植物油甲醇萃取物的自由基清除能力及其与多酚、生育酚含量的相关性

黄健花，宋志华，刘慧敏，金青哲，王兴国，徐 岩，荣 臻

(1.江南大学 食品学院，食品安全与营养协同创新中心，江苏省食品安全与质量控制协同创新中心，江苏 无锡 214122；2.江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122； 3.迈安德集团有限公司，江苏 扬州 225000)

油脂化学

植物油甲醇萃取物的自由基清除能力及其与多酚、生育酚含量的相关性

黄健花1，2，3，宋志华1，刘慧敏1，金青哲1，王兴国1，徐 岩2，荣 臻3

(1.江南大学 食品学院，食品安全与营养协同创新中心，江苏省食品安全与质量控制协同创新中心，江苏 无锡 214122；2.江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122； 3.迈安德集团有限公司，江苏 扬州 225000)

研究评估10种常见植物油甲醇萃取物的ORAC、FRAP、ABTS和DPPH自由基清除能力，并将自由基清除能力与多酚、生育酚含量进行相关性分析。结果表明：所有样品对4种自由基平均清除能力依次为FRAP>ORAC>ABTS>DPPH；各种植物油甲醇萃取物清除不同自由基的能力不同，芝麻油甲醇萃取物的ORAC清除能力最强，高达1 187.43 μmol TE/100 g；植物油多酚含量较生育酚含量与其甲醇萃取物的自由基清除能力具有更好的相关性，ORAC和ABTS自由基清除能力与植物油多酚含量在P<0.01水平上呈显著相关，相关系数分别达0.819和0.946；DPPH和FRAP自由基清除能力与植物油多酚、生育酚含量均在P<0.05水平显著相关。

植物油；甲醇萃取物；自由基清除能力；生育酚；多酚；相关性

体外自由基清除能力一直是食用油抗氧化研究领域的重点之一，相关研究较多，涉及初榨橄榄油[1]、摩洛哥坚果油[2]、茶籽油[3-4]、棕榈油[5]、黑莓籽油[6]、核桃油[7]、香榧子油[8]、沙枣种子油[9]等多种油品。自由基评价方法包括DPPH法(1,1-二苯代苦基苯肼自由基清除法)、FRAP法(铁离子还原法)、ORAC法(抗氧化能力指数法)、ABTS法(2,2 -连氮-双-(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐阳离子自由基清除法)等[1-9]。但是以往研究主要针对单一油品展开，鲜有报道研究多种油品的自由基清除能力与其生育酚、多酚等食用油中主要抗氧化伴随物的相关性。

现有自由基清除能力评价方法的反应体系主要为水溶液或极性溶液，可用于评价植物油的非极性反应体系自由基清除能力评价方法甚少，已有报道均采用溶剂萃取物进行食用油清除自由基能力评价。鉴于此，针对国内常见的10种植物油，每种植物油采集5个样本，采用ORAC、FRAP、ABTS和DPPH 4种方法评估50个样本的甲醇萃取物的自由基清除能力，检测食用油的生育酚、多酚含量，并将自由基清除效果与生育酚、多酚含量的相关性进行分析，以期为食用油的评价提供借鉴。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 原料与试剂

特级初榨橄榄油、芝麻油、米糠油、大豆油、玉米油、菜籽油、葵花籽油、小麦胚芽油、浓香型花生油、棕榈油，以上每种植物油均采集5个样本，且均未添加抗氧化剂，由市售产品相关公司提供。水溶性生育酚(Trolox)、ABTS、2,2′-偶氮二异丁基脒盐酸盐(AAPH)、荧光素(FL)、2,4,6-三(2-吡啶基)三嗪(TPTZ)、DPPH，购于美国Sigma公司；生育酚(纯度95%)混标，瑞士罗氏公司；正己烷为色谱纯，购于百灵威公司；其余化学药品和试剂均为分析纯；所用气体纯度均为99.99%。

1.1.2 仪器与设备

UV-2100分光光度计，Unico公司；Waters 1525高效液相色谱仪、Waters 2996二极管阵列检测器，美国Waters公司；EL204电子天平，上海梅特勒-托利多仪器有限公司；M5多功能酶标仪，美国Molecular Devices公司；二乙醇基固相萃取小柱(Diol SPE 6 mL/500 mg)，美国赛芬公司。

