通络祛风贴质量标准研究

陈韵姿，陈淑映，黄 健，何宝凝，梁秀清

(广东省佛山市中医院，广东 佛山 528000)

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通络祛风贴质量标准研究

陈韵姿，陈淑映，黄 健，何宝凝，梁秀清

(广东省佛山市中医院，广东 佛山 528000)

目的建立通络祛风贴的质量标准。方法 采用薄层色谱法对贴膏中的肿节风、山茱萸进行定性鉴别，采用气相色谱法测定冰片、樟脑的含量。结果肿节风、山茱萸特征斑点清晰，分离度好，阴性无干扰。冰片、樟脑质量浓度分别在0.125～0.60 g／L和 0.115～0.69 g／L范围内与各自峰面积线性关系良好，平均加样回收率分别为99.90%和 99.85%，RSD分别为0.12%和0.05%(n＝5)。结论 该方法简便、准确、重复性好，可作为通络祛风贴的质量标准。

通络祛风贴；冰片；樟脑；质量标准

中医将类风湿关节炎（RA）归属于“痹病”范畴， “痹”即闭阻不通之意。中医理论认为，风、寒、湿、热、毒、劳伤、产后及七情失调均为RA发病的诱因，而“正气存内，邪不可干”，发病主要内因是肝肾不足或劳累过度耗损正气，致素体正气亏虚，正气既虚外邪易入侵，复感风寒湿，气血痹阻不行，关节闭涩，或风、寒、湿、热之邪留滞筋骨关节，久之损伤肝肾阴血，筋骨失养，故见关节肿痛、僵硬、屈伸不利、活动障碍，即为痹症[1－4]。通络祛风贴的处方中含肿节风、山茱萸、冰片、樟脑等药材，能祛风化湿、活血化瘀、消肿除痹止痛，用于跌打肿痛、风湿腰腿痛、关节痛、筋骨痛、肌肉酸痛等。为保证制剂质量和疗效的稳定性，本研究中采用薄层色谱(TLC)法对贴膏中的肿节风、赤芍进行定性鉴别，采用气相色谱法对冰片、樟脑进行含量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器

HWM－226型电热恒温水浴锅（上海赫田科学仪器有限公司）；ZF－90型暗箱式紫外投射仪 (上海顾村电光仪器厂)；DHG－9146A型电热恒温鼓风干燥箱（上海浦东荣丰科学仪器有限公司）；AS2060B型超声仪（北京康科瑞检测有限公司）；6890N型气相色谱仪（安捷伦公司），包括7683B自动进样器，BALSTON Gas Generator 9150。

1.2 试药

通络祛风贴（自制，规格为7 cm×10 cm，批号分别为1451410，1451411，1451412）；马钱苷对照品（批号为110736－200833），异嗪皮啶对照品（批号为110837－200304），樟脑对照品（批号为110747－200507），冰片对照品（批号为110743－200504），均购自中国食品药品检定研究院；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别[5－6]

2.1.1 肿节风

取样品1贴，剪成小块，除去盖衬，加甲醇40 mL，超声处理30 min，滤过，滤液置水浴上蒸至体积不再减少，残渣加水25 mL使溶解，将溶液移入分液漏斗中，加乙酸乙酯振摇提取2次，每次25 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取异嗪皮啶对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。取不含肿节风的阴性样品1贴，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。照2010年版《中国药典（一部）》附录TLC法试验，吸取供试品溶液4 μL、对照品溶液2 μL、阴性对照品溶液4 μL分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷－乙酸乙酯－甲酸（6∶4∶0.8）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。详见图1 A。

2.1.2 山茱萸

取样品1贴，剪成小块，除去盖衬，加甲醇30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，用乙醚30 mL振摇提取，弃去乙醚液，水液用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，再用正丁醇饱和水振摇洗涤2次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取马钱苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。取不含山茱萸的阴性样品1贴，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。照2010年版《中国药典（一部）》附录TLC法试验，供试品溶液、对照品溶液和阴性对照品溶液各 1 μL，分别点于同一硅胶G预制板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。详见图1 B。

