超高效液相色谱法测定消积化虫散中厚朴酚与和厚朴酚含量

潘 伟，谢 扬，杨雪峰，揭定华

（重庆市永川食品药品检验所，重庆 402160）

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超高效液相色谱法测定消积化虫散中厚朴酚与和厚朴酚含量

潘 伟，谢 扬，杨雪峰，揭定华

（重庆市永川食品药品检验所，重庆 402160）

目的建立测定消积化虫散中厚朴酚与和厚朴酚含量的超高效液相色谱（UHPLC）法。方法 采用Thermo AccliamTMRSLC PA2色谱柱（100 mm×2.1 mm，2.2 αm），以甲醇-水（70∶30，V／V）为流动相，等度洗脱，流速为0.3 mL／min，柱温为35℃，检测波长为294 nm，进样量为2 αL。结果 厚朴酚与和厚朴酚进样量线性范围分别为0.040 5～0.121 5 αg（r＝0.999 7）和0.010 1～0.060 8 αg（r＝0.999 6），平均加样回收率分别为100.05%和100.15%，RSD分别为0.47%和1.26%（n＝6）。结论 该方法简便、有效，可提高消积化虫散的质量标准。

消积化虫散；超高效液相色谱；厚朴酚；和厚朴酚；含量测定

消积化虫散收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂(第九册)》[1]，由白术（炒）、茯苓、陈皮、厚朴（姜制）等10味药材组方，有消积化虫、开胃增食之功效，临床主要用于治疗小儿厌食纳呆、消化不良、食积虫积、脘腹胀痛等。目前，该制剂执行标准只收载了散剂项下的常规检查项，并未对其中的特定药材进行专属成分含量测定。近来，已有报道对方中主药成分（白术和茯苓）进行了含量测定[2]，但该制剂的质量标准仍有待进一步完善。厚朴作为方中重要成分，在食积气滞、腹胀便秘、痰饮喘咳等方面有很好的疗效，广泛用于中成药中[3-4]。为此，本研究中以厚朴中的厚朴酚与和厚朴酚作为指标性成分，采用超高效液相色谱（UHPLC）法测定其含量，旨在为该制剂质量标准的拟订提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Ultimate 3000RS型超高效液相色谱仪、Thermo AccliamTMRSLC PA2色谱柱（100 mm ×2.1 mm，2.2 μm，赛默飞世尔仪器有限公司）；Mettler Toledo XP 205、AL 204型电子天平（瑞士 Mettler-Toledo公司）；SB-5200DTDN型超声清洗器（宁波新艺超声设备公司）；UP超纯水机（美国密里博公司）。

1.2 试药

厚朴酚对照品（批号为 110729-201513，纯度为98.8%），和厚朴酚对照品（批号为110730-201614，纯度为99.3%），均购自中国食品药品检定研究院；消积化虫散(重庆希尔安药业有限公司，批号分别为160901，1600902，1600801）；所用甲醇为色谱纯（德国Merck公司）；其余试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：AccliamTMRSLC PA2柱（100 mm×2.1 mm，2.2 μm）；流动相：甲醇-水（70∶30，V／V）；流速：0.3mL／min；柱温：35℃；检测波长：294 nm；进样量：2 μL。2.2 溶液制备

混合对照品溶液：称取厚朴酚对照品约10 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液1；称取和厚朴酚对照品约10 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液2。精密量取贮备液1和2各5 mL，置同一 25 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液：取本品10袋，倾出其内容物，混匀，称取2 g，精密称定，置100 mL容量瓶中，加入甲醇约80 mL，超声提取1 h，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过0.22 μm滤膜，即得。

图1 超高效液相色谱图

阴性对照品溶液：按处方工艺制备不含厚朴的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备厚朴阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验：按 2.1项下色谱条件，精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各2 μL，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见图1。可见，厚朴酚与和厚朴酚能实现基线分离，分离度大于1.5，理论板数均大于5 000，且阴性无干扰。

线性关系考察：分别精密量取2.2.2项下贮备液1和2各25 mL，置同一50 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取上述混合溶液1，2，3，4，5，6 mL，置不同的10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，按2.1项下色谱条件，分别精密量取2 μL注入液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积（Y）为纵坐标、对照品进样量（X，μg）为横坐标进行线性回归，得厚朴酚与和厚朴酚的线性方程，详见表1。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液2 μL，按2.1项下色谱条件连续进样6次，记录峰面积。结果厚朴酚与和厚朴酚峰面积的 RSD分别为 0.64%和0.60%(n＝6)，表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一供试品（批号为160901），称取6份，每份约2 g，精密称定，按2.2项下方法制备供试品溶液，并按2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算 RSD。结果厚朴酚与和厚朴酚峰面积的 RSD分别为0.91%和1.05%(n＝6)，表明该方法重复性良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，室温下放置，于0，2，4，6，8，12，24 h时按2.1项下色谱条件分别测定并计算峰面积的 RSD。结果厚朴酚与和厚朴酚峰面积的RSD分别为1.71%和1.59%(n＝7)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

