不同流感病毒检验方法比较研究

陈志雄

（浙江省瑞安市疾病预防控制中心，浙江 温州 325200）

不同流感病毒检验方法比较研究

陈志雄

（浙江省瑞安市疾病预防控制中心，浙江 温州 325200）

目的 探究和比较不同的流感病毒检验方法的应用效果。方法 此次研究选择了2016年11月～2017年2月流感疫情中156例急性呼吸道感染的患者作为研究对象，对其分别实施了胶体金免疫层析技术（GICA）和实时荧光RT-PCR两种方法进行相关流感病毒检测，并对比分析两种方法的检验结果。结果 运用RT-PCR法对患者进行检测，结果是阳性的患者有76例，阳性率为48.72%；运用GICA法对患者进行检测，结果是阳性的患者有70例，阳性率为44.87%。特异性为88.75%，阳性预测值PPV为87.14%，阴性预测值为82.56%，总符合率为75.8%，一致性KAPPA检验，P＜0.01。通过比较分析两种方法的检测结果发现结果一致的患者数为61例，检测结果差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 GICA检测方法操作便捷，检验快速且具有较高的准确率，是流感病毒疫情及临床检验中有价值的筛选方法。

流感病毒；检验方法；比较研究

流感是因流感病毒造成的一种急性呼吸道的传染疾病，极易对儿童、老年人及免疫力低下的人群造成不可估量的危害，是目前仅有的全球性监测的疾病[1]。对流感病毒进行诊断的方法有免疫荧光检测、血清学检测、抗原快速检测、核酸检测及病毒培养等。在对突发的以流感病毒感染为主要疾病的公共卫生事件进行早期、快速检测时，常进行GICA检测与RT-PCR检测[2]。此次研究对2016年2月我市发生的一次流感疫情中的156例急性呼吸道感染患者分别实施GICA检测与RT-PCR检测，比较分析两种方法在突发的公共卫生事件及临床检验中的应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

此次研究选取了2016年11月～2017年2月我市发生的一次流感疫情中的156例急性呼吸道感染患者作为研究对象，其中男性患者86例，女性患者70例。患者的主要临床表现有发热（温度均在38℃以上），并根据患者自身病情差异伴有不同程度的咳嗽及咽喉痛痒等症状。给予156例急性呼吸道感染患者患者GICA检测与RT-PCR检测[3]，并对检测结果进行对比分析。

1.2 实验材料

RNA提取试剂、甲型流感病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法）、甲型流感病毒抗原检测试剂（胶体金法）、美国ABI 7500型实时荧光定量PCR扩增仪。

1.3 样本提取方法

将压舌板抵于患者的舌根部，将两根咽拭子同时探入患者的咽部，将扁桃体隐窝处上皮细胞组织取下。把一根咽拭子放入pH值在7.4～7.6的Hank's溶液中，而将另一根咽拭子放入胶体金快速检测的裂解液中。

1.4 实验检测方法

1.4.1 GICA检测方法

对装有样本的细胞裂解液进行充分搅拌，用吸管取3～4滴裂解液于检测卡的加样孔中，待15 min后观察分析检测结果。若检测区和对照区分别出现一条红色带，则表示检测结果为阳性；若仅对照区出现一条红色带而检测区未出现红色带，则表示检测结果为阴性。

1.4.2 RT-PCR检测方法

提取方法为kingfisher duo自动核酸提取仪及其配套试剂提取病毒核酸，检测试剂为上海之江的甲型流感病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法），PCR仪器为美国ABI 7500型实时荧光定量PCR扩增仪。

1.5 统计学方法

采用SPSS 24.0软件分析，计数资料用率表示，采用x2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 GICA法检测结果

对采集的156份样品实施现场快速检测，结果显示流感甲型抗原阳性标本70份，阳性检出率为44.87%。

2.2 RT-PCR法检测结果

对采集的98份样品采取RT-PCR检测，结果显示季节性流感甲型通用引物阳性标本81份，阳性检出率82.65%。

2.3 两种方法的检测结果比较分析

98例患者中，经两种检测方法结果一致的患者有67例。两种方法检测结果差异无统计学意义（P＞0.05）。详细结果见表1。

表1 两种方法检测结果的比较（例）

3 讨 论

因为流感样病例进行鉴别诊断的依据十分简单，造成流感病毒的感染极易与普通感冒相混淆，为临床诊断、治疗与隔离带来了极大的困难，极易在学校、工厂及建筑工地等人群密集的场所形成爆发式疫情，并且引发了抗生素滥用等无数问题[4]。目前，流感病毒感染进行实验室诊断的方法有病毒培养、RT-PCR及GICA等。流感病毒培养纵然是检测的金标方法，可分别进行病毒分型及抗原变异分析的检测，但由于其检测周期过长，而操作十分繁琐，进而对检验人员的自身素质有着极高的要求，不适合爆发式疫情进行病原学的快速诊断。RT-PCR检测法也有许多优点，但RT-PCR的实验室需大型专用设备仪器，且实验室分区严格而要求洁净程度高，造成了极高的检验成本。GICA检测法是用胶体金作示踪物用于抗原抗体间反应的新型的标记技术，该技术有着快捷、简便、准确、操作误差小、稳定性好及检验成本低廉等优点，因此在免疫学检测中得到了广泛的重视及应用。目前，已有相关报道表示用胶体金免疫层析法检测流感病毒具有较强的特异性、良好的稳定性与便捷的操作方法，且灵敏度能达到临床的应用要求，可以为临床的诊断、治疗及隔离提供有效的参考依据。

此次研究对156例急性呼吸道感染患者分别实施了GICA检测及RT-PCR检测，检测结果显示，GICA法的阳性检出率略低于RT-PCR法，但两种方法的检测结果差异无统计学意义（P＞0.05）。综上所述，GICA检测法为流感病毒疫情及临床诊断中有价值的筛选方法。

[1] 刘兴安,吕金艳.内蒙古大兴安岭地区人群接种甲型H1N1流感疫苗21～93天的免疫效果分析[J].当代医学,2010,16(27):159-160.

[2] 桑凤梅,刘兴国,晨 辉.蒿芩清胆汤对湿热型流感病毒性肺炎患者的疗效及免疫指标与 NF-κB 水平分析[J].中华医院感染学杂志,2014,24(24):6050-6051.

[3] 蔡翁义,蔡 颖,魏 锐.几种甲型H1N1流感病毒SYBRGreenI荧光RT—PCR检测方法的验证[J].口岸卫生控制,2013,18(6):28-33.

[4] 『十五』重大科技专项『新城疫禽流感病毒快速检测技术研究』取得重大突破[J].监督与选择,2003,(1):30-30.

[5] KanraG,MarchisioP,Feiterna-sperlingC等.流感病毒佐剂疫苗与裂解疫苗在儿童中的免疫原性和耐受性的比较研究[J].国外医学:预防.诊断.治疗用生物制品分册,2005,28(4):184-185.

本文编辑：吴 卫

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ISSN.2095-8242.2017.07.1308.02