图1 薄层色谱图

2.2 含量测定[7－11]

2.2.1 溶液制备

供试品溶液：取本品5贴，剪成小块，除去盖衬，置烧瓶中，加水150 mL，照2010年版《中国药典（一部）》附录ⅩD挥发油测定法测定。自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶为止，再加乙酸乙酯5 mL，加热回流40 min，分取乙酸乙酯液，用铺有无水硫酸钠的漏斗滤过，滤液加乙酸乙酯至5 mL，作为供试品溶液。

对照品溶液：称取冰片对照品62.50 mg、樟脑对照品57.50 mg，精密称定，置25 mL容量瓶中，加乙酸乙酯分别制成每1 mL含冰片2.5 mg、樟脑2.3 mg的对照品溶液。

阴性对照品溶液：按处方比例及制法，不加冰片、樟脑和橡胶，制成不含冰片、樟脑的阴性样品，照2.2.1项下方法制备阴性对照品溶液。

2.2.2 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：HP－5毛细管柱（30m×0.32mm，0.25μm）；FID检测器；载气：氮气，流速：1.5 mL／min；氢气，流速：40 mL／min；色谱柱程序升温：90℃保留7 min，5℃ ／min升至140℃；检测器温度：280℃，进样口温度：250℃；进样量：2 μL，分流比：10∶1。分别取对照品溶液和供试品溶液各2 μL，注入气相色谱仪，测定。供试品溶液色谱中呈现与对照品溶液保留时间相同的色谱峰，详见图2。

2.2.3 方法学考察

线性关系考察：分别精密量取对照品溶液 0.5，1.0，1.5，2.0，3.0 mL，置10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，得冰片0.125，0.25，0.30，0.40，0.60 g／L和樟脑0.115，0.23，0.345，0.46，0.69 g／L的系列对照品溶液，分别吸取2 μL注入气相色谱仪，冰片峰面积分别为1 015.25，1 831.22，2 157.6，2 810.37，4 115.91；樟脑峰面积分别为986.40，1 609.44，2 232.49，2 855.54，4 101.63。以冰片、樟脑质量浓度（X，g／L）为横坐标，对照品峰面积(Y)为纵坐标，进行线性回归，得回归方程，冰片 Y＝6 527.7 X＋199.29（r＝0.999 9，n＝5），樟脑Y＝5 417.8 X＋363.35（r＝0.999 9，n＝5）。结果表明，冰片与樟脑质量浓度分别在 0.125～0.60 g／L和0.115～0.69 g／L范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：分别取冰片、樟脑对照品溶液各2 μL，照拟订色谱条件连续进样6次。结果冰片峰面积为1 009.3，1 009.1，1 009.4，1 008.3，1 010.4，1 010.7，平均为1 009.5，RSD＝0.81%(n＝6)；樟脑峰面积为1 004.6，1 005.7，1 005.2，1 004.5，1 004.4，1 004.5，平均为1 004.8，RSD＝0.47%(n＝6)。结果表明，仪器精密度良好。

稳定性试验：依法制备供试品溶液，分别于0，2，4，8，12，24 h时进样测定冰片和樟脑的含量。结果不同时间冰片峰面积分别为1 017.5，1 016.6，1 015.7，1 015.1，1 014.9，1 015.5，RSD＝0.90%(n＝6)，樟脑峰面积分别为1 005.8，1 005.6，1 006.4，1 004.7，1 004.9，1 004.5，RSD＝0.67%(n＝6)。结果表明，供试品溶液在24 h内稳定性良好。

图2 气相色谱图

重复性试验：取同一批（批号为1451501）样品，分别依法制备供试品溶液6份，进样测定。结果得6份样品冰片含量平均值为0.5 mg，RSD＝0.79%(n＝6)；樟脑含量平均值为0.4 mg，RSD＝0.95%(n＝6)。结果表明，方法重复性良好。