加样回收试验：称取6份已知各成分含量的供试品（批号为160901），每份约2 g，精密称定，分别精密加入2.2项下的贮备液1和2各10 mL，并依法制备供试品溶液，同时按2.1项下色谱条件进样测定各组分的含量，并计算回收率。结果见表2。

表1 线性关系考察结果（n＝6）

表2 加样回收试验结果（n＝6）

2.4 样品含量测定

取 3批不同批号（批号分别为 160901，160902，160801）的样品，每批3份，每份约2 g，分别制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件对其进行测定，记录峰面积，按外标法计算厚朴酚与和厚朴酚的含量，结果见表3。

表3 样品含量测定结果（mg／g，n＝3）

3 讨论

3.1 提取方法优化

根据2015年版《中国药典（一部）》[5]所载方法，采用甲醇浸渍的方法能有效地提取厚朴中的厚朴酚与和厚朴酚，但耗时长。有研究表明，采用甲醇索氏提取、回流或超声也能有效地提取这2种成分[6-13]。对比4种方法发现，提取效率：回流提取≈超声提取＞索氏提取＞浸渍提取。综合考虑，最终选用超声提取法。在提取时间方面，考察了不同超声时间（30，60，90 min）各组分提取量的变化，发现60 min内各成分提取量随提取时间的增加而增加，60 min后无明显变化。故最终确定以甲醇超声提取，提取时间为60 min。

3.2 色谱条件优化

UHPLC由于其超高速度、超高分离度及超高分辨率，在药物的分析中应用广泛[14]，为此，本研究中尝试采用UHPLC分析厚朴酚与和厚朴酚。以甲醇-水为流动相，通过调节柱温、流动相的比例及流速，得到最佳色谱条件：流动相为甲醇-水（70∶30，V／V），流速为0.3 mL／min；柱温为35℃。在此条件下，厚朴酚与和厚朴酚能很好地分离，相比采用一般的高效液相色谱（HPLC）法分析，此方法更经济、环保、高效。

3.3 方法评价

本研究中采用UHPLC法同时测定消积化虫散中厚朴酚与和厚朴酚的含量，方法简便、高效，对于提高消积化虫散的质量标准具有积极意义。

[1]WS3-B-1815-94，卫生部药品标准·中药成方制剂(第九册)[S].

[2]李朝骏，顾志华.HPLC-DAD法同时测定消积化虫散中6种成分[J].中成药，2016，38（5）：1040-1043.

[3]张 勇，唐 方.厚朴酚药理作用的最新研究进展[J].中国中药杂志，2012，37（23）：3526-3530.

[4]张淑吉，钟凌云.厚朴化学成分及其现代药理研究进展[J].中药材，2013，36（5）：838-843.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015：191.

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[7]田 琳，莫兰芳，冯文周.高效液相色谱法测定藿香正气片中厚朴酚与和厚朴酚的含量[J].中国医院药学杂志，2009，29（15）：1337-1338.

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[11]张方杰，李 轲.中华肝灵胶囊中厚朴酚与和厚朴酚含量测定的研究[J].当代医学，2008（17）：43-44.

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[13]张海江，郭怀忠，杨晓萍，等.固相萃取-高效液相色谱法测定藿香正气口服液中厚朴酚与和厚朴酚的含量[J].药物分析杂志，2009，29（2）：316-319.

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Content Determination of M agnolol and Honokiol in Xiaoji Huachong Powder by UHPLC

Pan Wei，Xie Yang，Yang Xuefeng，Jie Dinghua
（Yongchuan Institute for Food and Drug Control，Chongqing，China 402160）

Objective To establish a UHPLC method for the content determinion of magnolol and honokiol in Xiaoji Huachong Powder.M ethods The experiment was performed with Thermo AccliamTMRSLC PA2 column（100 mm×2.1 mm，2.2 μm）.The mobile phase was methanol-water（70∶30，V／V），the flow rate was 0.3 mL／min，the column temperature was 35°C，the detection wavelength was 294 nm，and the injection volume was 2 μL.Results The magnolol and honokiol showed a good linear relationship in range of 0.040 5-0.121 5 μg（r＝0.999 7），0.010 1-0.060 8 μg（r＝0.999 6），respectively.The average recoveries were 100.05%，100.15%，and RSDs were 0.47%，1.26%（n＝6），respectively.Conclusion This method is simple and effective，which can be used to determinate the content of magnolol and honokiol in Xiaoji Huachong Powder.

Xiaoji Huachong Powder；UHPLC；magnolol；honokiol；content determination

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2017)06-0028-03

2016-12-08)

10.3969／j.issn.1006-4931.2017.06.008

潘伟（1991-），男，江西宜春人，硕士研究生，助理工程师，研究方向为中药质量控制，（电子信箱）weipan1103＠163.com。