多肉植物十二卷花影寿离体快繁技术研究

杨 娟 俞爱军 周 燕 张睿婧 孙莲莲 张冬菊 吴月琴 李春丹

(上海种业（集团）有限公司，上海市松江区 201615)

多肉植物十二卷花影寿离体快繁技术研究

杨 娟 俞爱军 周 燕 张睿婧 孙莲莲 张冬菊 吴月琴 李春丹

(上海种业（集团）有限公司，上海市松江区 201615)

为稳定花影寿的市场价格和满足多肉爱好者的需求，以百合科十二卷属植物花影寿叶片为诱导材料，对其进行组培快繁技术研究。结果表明：利用叶片诱导愈伤分化再生芽，其最佳培养基是MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L，最佳芽增殖培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+KT 1 mg/L+NAA 0.2 mg/L,增殖系数达4～5倍，分化的芽较多，质量较好。最佳生根壮苗培养基为1/2 M S，组培苗具有较典型的观赏性；组培苗经过炼苗后，移栽成活率达90%以上。

多肉植物；花影寿；叶片；快繁

花影寿是百合科十二卷属多年生肉质植物，株型矮小、无茎。叶短而肥厚，螺旋状生长，呈莲座状排列，顶端呈水平三角形截面，截面平而透明，形成特有的“窗”状结构，“窗”上有明显脉纹，具有较高的观赏性，是室内观叶的案头佳品。目前花影寿市场需求量较大，但其生长缓慢、产量少、价位高，建立组织培养快繁技术，既能解决其种苗数量少、生长慢等问题，还能降低其价格，满足众多多肉爱好者的需求。本研究通过以植株叶片为外植体材料，研究了花影寿组织培养的整套技术，对百合科十二卷属多肉植物的生长、繁殖以及品种资源的保存具有一定的指导意义。

1 材料与方法

1.1 外植体的选择、灭菌方法

以花影寿为供试材料，选取植株的外轮、中轮叶片作为外植体，不破坏原植株的生长点，让其继续生长。将取出的叶片先用洗洁剂清洗浸泡10 min，然后用流水冲洗2 h后沥干备用。在无菌室超净台上，用75%酒精表面消毒30 s，再用无菌水清洗1遍；然后用0.1%HgCl2消毒4～6 min，无菌水冲洗3～5遍；最后用无菌滤纸吸干，备用。

1.2 培养条件

以MS为基本培养基，分别添加KT（激动素）、6-BA（6-苄基嘌呤）、NAA（奈乙酸），所有培养基均加琼脂0.6%、蔗糖3%，pH5.8～6.0，培养温度25～28 ℃，光照12 h/ d，光强度2500～3000 Lx。在超净台上将无菌叶片接种于不同的培养基上。

初始诱导培养基配方：（1）MS+6-BA 0.5 mg/L+ NAA 0.2 mg/L；（2）MS+6-BA 1 mg/L+NAA 0.2 mg/L；（3）MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.2 mg/L；（4）MS+6-BA 4 mg/L+NAA 0.2 mg/L。每个处理10瓶，每瓶接种2个外植体。

增殖培养基配方：（5）MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L；（6）MS+6-BA 0.2 mg/L+KT 0.5 mg/L +NAA 0.2 mg/L；（7）MS+6-BA 0.5 mg/L+KT 1 mg/L+NAA 0.2 mg/L。每个处理10瓶，每瓶接种4个芽，培养30 d后观察生长和再生情况。

生根壮苗培养基配方：（8）1/2 MS；（9）MS培养基。培养20～30 d后观察生根和株型情况。

2 结果与分析

2.1 不同培养基对叶片诱导愈伤组织的影响

选择叶片为外植体材料，对无菌材料的获得虽难度大，但取材方便，没时间局限性。从诱导结果看，4种培养基均能诱导，在低浓度6-BA的培养基上，接种15 d后叶片慢慢膨大、开裂并愈伤化，再培养15 d后，愈伤表面分化芽，且株型正常。在高浓度6-BA培养基上，只分化愈伤，未分化芽。当6-BA浓度高于2 mg/L时，愈伤玻璃化严重。通过对4种培养基的比较发现，配方（1）培养基的效果最佳，芽诱导率为53%，其次是配方（2）培养基，配方（4）培养基效果最差（见表1）。

表1 不同培养基的芽诱导的效果比较

2.2 不同培养基对芽增殖的影响

将诱导出的再生芽接种到增殖培养基中，培养20 d后芽基部形成丛生芽，再经10～15 d培养后，对增殖的成型芽进行切割、转接。由表2可知，配方7培养基的苗基部诱导出较多小芽，株型较好，且增殖倍数达4～5倍。增殖过程中有部分芽，株型紧凑，大部分诱导出的小芽具有典型的形态特征，生根培养30 d后可直接进行移栽。对于较弱小的芽，需进一步转接培养。

