转录因子Sp1和存活素在乳腺癌中的表达及相关性研究

史晓宇 张 敬 孟 玮 赵峻峰

转录因子Sp1和存活素在乳腺癌中的表达及相关性研究

史晓宇 张 敬 孟 玮 赵峻峰

目的 探讨转录因子Sp1和存活素(Survivin)在乳腺癌中的表达及意义并分析两者相关性。方法 纳入我院2013年6月—2015年6月确诊为乳腺癌的患者70例，应用免疫组织化学染色的方法检测Sp1和Survivin在70例乳腺癌及20例癌旁正常组织中的表达，并检测两者的表达与乳腺癌临床病理参数的关系。结果 Sp1和Survivin在乳腺癌中表达的阳性率分别为71.43%和78.57%，正常乳腺组织中表达阳性率分别为30%和10%，差异有统计学意义(P<0.05)，两者的表达与乳腺癌患者的淋巴结转移、TNM分期、脉管浸润有关(P<0.05)；而与患者的年龄、肿瘤大小、组织学分级无相关性(P>0.05)；在乳腺癌组织中Sp1和Survivin的表达之间呈正相关(r=0.517，P<0.01)。结论 转录因子Sp1和Survivin与乳腺癌的发病密切相关，可能作为临床判断乳腺癌的辅助性指标，二者联合检测对预后的判断具有一定的指导价值。

转录因子Sp1；存活素；乳腺癌；预后

近年来，我国乳腺癌的发病率不断上升，而且有年轻化的趋势，肿瘤呈现局部侵袭性，且极易发生转移。尽管近二十年来随着新辅助化疗和综合治疗的临床应用，乳腺癌的疗效已经显著提高，但仍有部分患者出现复发和转移，因此研究乳腺癌的转移以及侵袭的分子机制对于改善乳腺癌的预后具有重要的临床意义[1-2]。近年来转录因子Sp1和存活素(Survivin)不断被人们所认识，发现两基因表达与肿瘤的发生发展有着密切的关系，特别是对于肿瘤的转移有着重要的影响，但是目前关于转录因子Sp1和Survivin对乳腺癌影响的报道尚少。本研究采用免疫组织化学染色的方法检测Sp1和Survivin在人类乳腺癌的不同分型中的表达差异，结合肿瘤分型对表达差异情况进行研究，并搜集所纳入研究的患者术后发生转移及非转移情况，评价其对乳腺癌临床价值，为进一步阐明转录因子Sp1和Survivin在乳腺癌的疾病发病及治疗中的作用及今后的基因靶向治疗研究提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2013年6月—2015年6月我院确诊的乳腺癌患者70例，年龄26～78岁，中位年龄50岁，所有患者均为女性，均接受乳腺癌根治术或改良根治术，均未接受过术前放射治疗和化疗，术后病理诊断均为浸润性乳腺癌。临床分期及病理类型参照国际WHO的诊断标准进行分析判断。同时选择上述20例患者距离肿瘤组织>5 cm的癌旁正常乳腺组织标本作对照。

1.2 实验材料

Sp1鼠抗人单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司；Survivin兔抗人多克隆抗体和免疫组织化学SP试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3 检测方法

采用免疫组化SP法检测乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织中Sp1和Survivin的表达情况，具体步骤：将乳腺癌组织及癌旁正常乳腺组织标本蜡块切成4 μm厚的石蜡切片，脱蜡，水化，3%过氧化氢封闭内源性过氧化酶活性，枸橼酸盐缓冲液中微波抗原修复。一抗置4℃冰箱过夜，按试剂盒说明进行染色，DAB染色后苏木素复染，中性树胶封片。

1.4 实验结果的判定

阳性结果判定：Sp1染色颗粒位于细胞核内，Survivin染色颗粒位于胞浆之中，染成棕黄色或棕褐色为阳性，通过显微镜10×20倍视野，每张切片对应随机纳入10个视野进行阳性细胞计数，阳性细胞大于50%为强阳性(+++)，25%～50%为阳性(++)，0～25%为弱阳性(+)，未着色为阴性(-)。

1.5 统计学分析

应用SPSS 21.0统计软件对数据做统计分析，采用χ2检验分析乳腺癌及癌旁正常乳腺组织中Sp1和Survivin的表达及与临床病理指标的关系，乳腺癌中Sp1和Survivin表达的相关性应用Spearman等级相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 70例乳腺癌及癌旁正常乳腺组织中Sp1和Survivin的表达情况

