乙型肝炎e抗原阴性表面抗原携带者的危险因素及预防措施

温 泉，施扬佳，李加位（广西壮族自治区钦州市灵山县：佛子镇卫生院，广西灵山5546；卫生监督所，广西灵山55400；檀圩镇中心卫生院，广西灵山554）

·临床与转化医学·

乙型肝炎e抗原阴性表面抗原携带者的危险因素及预防措施

温 泉1，施扬佳2，李加位3（广西壮族自治区钦州市灵山县：1佛子镇卫生院，广西灵山535426；2卫生监督所，广西灵山535400；3檀圩镇中心卫生院，广西灵山535413）

目的：探讨乙型肝炎e抗原（HBeAg）阴性、表面抗原（HBsAg）阳性慢性乙型肝炎患者的危险因素及预防措施．方法：选取广西壮族自治区钦州市灵山县佛子镇卫生院感染性疾病科2013／01－2015／12收治的HBeAg阴、阳性，且HBsAg阳性慢性乙型肝炎共108例患者作为研究对象，对其进行血常规、尿常规、大便常规、生化全套、肝炎全套、梅毒、艾滋、彩超、心电图、胸片等常规检查，应用荧光定量聚合酶链反应、流式细胞仪进行HBV⁃DNA、T淋巴细胞亚群检测．结果：HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者常规检查出现异常的例数与HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者比较，差异无统计学意义（P＞0．05）．HBeAg阴性、HBsAg阳性患者HBV⁃DNA水平与CD8＋T淋巴细胞呈正相关（r＝0．686），而与CD4／CD8比值呈负相关（r＝－0．508，P＜0．05）；与总T、CD4＋T细胞无明显相关性．HBeAg阳性、HBsAg阳性组患者的HBV⁃DNA水平与总T、CD4＋T、CD8＋T淋巴细胞水平均无明显相关性．结论：HBeAg阴性、HBsAg阳性患者HBV⁃DNA水平与机体细胞免疫密切相关，应充分重视此类患者的诊断与治疗．

乙型肝炎；慢性；T淋巴细胞亚群；病毒；DNA

0 引言

国内大多数学者曾经认为，对慢性乙型病毒性肝炎患者而言，e抗原（HBeAg）阴转是病情趋向好转、稳定或无传染性的表现之一．但随后临床发现，一部分HBeAg转阴的慢性乙型肝炎患者病情反而加重．近年来，随着人们对乙型肝炎认识的不断加深，HBeAg阴性慢性乙型肝炎的特殊性逐渐被重视，遂有学者将其列为慢性乙型肝炎的一个独立临床类型，并进行相关研究．然而，迄今为止，对于HBeAg阴性乙肝患者的认识及研究仍然较为薄弱，一些机理、诊断、治疗等实际问题未能充分认识并得到满意解决［1－3］．本研究对HBeAg阴性及HBeAg阳性、HBsAg阳性患者的常规检查、乙型肝炎病毒DNA（HBV⁃DNA）水平、细胞免疫状态进行相关分析，现报道如下．

1 资料和方法

1.1 一般资料选取广西壮族自治区钦州市灵山县佛子镇卫生院感染性疾病科2013／01－2015／12收治的慢性乙型肝炎患者108例，其中HBeAg阴性60例，HBeAg阳性48例；轻度40例，中度32例，重度36例；男88例，女20例；年龄18～68（平均40．5± 5．0）岁．

1.2 诊断标准HBeAg阴性、HBsAg阳性慢性乙型肝炎的诊断均符合中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会2005年联合制订并于2010年修订的慢性乙型肝炎防治指南［4－5］中的诊断标准．

1.3 方法

1．3．1 常规检测 所有患者入院后均行血常规、尿常规、大便常规、生化全套、肝炎全套、梅毒、艾滋、彩超、心电图、胸片等常规检查．

1．3．2 HBV⁃DNA水平、细胞免疫状态的检测 患者于入院后第2天清晨抽取空腹静脉抗凝血5 mL，使用美国Coulter流式细胞分析仪进行T淋巴细胞亚群检测，每份标本均重复操作2次后取平均值．HBV⁃DNA的检测采用聚合酶链反应结合荧光探针的体外DNA扩增、检测技术．PCR诊断试剂盒由中山大学达安基因诊断中心生产，在核酸扩增仪（PE5700，美国）上扩增．分析HBeAg阴性、HBeAg阳性患者的HBV⁃DNA水平与T淋巴细胞亚群之间的相关情况．

1.4 统计学处理采用SPSS16．0统计学软件对数据进行分析，将HBV⁃DNA水平数值进行对数转换，再采用Spearman法与T淋巴细胞亚群进行相关性分析，P＜0．05表示差异有统计学意义．

2 结果

2．1 HBeAg阴性、HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者常规检查项目比较HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者常规检查出现异常的例数与HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者例数比较，差异无统计学意义（P＞0．05，表1）．