加样回收试验：分别精密称取阴性样品6份，剪成小块，除去盖衬，分别加入一定量的冰片和樟脑对照品，依法制备供试品溶液，并进样测定，计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n＝6）

3 讨论

3.1 处方中主要成分的探讨[12－15]

肿节风为金粟兰科肿节风的全草，又名草珊瑚、九节茶、接骨木等，是江西等省稀有的中药材之一。其味辛、苦，性平，有抗菌消炎、清热、解毒、祛风除湿、活血止痛、通经接骨等功效，用于治疗各种炎症性疾病、风湿关节痛、疮疡肿毒、跌打损伤。山茱萸含有生理活性较强的山茱萸苷、酒石酸、没食子酸、苹果酸、树酯、鞣质和多种维生素等有效成分，具有增强免疫、抗炎、抗菌等药理作用。樟脑味辛，性温，具有通窍辟秽、温中止痛等作用。冰片能通诸窍，散郁火，去翳明目，消肿止痛。

3.2 薄层色谱条件的选择

肿节风的薄层鉴别曾采用甲苯－乙酸乙酯－甲酸（9∶4∶1），斑点分离不理想，认为与展开剂的极性过大有关，经多次试验，以正己烷－乙酸乙酯－甲酸（6∶4∶0.8）为展开剂，具有良好的分离效果，斑点清晰，阴性对照无干扰，可作为本品的TLC鉴别系统。山茱萸的薄层鉴别中曾采用药典方法，用甲醇超声处理后的浓缩液进行点样，发现杂质成分太多，特征斑点被掩盖，改为超声提取后分别用乙醚、水饱和正丁醇多次振摇提取，以正丁醇饱和的水进行提取、洗涤、处理。曾选择药典中三氯甲烷－甲醇（3∶1）作为山茱萸的展开剂，斑点分离不理想，改用三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂后，斑点分离清晰、理想。

3.3 气相色谱方法的建立

曾用TLC法对方中的冰片樟脑进行定性鉴别，出现供试品溶液无斑点的情况，考虑到樟脑、冰片本身具有易挥发、易升华的化学性质，采用气相色谱法对两者进行含量测定。在提取方法的考察中，曾用乙酸乙酯浸泡贴膏1 h后超声45 min，但此方法的回收率不及挥发油测定法高，而且挥发油测定法方法简便快捷，故作为本研究中冰片、樟脑的提取方法。测定樟脑、冰片的含量时对柱温进行了优选，柱温过低时分析时间较长，柱温过高时柱效偏低，冰片、樟脑未能完全分离。结果表明，用色谱柱程序升温，90℃保留 7 min，5℃／min升至

140℃；检测器温度为280℃，进样口温度为250℃，分离效果最佳。

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Study on Quality Standard of Tongluo Qufeng Plaster

Chen Yunzi,Chen Shuying,Huang Jian,He Baoning,Liang Xiuqing
(Foshan Hospital of TCM,Foshan,Guangdong,China 528000)

Objective To establish the method for the quality standard of Tongluo Qufeng Plaster.M ethods Herba Sarcandrae and Fructus Corni in the Plaster were identified by TLC,while the content of borneol and camphor were determined by GC.Results The chromatographic spots were clear without interference and easy to recognize.The linear ranges of borneol and camphor were 0.125－0.60 g／L and 0.115－0.69 g／L,and the average recoveries were 99.90%(RSD＝0.12%)and 99.85%(RSD＝0.05%)respectively.Conclusion The method is easy,accurate and reproducible,which can be used as the quality standard for Tongluo Qufeng Plaster.

Tongluo Qufeng Plaster;borneol;camphor;quality standard

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2017)05－0037－04

2016－10－23；

2016－11－22)

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.05.010

陈韵姿（1982－），女，大学本科，主管药师，主要从事医院药学及药品检验工作，（电子信箱）wincechen＠163.com。