乳腺癌组织中Sp1表达的阳性率为71.43%(50/70)，阳性颗粒定位于细胞核，高于在癌旁正常乳腺组织中的表达(30%)(6/20)，Survivin在乳腺癌组织中表达的阳性率为78.57%(55/70)，阳性颗粒定位于细胞质中，高于在癌旁正常乳腺组织中的表达(10%)(2/20)。乳腺癌组织Sp1和Survivin的阳性率明显高于癌旁组织阳性率，两者差异具有统计学意义(P<0.01)(表1)。

表1 70例乳腺癌及癌旁正常乳腺组织中Sp1和Survivin的表达[n(%)]

2.2 乳腺癌中Sp1和Survivin的表达水平与乳腺癌患者临床病理学特征的相关性

乳腺癌组织中Sp1和Survivin的表达水平与患者的TNM分期、脉管浸润和淋巴结转移有关，差异有统计学意义(P<0.05)，且在Ⅲ～Ⅳ期乳腺癌中的表达均高于Ⅰ～Ⅱ期乳腺癌中的表达(P<0.05)，在有脉管浸润的乳腺癌中的表达均高于无脉管浸润乳腺癌中的表达(P<0.05)，在淋巴结转移阳性乳腺癌中的表达均高于淋巴结转移阴性乳腺癌中的表达(P<0.05)，Sp1和Survivin的表达水平与患者的年龄、肿瘤直径和组织学分级无关(P>0.05)(表2)。

表2 70例乳腺癌中Sp1和Survivin的表达与临床病理指标的关系[n(%)]

2.3 Sp1和Survivin在乳腺癌中表达的相关性

本组55例Survivin阳性表达的患者中，Sp1也同时阳性表达者占46例；20例Sp1阴性表达的患者中，Survivin也同时阴性表达者占11例，Sp1和Survivin的表达呈正相关(r=0.517，P<0.01)(表3)。

表3 70例乳腺癌中Sp1和Survivin表达的相关性

Note：The Spl expression positively correlated with Survivin expression in breast cancer tissues(P<0.01).

3 讨论

乳腺癌是世界上最常见的一种恶性肿瘤，位居所有女性恶性肿瘤之首，且近年来随着生活方式、饮食及环境污染包括基因等因素的不断变化，乳腺癌的发病率逐年增加，严重危害人们的健康及生存质量，给社会及患者家庭带来了重大的打击[3-4]。30%～40%的早期乳腺癌患者，即使接受了辅助治疗，仍会发展为转移性乳腺癌[5]。因此，进一步寻找有关乳腺癌发生发展规律的生物标记物是该病有效治疗、提高生存率的关键点，是今后研究的重要方向。

转录因子Sp1是一种序列特异性的DNA结合蛋白，其广泛存在于几乎所有组织的细胞核中，调控富含GC/TC序列启动子的表达，在细胞增殖分化、凋亡和肿瘤形成等过程中发挥重要的作用[6-7]。近年来研究发现Sp1蛋白在肿瘤组织中的异常表达和活化可通过促进肿瘤生长因子和血管生成因子的基因转录机制，正向调节肿瘤的增殖和血管生成，导致肿瘤的发生发展和转移[8-9]。研究表明，Sp1蛋白在正常组织中低表达或无表达，在多种肿瘤组织中，如肝癌、肺癌、胃癌等高表达，且表达水平随肿瘤的病理学分级的升高而升高，且表达越高的患者预后越差[10-12]。目前，仅少量报道关于乳腺癌中Sp1和Survivin的表达情况，但缺乏对Sp1和Survivin与乳腺癌关系的更深入研究和病例报道，本研究对乳腺癌的深入研究具有重要的研究意义。

近年来国内外研究表明，Survivin是一种新近发现的分子量约16.5 kDa的细胞内蛋白，属于凋亡抑制蛋白家族，在胚胎和大多数肿瘤组织中高表达，但在除胸腺和睾丸以外的成人组织中未被发现[13]。已有研究证实Survivin呈异常表达与肿瘤的发生和浸润转移密切相关，因此阐明在细胞凋亡和增殖中Survivin异常表达的分子机制及其作用，在肿瘤的基因靶向治疗方面具有重要意义[14]。生物信息学分析发现，Survivin近端启动子区存在潜在的Sp1位点，Sp1通过结合Survivin GC序列的启动子从而调控Survivin的基因转录[15]。Chen等[16]研究认为，肺癌细胞中启动子区Sp1位点被抑制后Survivin mRNA表达明显下降，提示在肺癌细胞中Sp1在调控Survivin的基因转录过程中发挥了重要的作用。

