利用穴盘育苗筛选抗根肿病大白菜材料的实用技术

徐立功+韩太利+孙继峰+杨晓东+谭金霞

导读：大白菜根肿病在全国乃至世界范围内的发生日趋严重，严重影响着大白菜的品质和产量。通过不断试验，探讨出一套利用穴盘育苗筛选大白菜抗根肿病材料的实用技术，以期为大白菜根肿病抗性品种的快速、有效选育提供依据。

目前国内对十字花科根肿病的研究集中在其致病机理及病害防控上，对选育抗病品种这一最为经济有效的防病方法的技术研究却不多。利用基质和穴盘育苗筛选抗根肿病材料对关键环节的技术要求较高，通过2013-2015年3年的试验积累，探讨出一套利用穴盘育苗筛选大白菜抗根肿病材料的实用技术，再结合田间抗性鉴定、单株留种，希望为大白菜根肿病抗性品种的快速、有效选育做出贡献。

1 新鲜根肿组织中休眠孢子的分离提纯

接种用休眠孢子最好从新鲜根肿组织中提取，可保证孢子的致病力。为避免其他杂菌、杂物对试验结果的影响，需对休眠孢子进行分离、提纯。根肿组织流水冲洗干净后晾干，-20℃冰箱中冷冻备用。将10 g根肿组织切碎，加50 mL 灭菌水，在研钵中研细或用榨汁机打碎，然后用4层脱脂纱布过滤，将滤液移入一干净的50 mL离心管，3 100 r/min离心15 min，弃上清液，沉淀重溶于50 mL灭菌水，

3 100 r/min离心10 min，此步操作重复2次。弃上清液，在沉淀中加5 mL 50%蔗糖溶液，混匀后，3 100 r/min离心10 min，用移液枪把上清液小心移入1支干净的离心管，加30 mL灭菌水，3 100 r/min离心10 min，弃上清液，沉淀重溶于30 mL灭菌水，3 100 r/min离心10 min，此步操作重复2次，最后沉淀溶于5 mL灭菌水，-20℃冰箱中冷冻备用。

2 育苗接种专用试验棚的准备

有条件的地区，可利用单独的日光温室或于发病地头建塑料大拱棚，专做抗根肿病材料苗期接种、筛选试验用，同时注意防止休眠孢子的扩散。或做长×宽×高为150 cm×30 cm×120 cm的可移动铝合金棚架，两宽面置外拉门，四面均用60目防虫网罩起。棚架上部设单脊双面屋顶，用塑料膜覆盖防雨。竹条苗床裁成合适大小置于棚底。将网棚置于易于隔离、通风见光良好的地块，内挂2块黄板，处于网棚中上部位置。网棚周围铺0.5 m石灰条带防止孢子扩散。当外界温度高于25℃时，棚顶要覆遮光率50%的遮阳网遮光。

3 带菌基质配制及材料播种

3.1 带菌基质配制

大白菜一般用50穴穴盘育苗，旧穴盘要用50%百菌清可湿性粉剂1 000倍液喷洒消毒、冲洗晾干后方可使用。秋季育苗基质配方为草炭∶蛭石∶珍珠岩=3∶1∶1，春季育苗基质配方为草炭∶蛭石∶珍珠岩=6∶1∶3。装盘时，将菌液稀释后均匀拌入基质，按根肿组织∶基质=1∶20的质量比掺匀。

3.2 播种

华北地区一般春季在2月底3月初，秋季在8月下旬，将试验材料播种于穴盘中，每穴1～2粒，要保证种子的纯度和净度在99%以上。蛭石和珍珠岩（体积比1∶1）覆盖后，將苗盘移到育苗接种专用试验棚苗床上，浇透水，春季覆膜保墒秋季不用。保证棚内夜温16～23℃、昼温20～26℃，温度过低时加盖保温材料，过高时通风及覆遮阳网遮荫。

4 播种后管理及伤根处理

4.1 播种后苗盘管理

播种后5天左右大白菜即可出苗，要及时揭膜，防止烤苗。子叶展平前及时间苗、移补苗。出苗后视基质含水量，一般每2～3天微喷1次清水，浇水量不宜过大，防止稀释基质中孢子浓度，保持基质湿度60%～70%即可。幼苗第3片真叶展开时，结合浇水，每3～5天喷施1次瑞莱20-10-20通用型肥料1 000倍液。气温高时，浇水次数增加至每天1次，但注意控制喷水量，保持基质湿度70%～80%即可。如网棚中不慎进入害虫，可用1.8%阿维菌素乳油2 000～3 000倍液防治菜青虫、夜蛾等，用10%吡虫啉可湿性粉剂3 000倍液防治蚜虫。

4.2 伤根处理

为提高接种的成功率，出苗后15～20天，在早晨或傍晚进行1次伤根处理。操作时，距白菜幼苗根茎部0.5～1.0 cm，用小刀垂直于穴孔基质表面插下至穴孔底部，注意不要伤及幼苗主根、割破穴盘，一刀即可。伤根后及时浇水。

5 统计调查

一般出苗后45天左右，感病对照品种全部发病时开始统计调查。由于穴盘育苗的大白菜根系紧紧缠绕基质，不易将根系完全洗出，为保持抗病材料根系的完整性以便定植，采用直接观察根坨法统计：0级，主根、侧根无肿块；1级，侧根有明显肿块，主根无肿块；2级，主根有明显肿块，侧根无肿块；3级，主、侧根均有少量明显肿块；4级，主、侧根均有大量严重肿块。材料抗病性评估标准：高抗，0<病情指数<10；抗病，10≤病情指数<20；耐病，20≤病情指数<30；感病，30≤病情指数≤100。病情指数=

[∑（各级发病株数×各病级代表数值）/（调查总数×最高病级代表数值）]×100。调查后的根肿组织可洗净晾干后，冻于-20℃冰箱中留待下次接种用。

6 抗病单株的田间鉴定、留种

对于初选出的高抗或抗病单株材料，春季若通过春化处理（种子催芽后，0～3℃冰箱中20天低温处理再播种穴盘），可直接定植于根肿病选种专用试验田进行小株采种，同时进行田间抗病性鉴定、筛选；秋季则先定植于根肿病选种专用试验田，11月下旬经田间抗病性鉴定后，选取母株入窖假植，来年春天再定植进行成株采种。

7 穴盘育苗接种法与其他抗性检测方法的比较分析

2013年9月，针对16份大白菜自交系材料对根肿病4号优势生理小种的抗性（接种用病样采自青岛农业科学院试验田），田间种植抗病性鉴定和穴盘育苗接种抗性检测的同时，委托青岛农业大学园艺学院对材料进行抗病主效基因CRa和CRb的PCR检测，结果表明，穴盘育苗接种法与田间抗病性鉴定的结果最相近，比抗病基因PCR检测法的准确率高出11.8%（表1）。

与菌土法、蘸根法、浸芽法、注射法等人工接种鉴定方法相比较，穴盘育苗接种直接用草炭配制的基质试验，pH值6.0左右，满足根肿病发病条件，操作简便；筛选出的抗病单株材料由于是穴盘育苗，定植于根肿病选种试验田后缓苗快，成活率高；穴盘育苗微环境的一致性和后继的田间抗病性鉴定，提高了抗病材料筛选的准确率；穴盘育苗便于集约化操作，可同时筛选大量材料，加快了抗病品种选育进程。