一种改进的蛋白质测定方法

张玉良

摘 要：文章提出了一种改进的蛋白质测定方法，包括以下步骤：（1）称取一定量的样品，加入到凯氏定氮专用消化管中，加入一定量的浓硫酸，待样品浸泡0.5小时后，再加入硫酸钾和硫酸铜，作为催化剂；（2）将装有样品的消化管放入消化炉中，逐渐升温到450℃；（3）待消化液变成绿色澄清后，关闭消化炉；（4）待反应液冷却至室温，在凯氏定氮仪上进行蒸馏和滴定。文章改进了浓硫酸、硫酸铜和硫酸钾以及40%氢氧化钠的用量，提高了反应速度，减少了反应时间，提高大批量生产的经济效益。

关键词：蛋白质；凯氏定氮；硫酸钾和硫酸铜

1 技术背景

蛋白质是人体所必需摄入的营养成分，人体必需摄入足够量的蛋白质才能保证正常运行。准确了解各种食物中蛋白质含量意义重大。因此，检测蛋白质的含量是需求量较大的检测业务，在大批量检测中，减少检测时间是当务之急。而传统的检测方法和仪器一次只能检测少量的样品，且操作起来步骤繁多，需要技术人员时刻关注。易造成结果偏差。本文对传统方法和仪器方法进行了结合，通过适当的改进和调整，将催化剂硫酸钾和硫酸铜和浓硫酸加入量改进，缩短了检测时间，减少了试剂用量，适用于大批量生产。

2 试剂

（1）浓硫酸；（2）硫酸铜；（3）硫酸钾；（4）30%过氧化氢；（5）硼酸；（6）氢氧化钠；（7）溴甲酚绿指示剂（1g/L溴甲酚绿乙醇溶液）；（8）甲基红指示剂（1g/L甲基红乙醇溶液）；（9）混合指示剂：1份甲基红和5份溴甲酚绿溶液临用混合；（10）盐酸标准溶液：浓度为0.1mol/L。

3 仪器设备

（1）凯氏定氮仪；（2）消化炉；（3）酸碱滴定管。

4 检测步骤

（1）称取0.5-1克样品于消化管中，加入5克硫酸钾，0.5克硫酸铜，轻摇消化管至样品和药品分布均匀，再量取10ml浓硫酸，观察反应是否剧烈。

（2）待初反应不剧烈后，将消化管放入消化炉中，从100℃开始逐渐升温至450℃。

（3）观察反应液变成绿色澄清后停止加热，关闭消化炉。待温度降至室温时，向反应液中加入2ml过氧化氢溶液，继续加热反应。反应结束后，冷却。

蒸馏瓶中加入20%硼酸溶液20ml，3滴混合指示液，调整凯氏定氮仪冷凝管的高度，使冷凝管的下端插入吸收液面以下。提前配备好40%氢氧化钠溶液，将碱管插入氢氧化钠溶液中。取下消化管，放在凯氏定氮仪架上，开启凯氏定氮仪开关，直至消化液变成黑色，液面离开冷凝管下端，再蒸馏1min。然后用少量水沖洗冷凝管下端外部，停止蒸馏。

（4）取下吸收瓶，将吸收液转入150ml容量瓶中，定容。准确吸取25ml吸收液，用盐酸标准溶液滴定，直至颜色由酒红色变成绿色，pH 5.1。同时作试剂空白。

（5）计算结果

式中：X-蛋白质含量，g/100g；

V1-滴定时消耗盐酸标准溶液的体积，mL；

V2-空白消耗盐酸标准溶液的体积，mL；

C-盐酸标准溶液浓度，mol/L；

f-吸收液稀释倍数；

m-试样的质量，g；

0.014-标准滴定液相当于氮的质量，kg/mol；

F-氮换算为蛋白质的系数，一般食物为6.25；纯乳与纯乳制品为6.38；面粉为5.70；玉米、高粱为6.24；花生为5.46；大米为5.95；大豆及其粗加工制品为5.71；大豆蛋白制品为6.25；肉与肉制品为6.25；大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83；芝麻、向日葵为5.30；复合配方食品为6.25。

本论文所用试剂的量与传统国标法试剂用量如表1。

从表1 可见，本论文可以节省大量检测试剂，从而可以节约成本，符合企业经济效益。

本论文得到的测定结果与传统国标法得到的测定结果比较如表2。

从表2可见，改进后的方法和传统方法的结果误差在1%之内，结果准确度高且稳定。

5 结束语

本文对传统方法和仪器方法进行了结合，通过适当地改进和调整，将催化剂硫酸钾和硫酸铜和浓硫酸加入量改进，缩短了检测时间，减少了试剂用量，适用于大批量生产。改进后的测定结果的准确性和稳定性比较高。在大批量生产中，本文所述方法在节省试剂，减少检测时间，增加准确度上有较大的优势，可以作为企业检测蛋白质的可选方案。

参考文献

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