表1 HBeAg阴性、HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者常规检查项目比较

2．2 HBV⁃DNA水平与T淋巴细胞亚群的相关性分析HBV⁃DNA水平与总T淋巴细胞、CD4＋／CD8＋比值、CD4＋T、CD8＋T细胞均不存在相关性（P＞0．05，表2）．

表2 HBV⁃DNA水平与T淋巴细胞亚群的相关性

表2 HBV⁃DNA水平与T淋巴细胞亚群的相关性

2．3 HBeAg阴性乙肝患者HBV⁃DNA与T淋巴细胞亚群的相关性分析在60例HBeAg阴性乙肝患者中，HBV⁃DNA与T细胞中的总T、CD4＋T无相关性，但与CD8＋T呈正相关（P＜0．05）；而与CD4＋／CD8＋呈负相关（P＜0．05，表3）．

表3 HBeAg阴性患者HBV⁃DNA与T淋巴细胞亚群的相关性

表3 HBeAg阴性患者HBV⁃DNA与T淋巴细胞亚群的相关性

2．4 HBeAg阳性乙肝患者HBV⁃DNA与T淋巴细胞亚群的相关性分析在48例HBeAg阳性乙肝患者中，HBV⁃DNA与T细胞亚群中的总T、CD4＋／CD8＋、CD4＋T、CD8＋T均无相关性（P＞0．05，表4）．

表4 HBeAg阳性患者HBV⁃DNA与T淋巴细胞亚群的相关性

表4 HBeAg阳性患者HBV⁃DNA与T淋巴细胞亚群的相关性

3 讨论

迄今为止，乙型病毒性肝炎的发病机制尚未完全明确．机体感染HBV后，病情严重程度、临床表现特征等很大程度上取决于HBV病毒诱发的机体免疫反应．以前的大多数观点认为，HBV在机体内处于持续存在且复制的状态时，可分泌HBeAg；随着患者病情的发展、转归，HBV停止复制时，抗HBe出现和／或HBeAg转阴．但是，近年来随着对HBV及慢性乙型肝炎研究的深入，越来越多的临床资料［6－7］表明，一部分HBeAg阴性的HBV感染者，不仅HBV⁃DNA呈高滴度状态，而且病情进展迅速．临床与基础研究［8－9］表明，HBeAg阴性、HBsAg阳性在慢性乙型肝炎患者中所占的比例逐年增高，HBeAg阴性患者在临床特征、抗病毒治疗、预后等诸多方面与HBeAg阳性患者比较，差异具有统计学意义．HBeAg阴性、HBsAg阳性患者HBV存在CP区（基本核心C基因启动子）变异和／或前C区基因突变，这种形式突变后的基因，尽管对HBV复制没有任何影响，但是能直接影响HBeAg的合成和分泌，该现象导致的结局是在HBV仍然复制的患者血清中检测不到HBeAg的存在．

对HBeAg阴性、HBsAg阳性乙肝患者而言，大量研究［10－11］表明，HBV⁃DNA水平与机体肝脏炎症、病理损害程度呈正相关，同时变异后HBV的大量复制与肝脏病理损害存在着密切的相关性．但尚未明确机体肝脏这种病理损害是变异的HBV对肝细胞的直接损害，还是该变异的HBV通过诱导机体一系列的异常免疫应答而致的免疫病理损伤？本研究结果显示，HBeAg阴性、HBsAg阳性慢性乙型肝炎患者的HBV⁃DNA滴度与CD8＋T淋巴细胞呈正相关，而与CD4＋／CD8＋比值呈负相关．该结果提示，HBV病毒的增殖与活化能够充分激活机体的细胞免疫，这体现在CD8＋T淋巴细胞活性的增高，活化后的CD8＋T可攻击携带有HBV的肝细胞，进而通过此途径导致机体肝细胞的免疫病理损伤．然而，对于HBeAg阳性、HBsAg阳性慢性乙型肝炎患者，本研究显示，HBV⁃DNA滴度与机体细胞免疫水平不存在任何相关性，此结果与文献报道［1－2，12－13］中的相关结论一致．有学者认为，导致该结果的原因可能与机体内HBeAg的持续存在相关，机体内HBeAg呈持续存在状态时，其对HBV病毒产生某种特殊耐受性，此种耐受能降低宿主对HBV病毒的抗感染免疫应答［14］．

综上所述，HBeAg阴性、HBsAg阳性的慢性乙型肝炎患者，其肝脏的免疫病理损害程度与HBV⁃DNA滴度密切相关，其HBV⁃DNA水平不仅影响着患者的诊断与治疗，而且左右着疾病的发展与预后［15］，因此，HBeAg阴性乙肝患者的抗病毒、免疫调节治疗等相关措施应引起临床医生的足够重视．

［1］周晓晖．67例慢性乙型肝炎及乙肝后肝硬化患者胆囊病变的B超检查分析［J］．中国医学创新，2013，10（14）：89－90．

［2］陈素梅，邓 勇，林成祖，等．乙型肝炎e抗原阴性的慢性乙型肝炎病毒感染患者肝组织病理和免疫组化特点研究［J］．中国基层医药，2016，23（2）：204－207，208．