本研究通过深入探讨Sp1和Survivin在乳腺癌中表达的情况以了解其临床意义，结果显示，Sp1和Survivin在乳腺癌组织中均过表达，显著高于两者在癌旁乳腺组织中的表达，且与乳腺癌患者的淋巴结转移、TNM分期、脉管浸润有关，而与患者年龄、肿瘤大小和组织学分级无相关性。因此我们可以认为Sp1和Survivin是反应乳腺癌增殖能力以及迁移能力的重要指标，在乳腺癌的发生发展中起到了促进的作用，它的过表达可能预示乳腺癌增殖较快，侵袭性强，预后欠佳。

此外，在本研究乳腺癌组织中Sp1和Survivin联合表达的比例较高，Survivin表达阳性的55例患者中有46例Sp1也同时表达阳性，Survivin的阳性表达水平越强，Sp1的阳性表达水平越强，两者的表达形式具有一致性，呈正相关，提示这两种蛋白在乳腺癌发生发展中起协同作用，其具体机制有待于进一步研究和探讨。

综上所述，Sp1可能作为判断乳腺癌预后不良的指标之一，联合检测Sp1和Survivin对判断乳腺癌的预后具有很好的参考价值，为乳腺癌今后进一步的诊治提供理论依据。

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11 潘奇，朱凯，陈万勇，等.转录因子spl表达与肝癌临床病理特征及预后的关系[J].中国肿瘤临床，2014，41(20)：1284-1287.

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14 邓威，孙兴旺.Survivin靶向治疗在肿瘤中的研究进展[J].实用肿瘤学杂志，2014，28(2)：165-169.

15 梁欢，崔宝红，王影，等.Sp1和Survivin在结肠癌中的表达及意义[J].实用肿瘤学杂志，2012，26(4)：348-353.

16 Chen Y，Wang X，Li W，et al.Sp1 upregulates survivin expression in adenocarcinoma of lung cell line A549[J].Anat Rec(Hoboken)，2011，294(5)：774-780.

(收稿：2016-11-24)

Expression of transcription factors Sp1 and Survivin in breast cancer and their correlation

SHIXiaoyu，ZHANGJing，MENGWei，ZHAOJunfeng

Department of Medical Oncology，The First Affiliated Hospital of Hebei North University，Zhangjiakou 075000，China

Objective The objective of this study was to investigate the expression and clinical significance of transcription factors Sp1 and Survivin in breast cancer and to further analyze their correlation.Methods Seventy cases of breast cancer patients were diagnosed as breast cancer from June 2013 to June 2015.The expression of Sp1 and Survivin in 70 cases of breast cancer and 20 cases of adjacent normal tissues were detected by immunohistochemical staining.The relationship was detected between the protein expression and the clinicopathological parameters of breast cancer.Results The positive rates of Sp1 and Survivin in breast cancer were 71.43% and 78.57%，respectively.The positive rates of Sp1 and Survivin were 30% and 10% in adjacent normal breast tissues.They showed a significant difference(P<0.05).In breast cancer tissues，there were no differences in the lymph node metastasis，TNM stage and vessel infiltration(P>0.05).There were also no differences in the age，tumor size and histological grade of patients with breast cancer(P>0.05).In breast cancer tissues，there was a significant positive correlation between Sp1 and Survivin expression(r=0.517，P<0.01).Conclusion The transcription factors Sp1 and Survivin are closely related to the pathogenesis of breast cancer，which may serve as an adjunctive index for the diagnosis of breast cancer.It has certain guiding value for clinical diagnosis，treatment and prognosis of breast cancer.

Sp1；Survivin；Breast carcinoma；Prognosis

河北北方学院附属第一医院肿瘤内科(张家口 075000)

史晓宇，女，(1980-)，硕士，主治医师，从事恶性肿瘤基础与临床工作的研究。

史晓宇，E-mail：shixiaoyu-120@163.com

R737.9

A

10.11904/j.issn.1002-3070.2017.02.003