ABO抗体缺失致血型鉴定困难1例*

韩 斌 葛东梅 刘培燕 冯智慧

・个例报告・

ABO抗体缺失致血型鉴定困难1例*

韩 斌 葛东梅 刘培燕 冯智慧

ABO血型 抗体缺失 血型血清学 基因分型

ABO抗体是人类最重要的天然抗体，是一些类似A或B抗原的非特异抗细菌物质和免疫系统自我调节的产物[1]。在临床常规ABO血型鉴定过程中，正、反定型不符造成血型鉴定困难的案例时有报道，ABO抗体减弱或缺失为原因之一。近期对1例血标本进行血型鉴定时，发现正、反定型不符，最终证实是由ABO抗体缺失所致，现报道如下。

材料与方法

1 病例简介 男性，44岁，否认既往输血史，因咽部肿物于医院耳鼻喉科就诊，临床输血科手术备血时发现ABO正、反定型不符，遂送至本实验室进一步鉴定。

2 试剂与仪器 单克隆抗-A与抗-B（荷兰Sanquin，批号8000176548，8000169003）； ABO反定型试剂红细胞（上海血液医药生物有限责任公司，批号20145337）；人源多克隆抗-A、抗-B（效价128，成都协和生物技术有限责任公司，批号20140714）；DNA提取试剂盒（Invirtrogen公司）；ABO 基因分型试剂盒（天津市秀鹏生物技术开发有限公司）；Exon6、7直接测序引物由TaKaRa公司合成。全自动DNA序列分析仪（3100-Avant，ABI公司），电泳仪（PAC300，Bio-Rad公司），离心机（KA2200，KUBOTA公司），PCR扩增仪（C1000，Bio-Rad公司）。

3 血清学试验 ABO正、反定型采用试管法。

4 吸收放散试验 患者红细胞洗涤后制备红细胞压积，与等量人源抗-B血清混合，4℃充分吸收，吸收后的红细胞用4℃生理盐水洗涤3次，置56℃放散。放散液与标准试剂B细胞未发生凝集及溶血反应，提示患者红细胞无B抗原存在。

5 DNA提取 采用DNA提取试剂盒，按照说明书进行DNA提取。

6 ABO基因分型 按照天津市秀鹏生物技术开发有限公司提供的ABO-SSP试剂盒说明书进行操作。

7 ABO基因第6、7外显子直接测序 引物序列参考Olsson ML等设计的引物[2]：

Exon6：Forward：5'-CGGAATTCACTCGCCACTG CCTG G GTCTC-3'；Reverse5'-CGGGATCCATGTGGGTGGC ACCCT GCCA-3'；Exon7：Forward：5'-CGGGATCCCCGTCCGCCTG CTTG CAG-3'；Reverse：5'-GGGCCTAGGCTTCAGTTACTC-3'。

PCR扩增反应体系：dNTP 各400 μmol/L，模板DNA 500 ng，每条引物0.1 μmol/L，Taq酶3 U，Mg2+2.5 μmol/L，最终反应体系为50 μl。

PCR扩增反应程序：95℃预变性10 min；94℃ 60 s、63℃ 90 s、72℃ 60 s，进行10个循环；94℃ 60 s、61℃90 s、72℃ 60 s，进行25个循环；72℃延伸10 min；4℃保存。对扩增产物进行凝胶电泳，对目的片段进行纯化，使用ABI3100-AvantDNA序列分析仪进行序列分析。

结 果

1 血清学检测结果见表1。经血清学试验（试管法）发现，在室温及4℃时，肉眼及显微镜观察均显示其ABO正定型均

为O型，反定型为B型。血清加倍后，与ABO试剂红细胞反应，ABO反定型结果仍为B型。标本红细胞吸收人源抗-B血清后进行放散，放散液与试剂B细胞仍呈阴性反应。

2 ABO基因分型结果 基因分型检测结果显示，此例标本为基因型为O2/O2。见图1。

3 直接测序分析 此例标本Exon 6表现为261G缺失、297G/G，Exon7表现为646A/A、681A/A、771T/T、829A/ A，完全符合O102/O102序列特征。

表1 血清学检测结果

图1 ABO-基因PCR-SSP电泳图

讨 论

ABO血型系统的抗体属于天然抗体，一般情况下，ABO系统中的抗-A、抗-B最早可以在3个月大的婴儿体内检出，以后效价持续增高，约5～10岁时达到成人水平，老年人体内抗-A、抗-B水平较青年时期低[3]。ABO抗体的存在具有一定的规律，即几乎所有缺乏某种抗原的个体，其血清中必然存在针对所缺乏抗原的抗体[4]。在某些疾病状态，如低丙种球蛋白血症、恶性肿瘤、造血干细胞移植、长期接受免疫抑制剂以及大量输液等情况下，会出现ABO抗体减弱或消失，导致血型鉴定困难。

本例标本的血清学试验结果显示，正定型时患者红细胞与抗-A、抗-B均不凝集，反定型时患者血清与试剂A细胞发生强凝集，与试剂B细胞不凝集。首先考虑红细胞上抗原减弱，为此进行了B抗原的吸收放散试验，结果未检出B抗原。其次考虑血清中抗体减弱，遂将反定型中血清加倍并置于4℃，但结果未发现患者血清与试剂B细胞有凝集。为确定此例标本的ABO血型，我们进行了深入的分子生物学研究，通过ABO基因分型及测序试验，结合血清学的试验结果，考虑此例标本为抗-B抗体缺失，确定其ABO血型为O型。据文献报道，在ABO抗体减弱的患者中，抗-B减弱比抗-A减弱者多1倍以上，这可能是由于红细胞上B抗原相对A抗原更弱所致[5]。

综上所述，在临床进行ABO血型鉴定时，必须严格进行正、反定型。当出现正、反定型不符时，要判断是ABO亚型还是由于疾病导致的抗原、抗体减弱，必要时需进行进一步的分子生物学试验，正确定型，保证临床输血安全。

1 喻琼，苏宇清，梁延连，等.天然ABO抗体缺失的分子机制研究[J]. 国际输血及血液学杂志，2010，33（6）：492-495.

2 Olsson ML，Irshaid NM，Hossein-manf B，et al. Genomic analysis of clinical samples with serologic ABO blood grouping discrepancies： identification of 15 novel A and B subgroup alleles[J]. Blood，2001，98（5）：1585.

3 杰夫・丹尼尔. 人类血型[M]. 第2版. 北京：科学出版社，2007：59-60.

4 迟晓云，谭海艳，冯智慧，等. ABO疑难血型3步分析法鉴定抗体极度减弱致血型鉴定困难1例[J]. 中国输血杂志，2013，26（10）：1036-1037.

5 金沙，向东，刘曦，等. 疾病导致ABO 血型抗原及抗体减弱的分析[J]. 临床输血与检验，2010，12（1）：61-62.

R457.1+1 R392.11

B

1671-2587（2017）02-0201-02

2016-08-29）

（本文编辑：姚萍）

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.02.032

*本课题受山东省青岛市市南区科技发展资金项目（No.2013-13-013-YY）和青岛医疗卫生优秀人才培养项目资助。

266071 山东省青岛市中心血站输血医学研究所（韩斌，刘培燕，冯智慧）；青岛大学附属医院输血科（葛东梅）

韩斌（1985–）男，山东平度人，技师，硕士，主要从事血液免疫学及输血技术学工作，（E-mail）qdhanb@163.com。

冯智慧，硕士，主要从事免疫血液学及免疫遗传学研究，（E-mail）qd_hla@163.com。