［3］谢 蕾，潘克女，骆 欣，等．乙型肝炎病毒e抗原阴性肝硬化患者检测血清病毒DNA水平的临床意义［J］．国际流行病学传染病学杂志，2014，41（3）：213－214．

［4］中华医学会．病毒性肝炎防治方案［J］．中华传染病杂志，2001，19（1）：56－62．

［5］中华医学会肝病学分会，中华医学会感染病分会．慢性乙型肝炎防治指南［J］．中国预防医学杂志，2006，40（2）：136－140．

［6］钟大妮，李国坚，吴继周，等．广西地区乙肝病毒基因分型与临床表现及机体免疫功能关系的研究［J］．中国医学创新，2013，10（2）：1－3．

［7］刘鸿生，胡志刚，俞 蕾，等．HBeAg阴性乙型肝炎患者HBV⁃LP及HBV⁃DNA检测分析［J］．中华医院感染学杂志，2012，22（13）：2743－2745．

［8］林家新．胸腺肽α1联合恩替卡韦治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的疗效观察［J］．临床合理用药杂志，2011，4（3A）：73－74．

［9］白占杰．论酶联免疫吸附试验中影响因素及解决方法［J］．实验与检验医学，2012，30（2）：185．

［10］张茂海，吴建业，陆玲娜，等．胶体金与酶联免疫法检测乙肝表面抗原结果分析［J］．国际检验医学杂志，2011，32（14）：1625－1626．

［11］刘 莹，王 苏，张桂华．前S1抗原在乙型肝炎病毒检测中的临床意义［J］．中国现代药物应用，2016，10（1）：31－32．

［12］周红星，江应安．乙型肝炎病毒表面抗原在慢性乙型肝炎病毒感染后不同临床阶段的定量检测及临床意义［J］．中国医师进修杂志，2014，37（24）：15－18．

［13］赵旭宏．联合免疫对乙型肝炎表面抗原阳性的慢性乙型肝炎病毒感染孕妇子女的免疫效果［J］．中国医师进修杂志，2014，37（12）：43－45．

［14］陈 红，韩 静，杨海珊．乙肝表面抗原携带者不同喂养对婴儿的影响［J］．中国妇幼健康研究，2008，19（4）：316－318．

［15］王 青，徐佳薇，姚 宁．乙型肝炎病毒表面抗原携带者配偶感染乙型肝炎危险因素调查［J］．重庆医学，2014，43（21）：2767－2769．

The risk factors and preventive measures of HBsAg carriers of HBeAg⁃negative hepatitis B

WEN Quan1，SHI Yang⁃Jia2，LI Jia⁃Wei3

1Fozi Township Hospital，lingshan 535426；2Health supervision Institute，Lingshan 535400；3Tanxu Central Health Hospital，Lingshan 535413，China

AIM：To investigate the risk factors and preventive measures of HBsAg carriers of HBeAg⁃negative hepatitis B．METHODS：A total of 108 cases of patients with HBeAg⁃nega⁃tive，HBeAg⁃positive and HBsAg⁃positive chronic hepatitis B admitted into Prevention and Care Group of Fozi Township Hospital from January 2013 to December 2015 were selected as the objects of study．All the patients was given routine examinations such as blood routine，urine routine，routine stool，a full set of biochemistry examination，a full set of hepatitis examination，syphilis，HIV，color doppler ultrasound，electrocardiogram，chest radiograph and so on．HBV⁃DNA level was tested by fluorescent quantity PCR，and T lymphocyte subsets were examined by flow cytometry．RESULTS：There's no significant statistical difference on abnormal cases number bewtween patients with HBeAg⁃negative chronic hepatitis B and patients with HBeAg⁃positive chronic hepatitis B（P＞0．05）．The HBV⁃DNA level in patients with HBeAg⁃nega⁃tive，HBsAg⁃positive chronic hepatitis B had a postive correlation with the CD8＋T lymphocyte（r＝0．686，P＜0．05），a negative correlation with the ratio of CD4＋／CD8＋T lymphocyte（r＝－0．508，P＜0．05），and no remarkable correlation with the total T cells and CD4＋T lymphocyte．However，for patients with HBeAg⁃positive，HBsAg⁃positive chronic hepatitis B，there was no correlation betweenthe HBV⁃DNA level and the total T cells，CD4＋T lympho⁃cyte，CD8＋T lymphocyte．CONCLUSION：HBV⁃DNA level is closely correlated with the cellular immune status in the patients with HBeAg⁃negative，HBsAg⁃positive chronic hepatitis B，it is necessary to pay attention to the diagnosis and treatment of these patients．

hepatitis B；chronic；T lymphocyte subsets；virus；DNA

R512．6＋2；Q523

A

2095⁃6894（2017）03⁃53⁃03

2016－09－25；接受日期：2016－10－13

温 泉．E⁃mail：wagfsx＠163．com