上调基因-11在骨肉瘤中的表达及其临床意义

谢伟东

（广东省广州市萝岗区中医医院 广州 510530）

上调基因-11在骨肉瘤中的表达及其临床意义

谢伟东

（广东省广州市萝岗区中医医院 广州 510530）

目的：探讨上调基因-11（UP-Regulated Gene 11，URG11）在骨肉瘤中的表达及其临床意义。方法：选取我院骨科2005 年8月～2010年8月术后病理检查明确为骨肉瘤的石蜡标本100例，并以癌旁的正常骨组织或软骨组织作为对照。比较URG11在骨肉瘤与癌旁正常组织中的表达，分析URG11在骨肉瘤组织中的表达与临床、病理参数之间的关系；绘制Kaplan-Meier生存曲线，分析URG11在骨肉瘤组织中的表达与患者预后的关系。结果：（1）URG11在骨肉瘤组织的阳性表达率明显高于癌旁组织（P＜0.05）；（2）URG11的表达与骨肉瘤的分期、是否发生肺转移关系密切（P＜0.05），而与性别、年龄、生长部位和大小等无关（P＞0.05）；（3）URG11表达阳性患者的术后存活时间显著低于URG11阴性患者（P＜0.05）。结论：URG-11在骨肉瘤组织中表达有所增加，对其生物学行为有一定的促进作用。

骨肉瘤；上调基因-11；表达

骨肉瘤（Osteosarcoma）多见于儿童和青少年[1]，是起源于间叶组织的恶性肿瘤[2]。临床资料显示[3]，近1/4的患者在就医时已发生肺转移，预后很差。为此，需要更多能够提供骨肉瘤早期诊断、判断预后的指标。国内有学者[4]运用抑制消减杂交和差异PCR比较了HBx转染细胞及对照细胞中差异表达的分子，成功克隆了一组可以被HBx蛋白上调的新基因（Up-Regulated Gene，URG），包括URG4、URG11、URG7等。有研究[5]已发现，URG在肝癌、结肠癌等组织的标本中处于高表达，与肿瘤的生长密切相关。现已证实[6]，URG11是一种细胞生长的调节因子，在多种肿瘤组织中都存在高表达，可促进肿瘤的发生发展。但是目前，URG11在骨肉瘤是否存在表达以及对骨肉瘤的意义仍不清楚。本研究采用免疫组化方法，旨在探讨URG11在骨肉瘤组织的表达状况和对肿瘤生物学行为的影响。现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料选取我院骨科2005年8月～2010 年8月术后病理检查明确为骨肉瘤的石蜡标本100例，标本的病历资料齐全；以癌旁的正常骨组织或软骨组织作为对照。所有患者中，男53例，女47例；年龄12～63岁，平均（18.53±1.27）岁；根据Enneking分期：Ⅰ期15例，Ⅱa期18例，Ⅱb期34例，Ⅲ期33例；组织学分类中，普通型65例（其中成骨细胞型33例，成软骨细胞型15例，成纤维细胞型17例），小细胞型12例，毛细血管扩张型13例，其他类型中，骨旁骨肉瘤4例，未分化型骨肉瘤6例；肿瘤生长部位：股骨者40例，胫腓骨者35例，其他部位者24例。所有患者术前均经影像学检查（X线＋MRI）、活检后确诊，采用化疗和手术的治疗方案，手术方式为骨肉瘤骨段切除＋假体置换，术后辅助化疗8～12个疗程。

1.2 方法

1.2.1 检测骨肉瘤组织中URG11的表达采用EnVision法[7]进行染色，脱蜡，水化，PBS漂洗，微波修复，山羊血清封闭30 m in；滴加一抗URG11鼠抗人单克隆抗体，4℃过夜，PBS漂洗后加二抗封闭30 m in；PBS漂洗，DAB显色；自来水漂洗，苏木精复染，脱水；经无水乙醇处理后，用二甲苯透明，中性树胶封片。用PBS代替一抗作为阴性对照，用已知阳性切片作为阳性对照。