表2 不同培养基的芽增殖效果比较

2.3 生根壮苗

在培养过程中光照对花影寿的影响较大，光照强度为3 000 Lx时有利于植株成型，光照强度为2 000 Lx时，植株出现徒长现象。试验还发现，配方（8）培养基上培养的苗比配方（9）培养基上的苗株型紧凑，窗面纹脉更清晰。

图1 芽增殖诱导

图2 生根壮苗培养

2.4 炼苗及移栽

生根壮苗培养30 d后，植株逐渐长大并形成具有典型观赏特征的组培苗，将瓶苗移出培养室，在常温室内自然光照下培养2～3 d，随后开瓶炼苗1～2 d，然后取出带根的小苗，用清水冲洗干净根部培养基，用低浓度多菌灵浸泡10 min，在阴凉通风处自然晾干。随后均匀插入基质中（泥碳∶细沙∶蛭石=1∶1∶1），发现组培苗根系处于新鲜状态时，缓冲期较短，新根长出仅需15～20 d；而当组培苗根系处于干蔫状态时，缓冲期较长，需30～50 d长出新根。花影寿对空气湿度要求较高，移栽过程中空气湿度达80%以上时，移栽成活率在90%以上，等植株长出新根后进行第1次浇水。

3 结论与讨论

目前百合科十二卷属植物组织培养和快速繁殖研究已有报道，如截形十二卷[1]、康平寿[2]、冰灯玉露[3]、毛玉露[4]、“高地”截形瓦苇[5]、美吉寿[6]、万象[7]等均用花葶作为诱导材料。而选择叶片为诱导材料进行组织培养的，目前仅有水晶掌[8]、玉扇[9]、巴迪亚寿（Haworthia mirabilis）[10]、点纹十二卷[11]等。本研究采用花影寿叶片诱导再生植株，对母株虽有损伤，但具有一定的时效性，能缩短等待抽花葶的时间。

不同培养基对花影寿叶片诱导愈伤组织培养时，选择植株的外轮、中轮叶片为诱导材料，以MS+6-BA 0.5 mg/L +NAA 0.2 mg/L培养基诱导愈伤分化芽效果最佳，诱导率为53%。用不同培养基进行芽增殖培养时，最佳培养基是MS+6-BA 0.5 mg/L+KT 1 mg/L+NAA 0.2 mg/L，在添加KT的培养基上，对芽增殖具有促进作用，且增殖芽无玻璃化，增殖倍数达4～5倍，分化的小芽培养30 d后株型均较好。生根培养基以1/2MS为最佳，得到的组培苗株型好，“窗”面纹理清晰，具有较好的观赏价值，移栽成活率达90%以上。

[1] 孙涛,李德森.截形十二卷的组织培养与快速繁殖[J].植物生理学报,2002,38(6)：586-586.

[2] 孙涛,金蕊,李德森.康平寿的组织培养与快速繁殖[J].植物生理学报,2003,39(3）：232.

[3] 宋扬.冰灯玉露的组织培养与快速繁殖技术研究[J].现代农业科技,2014,(18)：164,166.

[4] 高越,王娅欣,孙涛,等.毛玉露的组织培养与快速繁殖[J].生物学通报,2010,45(6)：54-55.

[5] 许继勇,麦瑜玲,郑添群,等.“高地”截形瓦苇的组织培养与快速繁殖技术研究[J].天津农业科学,2006,12(2)：8-10.

[6] 王泉,左志宇,宋晓涛,等.百合科多肉植物美吉寿的组织培养与快速繁殖[J].植物生理学报,2008,44(1)：123-124.

[7] 黄清俊,丁雨龙,唐晓英.珍奇多肉植物万象微型繁殖[J].北方园艺,2007(5)：191-193.

[8] 黄素华,肖惠匀,洪燕萍.水晶掌组织培养与快速繁殖[J].福建师范大学学报（自然科学版）,2014,30(5)：96-100.

[9] 李劼,长静,卢涛.玉扇的快速繁殖[J].中国科技信息,2008 (12)：78.

[10] 赵昂,左志宇，宋晓涛，等.Haworthia mirabilis的组织培养与快速繁殖[J].植物生理学报,2007,43(6)：1137-1138.

[11] 刘春梅,张红.点纹十二卷的组培与快繁研究[J].安徽农学通报,2012,18(3)：32.

2016-12-01