1.2 实验方法

1.2.1 甲醇萃取物的制备

称取4.0 g植物油，加入5 mL甲醇，避光振荡30 min混匀，3 000 r/min 离心15 min，完全分层后取上层清液，反复萃取4次，合并萃取液。

1.2.2 自由基清除能力的测定

1.2.2.1 DPPH法

参考Espín等[10]方法，略作改动。上述萃取液用甲醇稀释后取2 mL，与2 mL DPPH甲醇溶液(0.1 mmol/L)混合，避光放置2 h，517 nm测定吸光值，计算自由基清除率。自由基清除能力以达到同样自由基清除率所需Trolox量表示。

1.2.2.2 FRAP法

参考Szydlowska-Czerniak等[11]方法，略作改动。适量萃取液加入2 mL TPTZ工作液(由0.1 mol/L醋酸盐缓冲液25 mL，10 mmol/L TPTZ溶液2.5 mL，20 mmol/L FeCl3溶液2.5 mL组成)，混匀，37℃反应10 min，593 nm测定吸光值。自由基清除能力以达到同样吸光值所需Trolox量表示。

1.2.2.3 ORAC法

参考Szydlowska-Czerniak等[11]方法，略作改动。75 mmol/L磷酸盐缓冲液配制FL溶液、AAPH溶液，甲醇配制Trolox标准液；25 μL萃取液于96孔黑色酶标板中，加入150 μL FL溶液，快速振荡2 min，37℃避光10 min，加入25 μL AAPH溶液，在激发波长485 nm、发射波长525 nm连续测定荧光强度至衰减呈基线，计算净荧光衰减面积。自由基清除能力以达到同样净荧光衰减面积所需Trolox量表示。

1.2.2.4 ABTS法

配制ABTS反应储备液[2]，使用时稀释至吸光值为0.7±0.02，取2 mL稀释液与100 μL萃取液混合均匀，于30℃反应20 min， 734 nm下测定吸光值，计算自由基清除率[12]。自由基清除能力以达到同样自由基清除率所需Trolox量表示。

1.2.3 生育酚含量的测定

称取油样1.0～1.5 g，正己烷超声溶解定容至10 mL，采用液相色谱外标法定量[13]。

1.2.4 多酚含量的测定

参照文献[1]采用固相微萃取提取多酚；福林酚法定量[14]。

2 结果与讨论

2.1 植物油甲醇萃取物的自由基清除能力

10种植物油甲醇萃取物的自由基清除能力见表1。

由表1可看出，所有样品对4种自由基的平均清除能力依次为：FRAP>ORAC>ABTS>DPPH。各种植物油的甲醇萃取物清除不同自由基的能力不同，芝麻油和橄榄油的ORAC清除能力明显大于其他的自由基清除能力，5个芝麻油样本的平均ORAC清除能力为1 187.43 μmol TE/100 g，最大可高达1 787 μmol TE/100 g，玉米油、米糠油和棕榈油甲醇萃取物的ORAC清除能力则低于90 μmol TE/100 g；不同植物油的FRAP清除能力在144～522 μmol TE/100 g，芝麻油、小麦胚芽油和米糠油甲醇萃取物的FRAP清除能力相对较高；ABTS自由基清除能力在19～360 μmol TE/100 g，橄榄油、小麦胚芽油和芝麻油甲醇萃取物的ABTS自由基清除能力相对较高；DPPH自由基清除能力在53～245 μmol TE/100 g，橄榄油、芝麻油、小麦胚芽油和米糠油甲醇萃取物的DPPH自由基清除能力略高于其他植物油。

表1 植物油甲醇萃取物的自由基清除能力 μmol TE/100 g

2.2 植物油的生育酚含量和多酚含量

10种植物油的生育酚含量见图1。由图1可看出，小麦胚芽油和米糠油的生育酚含量最高，5个小麦胚芽油的生育酚含量在646～2 574 mg/kg，5个米糠油的生育酚含量在381～1 861 mg/kg，且5个样本间差异较大；大豆油、菜籽油和玉米油的生育酚含量较高，其余5种植物油的生育酚含量则相对较低，且上述8种植物油的5个样本间差异较小。

