蒙医针刺对卒中后抑郁模型大鼠的影响

李学勇 乌 兰 姚哈斯 苗 美

1)北京中医药大学 北京 100029 2)内蒙古国际蒙医医院 内蒙古呼和浩特 010065

蒙医针刺对卒中后抑郁模型大鼠的影响

李学勇1，2)乌 兰2)姚哈斯2)苗 美2)

1)北京中医药大学 北京 100029 2)内蒙古国际蒙医医院 内蒙古呼和浩特 010065

目的 观察蒙医针刺对卒中后抑郁(PSD)模型大鼠的影响。方法 把24只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺组、西药组，自由饲养。应用栓线法形成局灶性脑缺血再灌注损伤后实施慢性温和性应激刺激结合孤养14 d，建立PSD模型。模型成立后治疗14 d。酶联免疫法(ELISA)检测大鼠海马组织的5-HT、NE、DA含量和血清IL-2、IL-6、TNF-α表达。结果 治疗后，与假手术组比较，模型组大鼠海马组织的5-HT、NE、DA含量显著降低(P<0.01，P<0.05)；血清IL-2、IL-6和TNF-α表达水平显著增高(P<0.01)。与模型组大鼠比较，针刺组和西药组大鼠海马组织5-HT、NE、DA含量显著增加(P<0.01，P<0.05)；血清IL-2、IL-6和TNF-α表达水平显著降低(P<0.01，P<0.05)。针刺组与西药组无显著性差异(P>0.05)。结论 蒙医针刺可明显增加脑组织的单胺递质含量，调节血清细胞因子水平，说明蒙医针刺治疗卒中后抑郁症有一定的抗抑郁作用。

蒙医针刺；卒中后抑郁症；单胺递质；细胞因子

脑卒中后抑郁(post-stroke depression，PSD)是指发生于脑卒中后的一种继发性抑郁症，发生率为31.67%～46.0%[1-2]。PSD的发病机制尚未明确，目前还是假说阶段。该病不仅对患者认知功能产生损害[3]，且会增加病死率[4]。最新研究[5]表明，抑郁症病因复杂，单胺递质假说是PSD发病机制的重要假说之一。抑郁症主要是由于中枢单胺类神经递质如5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)含量下降或功能不足所致，因此增加中枢单胺类递质水平则可以逆转抑郁障碍[6]。血清细胞因子表达水平与PSD病情严重程度存在明显相关性[7]。研究证实[8]，非器质性抑郁症患者血清细胞因子(IL-1、IL-2、IL-6、TNF-α)表达水平明显升高，因此抑郁症的发病机制中上述血清细胞因子发挥着重要作用。临床发现，蒙医针刺可明显改善抑郁状态，提高卒中后抑郁患者生活质量。本课题组在以往的研究基础上做动物实验，观察海马组织5-HT、NE、DA含量以及血清细胞因子(IL-2、IL-6、TNF-α)的表达变化，并初步探讨蒙医针刺对脑卒中后抑郁症的可能作用机制。

1 材料与方法

1．1 实验动物及分组 选取体质量接近的24只SPF级的雄性SD大鼠，体质量(280±20)g，由北京市海淀区兴隆实验动物养殖厂提供，许可证号：SCXK-(军)2012-0004。实验室温度24～26 ℃，相对湿度55%～60%。自由饮水进食，定期更换垫料。做手术前自由饲养7 d后随机分为假手术组、针刺组、模型组、西药组各6只。

1．2 仪器及试剂盒 动物手术显微器械(上海金粒医疗器械股份有限公司)；CV-2000型高频电凝刀(北京康威电子技术有限公司)；5-羟色胺试剂盒、多巴胺试剂盒、去甲肾上腺素试剂盒、白介素-2试剂盒、白介素-6试剂盒、肿瘤坏死因子-a(TNF-α)试剂盒(均武汉华美生物工程有限公司提供)；盐酸氟西汀分散片(PATHEON FRANCE，法国，国药准字J20120001，20 mg/片)；生理盐水(山东科伦制药有限公司，国药准字H37022918)。

1．3 模型制备 所有大鼠术前12 h禁食、不禁水后用改良Longa法[9]复制大脑中动脉闭塞90 min后再灌注模型。假手术组大鼠无栓线插入，不给予应激和孤养。模型成功标准[10]：大鼠苏醒后出现前肢弯曲、肩内旋、以对侧上肢为重的瘫痪，前进时向手术对侧转圈，并伴有同侧Horner征阳性。剔除未成功的大鼠。自由饮水摄食7 d后，除假手术组外其他各组叠加给予孤养结合慢性不可预知的温和应激法制备PSD模型。参照文献[11]并改进：每日行昼夜颠倒(08：00开始保持安静的暗室，20：00之后保持光持光照)、倾斜鼠笼45° 24 h、潮湿垫料(200 mL水至垫料中)24 h、24 h禁食水、夹尾3 min、水平振荡40 min、束缚2 h等刺激中的一种，共14 d。

