收率为85.6%，振荡和超声都不利于动物组织样品的充分分散，其回收率结果均低于均质提取。

2.3 净化时间和净化方式的选择

对样品净化所需的振荡时间进行了优化，比较5 min、10 min、15 min、20 min、25 min、30 min的净化效果及目标化合物的平均回收率。结果发现，几个不同的振荡时间对提取液的净化效果及目标化合物的平均回收率无明显影响，从缩短分析时间和提高分析效率方面考虑，初步确定振荡时间为5 min。

比较振荡和涡旋两种净化方式的净化效果，具体方法如下：比较涡旋1 min、2 min、3 min、4 min与振荡5 min的净化效果及目标化合物的回收率。结果表明，除涡旋1 min的样品净化效果差，回收率较低外，其余净化方式的净化效果与目标化合物的回收率无明显差别。考虑到批量样品量的测定，样品单独进行涡旋净化反而增加总的分析时间，将所有样品提取液同时进行振荡净化可以节约时间。因此，最终确定净化方式为振荡净化5 min。

2.4 方法的线性和检出限

采用不含待测物质的空白基质溶液稀释标准储备液，根据化合物的性质配制成不同浓度的系列标准溶液，上LC-Q-TOF-MS仪测定，以标准溶液的峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线。当信噪比等于3（S/N=3）时的标准溶液浓度，即为化合物的檢出限（LOD）。实验表明，待测物质的线性范围为0.25～2 000 μg/kg，相关系数均大于0.99，LOQ为0.5～100 μg/kg。

2.5 方法的回收率和精密度

采用空白样品做基质，添加高、中、低3个浓度水平进行回收率和精密度实验，每个浓度水平平行做6次，计算所测化合物的回收率和相对标准偏差（RSD）。实验表明，7类化合物的回收率均在66.2%～104.3%之间，相对标准偏差为4.2%～15.1%，说明方法的准确度好。

3 结语

该文建立的用于兽药残留分析的QuEChERS-超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱检测技术，相较于传统的检测技术，具有经济、环保、简单、快速等优点，适用于食品中多种兽药残留的同时检测分析，可以满足批量样品快速分析的需求。

参考文献

[1] Chonan T，Fyjimoto T，Inoue M，et al.Tour Fujimoto-Research Gate[J].Shokuhin Eiseigaku Zasshi，2008，49（3）：244-248.

[2] 夏敏，贾丽，季怡萍.液相色谱-质谱法同时检测畜禽肉中五种大环内酯类抗生素[J].分析测试学报，2004，23（Z1）：217-222.

[3] 刘婧婧，林黎明，江志刚，等.高效液相色谱法同时检测8种喹诺酮类兽药残留量[J].分析试验室，2007，26（8）：5-9.

[4] 卜明楠，石志红，康健，等.QuEChERS结合LC-MS/MS同时测定虾肉中72种兽药残留[J].分析测试学报，2012，31（5）：552-558.

[5] 王炼，黎源倩，王海波，等.基质固相分散-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定畜禽肉和牛奶中20种兽药残留[J].分析化学，2011，39（2）：203-207.