注：1.橄榄油；2.芝麻油；3.小麦胚芽油；4.米糠油；5.大豆油；6.玉米油；7.菜籽油；8.棕榈油；9.花生油；10.葵花籽油。下同。

图1 10种植物油的生育酚含量

10种植物油的多酚含量见图2。由图2可看出，橄榄油和芝麻油的多酚含量明显高于其他8种植物油，5个橄榄油的多酚含量在111～198 mg GAE/kg，5个芝麻油的多酚含量在153～387 mg GAE/kg；其余8种植物油的多酚含量均低于85 mg GAE/kg，小麦胚芽油、大豆油、菜籽油和米糠油的多酚含量略高于其余4种植物油。除芝麻油以外，其余植物油的5个样本间差异均较小。

图2 10种植物油的多酚含量

2.3 自由基清除能力与生育酚、多酚含量的相关性

对植物油甲醇萃取物的自由基清除能力和生育酚、多酚含量进行Pearson双变量相关性分析，结果见表2。

表2 植物油生育酚、多酚含量与其甲醇萃取物自由基清除能力之间相关性

注：**表示在P<0.01水平上显著，*表示在P<0.05水平上显著。

由表2可看出，植物油甲醇萃取物的ORAC和ABTS自由基清除能力与植物油多酚含量在P<0.01水平上呈显著相关，相关系数分别达0.819和0.946，与植物油生育酚含量的相关性不显著；植物油甲醇萃取物的DPPH和FRAP自由基清除能力与植物油多酚、生育酚含量均在P<0.05水平上呈显著相关。

结合2.1和2.2数据，芝麻油和橄榄油由于富含多酚类物质而较其他植物油具有更好的自由基清除能力，由此可推测多酚较生育酚具有更好的自由基清除能力。

3 结 论

10种植物油的甲醇萃取物对FRAP自由基清除能力最强，其余依次为ORAC、ABTS和DPPH自由基。植物油多酚含量较生育酚含量与其甲醇萃取物的自由基清除能力具有更好的相关性，ORAC和ABTS自由基清除能力与植物油多酚含量在P<0.01水平上呈显著相关，DPPH和FRAP自由基清除能力与植物油多酚含量、生育酚含量均在P<0.05水平上呈显著相关。芝麻油和橄榄油由于富含多酚而较其他植物油具有更好的自由基清除能力。

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Free radical scavenging activity of methanol extract of vegetable oil and its correlation with contents of tocopherol and polyphenol

HUANG Jianhua1，2，3, SONG Zhihua1, LIU Huimin1, JIN Qingzhe1, WANG Xingguo1, XU Yan2, RONG Zhen3

(1.Collaborative Innovation Center of Food Safety and Quality Control in Jiangsu Province, Synergetic Innovation Center of Food Safety and Nutrition, School of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122,Jiangsu, China；2.School of Biotechnology, Jiangnan University,Wuxi 214122,Jiangsu, China；3.Myande Group Co.,Ltd.,Yangzhou 225000,Jiangsu, China)

The free radical scavenging activities of methanol extracts of 10 different vegetable oils were evaluated by ORAC, FRAP, ABTS and DPPH methods, and correlation analysis was used to evaluate relationship between free radical scavenging activities and contents of tocopherol and polyphenol.The results showed that the order of the four free radical scavenging activities of all the samples from high to low was FRAP, ORAC, ABTS, DPPH. The free radical scavenging activities of methanol extracts of different vegetable oils were different from each other, and the scavenging activity on ORAC free radical of sesame oil methanol extract was the highest, reaching 1 187.43 μmol TE/100 g.Polyphenol content had better correlation with free radical scavenging activity of methanol extract of vegetable oil than tocopherol content.The correlations between polyphenol content and scavenging activities on ORAC and ABTS free radicals were statistically significant (P<0.01),and the correlation coefficients ware 0.819 and 0.946,respectively.The correlations between contents of polyphenol and tocopherol and scavenging activities on DPPH and FRAP free radicals were all statistically significant (P<0.05).

vegetable oil; methanol extract; free radical scavenging activity; tocopherol; polyphenol; correlation

2016-08-16；

2016-12-22

博士后基金(2016M591769)

黄健花(1980)，女，副教授，博士，主要从事食品脂质方面的研究工作(E-mail)huangjianhua1124@126.com。

TS225.1;TQ641

A

1003-7969(2017)04-0028-04