1.2.2 染色结果判断染色结果以胞浆和（或）胞核出现黄色或棕黄色为标准[8]。采用二次计分法[9]：随机选取5个显微镜下的高倍视野（×400），每个视野下细胞计数约200个，综合染色后的强弱程度和阳性细胞的百分比判定最后的结果。强度评分：不着色0分，浅着色1分，中着色2分，强着色3分。阳性细胞百分比的评分：0%～5%者0分，6%～25%者1分，26%～50%者2分，51%～75%者3分，超过75% 者4分。最终结果=强度评分×阳性百分比评分，0～3分归为阴性，4～12分归为阳性。

1.3 统计学处理应用SPSS19.0软件进行统计处理。计数资料用率或百分比表示，采用χ2检验，Kaplan-Meier曲线分析预后，P＜0.05，差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 比较骨肉瘤与癌旁组织URG11的表达URG11的表达位于细胞质或细胞核，呈黄色或棕黄色颗粒。见图1。URG11在骨肉瘤的阳性表达为72例（72%），在癌旁组织的阳性表达为21例（21%），两者比较，差异显著（P＜0.05）。见表1。

图1 URG11在骨肉瘤与癌旁组织的免疫组化染色（×400）

表1 骨肉瘤与癌旁组织URG11的表达[例（%）]

2.2 URG11的表达与多项临床及病理参数的关系URG11的表达与骨肉瘤的分期、是否发生肺转移关系密切（P＜0.05），而与性别、年龄、生长部位和大小等无关（P＞0.05）。见表2。

表2 URG11的表达与各项临床及病理参数的关系（例）

2.3 URG11在骨肉瘤的表达与患者预后的关系术后随访资料显示，72例URG11染色阳性的患者死亡48例，死亡率为66.67%；28例URG11染色阴性的患者死亡8例，死亡率为28.57%。绘制Kaplan-Meier生存曲线显示，URG11染色阳性患者的术后存活时间显著低于URG11染色阴性患者（P＜0.05）。见图2。

图2 URG11在骨肉瘤的表达与预后的关系

3 讨论

骨肉瘤的发病主要以儿童和青少年为主，发病率约为每年3/100万[10]。流行病学资料显示[11]，在我国，骨肉瘤占儿童和青少年全部原发恶性肿瘤的4%，导致最终死亡的主要原因是肺转移。浸润和早期转移的高倾向性是小儿肿瘤预后不好的主要原因之一，而且常规的肿瘤治疗措施对于骨肉瘤效果并不理想，可见其诊治难度之大[12]。早诊断、早治疗对于提高疗效、改善预后尤其重要。为此，寻找新的肿瘤标记物、探索新的治疗方法仍然是骨肉瘤的研究热点。

URG11位于人的11号染色体长臂，外显子13个，碱基对2022个，大约可编码70KD的蛋白。有研究发现，URG11内含2个VWC结构域和一个C-lectin结构域。VWC作为血管黏附分子，与细胞黏附、迁移、淋巴细胞的转移都有很密切的关系；而C-lectin结构域则主要参与细胞的增殖、分化及信号通路的过程[13]。

免疫组化的检测显示，URG11的表达存在于多种肿瘤组织中，如：肺癌、甲状腺癌、乳癌、卵巢癌、胃癌、肝癌及前列腺癌[14]；也有学者发现，其表达具有很大差异，相当一部分肿瘤组织中就没有检测到URG11，如：胸腺瘤、淋巴瘤和肾癌组织。

肿瘤的浸润和转移是多基因、多步骤的过程[15]。URG11作为类似细胞生长调节因子，参与了肿瘤的发生和进展过程。有学者[13]采用免疫组化方法研究URG11在胃癌及癌旁组织的表达情况，发现URG11在胃癌组织中高表达，并且和胃癌的分化程度、TNM分期及淋巴结转移相关。与URG11在胃癌组织的表达相似，本研究也发现，URG11在骨肉瘤组织的阳性表达率高于癌旁正常骨组织和软骨组织，URG11的表达与骨肉瘤的分期、发生肺转移关系密切，URG11阳性表达者的术后生存时间低于URG11阴性者。这些表明，URG11的表达是影响骨肉瘤临床生物学行为的重要因素，对疾病的发展起到了重要的促进作用。综上所述，URG11在骨肉瘤组织中表达有所增加，并且对其生物学行为有一定的作用，可以将其作为骨肉瘤早期诊断和判断预后的辅助指标。

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B

10.13638/j.issn.1671-4040.2017.01.075

2016-12-16）