1．4 治疗方法 针灸组大鼠参照《实验针灸学》和《蒙医疗术学》，选取“顶会”、“额叶组”穴，以13 mm毫针均斜刺0.2 mm左右，每次留针15～20 min，1次/d。西药组用蒸馏水配成氟西汀悬浮液，按4.06 mg·kg-1给药，1次/d。模型组经胃灌注蒸馏水。假手术组不做任何干预。共14 d干预。

1．5 取样品及检测 腹腔注射麻醉药，大鼠完全麻醉后开腹，从腹主动脉取血，待凝血后3 000 r·min-1离心15 min，取上清液快速冷冻。取血后断头快速取海马组织后置于速冻管，液氮快速冷冻并放入-80℃冰箱保存待测。采用ELISA检测技术，按试剂盒说明的操作程序检测海马组织5-HT、NE、DA和血清IL-2、IL-6、TNF-α含量。

2 结果

2．1 各组大鼠海马组织5-HT、NE、DA的含量变化比较 与假手术组比较，模型组大鼠海马组织5-HT、NE、DA的含量显著降低(P<0.01或P<0.05)。与模型组比较，针刺组和西药组大鼠海马组织5-HT、NE、DA的含量增加显著(P<0.01或P<0.05)。针刺组和西药组间无显著差异(P>0.05)见表1。

2．2 各组大鼠血清IL-2、IL-6和TNF-α表达变化比较 与假手术组比较，模型组大鼠血清IL-2、IL-6和TNF-α含量显著增加(P<0.01)。与模型组比较，针刺组和西药组大鼠血清IL-2、IL-6和TNF-α含量明显降低(P<0.01或P<0.05)。针刺组和西药组之间无显著差异(P>0.05)。见表2。

表1 各组大鼠海马组织5-HT、NE、DA结果比较 (±s)

注：与假手术组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较#P<0.05，##P<0.01

表2 各组大鼠血清IL-2、IL-6和TNF-α分析结果比较 (±s)

注：与假手术组比较，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01

3 讨论

脑卒中后抑郁症的发病机制十分复杂。“抑郁症的细胞因子假说”为探讨抑郁症的机制和治疗抑郁症提供了一个新的视角，越来越多证据表明，细胞因子和抑郁症的发生存在密切联系[12]。Wang等[13]研究表明，注射细胞因子诱导剂的小鼠出现了体质量下降、糖水消耗减少等抑郁样行为，抗抑郁药治疗后症状明显好转。近年来国外大量研究[14-16]表明，抑郁症与先天免疫激活和系统性炎症有关，抑郁症存在多种细胞因子尤其是IL-2、IL-6和TNF-α介导的免疫功能紊乱。陈帅等[17]研究发现，IL-6可激活星形细胞和小神经胶质细胞，与抑郁症密切相关。最新研究[18]表明，抑郁症的发生与大脑单胺递质系统的异常释放和免疫功能异常有关。5-HT、NE、DA为最常见的单胺类神经递质，这些单胺类神经递质共同参与睡眠、摄食、体温、情绪、精神、记忆等多种生理功能的调节，5-HT、NE、DA水平降低及其受体功能下降是抑郁症发生发展的基础[19]。因此，细胞因子水平紊乱可能影响神经递质的代谢和免疫功能的异常而导致抑郁症的发生。

本研究中利用卒中后抑郁动物模型，观察大鼠海马组织5-HT、NE、DA含量和血清IL-2、IL-6、TNF-α表达。结果显示，与假手术组比较，模型组大鼠海马组织5-HT、NE、DA含量明显降低；血清IL-2、IL-6和TNF-α表达水平明显增高。与模型组比较，针刺组和西药组大鼠海马组织5-HT、NE、DA含量明显增加；血清IL-2、IL-6和TNF-α表达水平明显降低。针刺组和西药组间无显著差异。从上述结果可以得出如下结论，蒙医针刺治疗法具有明显抗抑郁作用，其作用机制可能与细胞因子的表达和神经递质调节有关。

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(收稿2016-09-28 修回2017-03-02)

国家自然科学基金资助项目，编号：81360577

乌兰，E-mail:wulan631226@163.com

R-332

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1673-5110(2017)08-0033-03