脑胶质瘤患者外周血DC细胞的检测及其临床意义

王伟丰，张智峰

(1、济源市人民医院神经外科，河南济源459000；2、郑州大学一附院神经外科，河南郑州450000)

脑胶质瘤患者外周血DC细胞的检测及其临床意义

王伟丰1，张智峰2

(1、济源市人民医院神经外科，河南济源459000；2、郑州大学一附院神经外科，河南郑州450000)

目的检测脑胶质瘤患者外周血树突状细胞（DC）的改变，探讨其相关的临床意义。方法收集2015年1月至2016年4月我院神经外科收治的脑胶质瘤患者44例，另取同期我院健康体检者40例作为正常对照。DC细胞表达使用流式细胞仪检测。结果DC1细胞和DC2细胞在对照组分别为1．82±0．43%和1．89±0．42%，显著高于胶质瘤组的1．44±0．24%和1．52±0．26%（P＜0．05）。DC1细胞和DC2细胞亚型在胶质瘤Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级不同分级之间存在显著的差异（P＜0．05）。DC1细胞和DC2细胞术后1d和3d均显著低于术前（P＜0．05）。DC1细胞和DC2细胞术后3d又显著低于术后1d（P＜0．05），术后7d恢复到术前水平（P＞0．05）。结论胶质瘤患者中存在DC细胞的低表达，不同分级之间DC细胞表达存在显著差异，手术治疗可以显著减低DC细胞表达，为胶质瘤患者围手术期免疫治疗的时期选择提供了一定的理论依据。

脑胶质瘤；树突状细胞；神经外科

脑胶质瘤（brain glioma）是中枢神经系统肿瘤中最为常见肿瘤，起源于神经胶质细胞，呈浸润性生长与周围正常脑组织分界不清，导致了肿瘤细胞外科手术无法彻底切除，需要手术后辅以放疗和化疗等综合治疗[1]，但由于血脑屏障对化疗药物的阻挡作用，以及胶质瘤细胞对放疗不敏感性，因此手术、放疗、化疗常规治疗方法对胶质瘤病人的治疗效果并不显著[2]。以树突状细胞(dendritic cell，DC)为基础的免疫治疗作为一种特殊的治疗方式，越来越引起人们的重视[3]。DC细胞是目前已知的体内最强的抗原递呈细胞(Antigen presenting cells，APC)，将肿瘤抗原递呈给T细胞，并参与T细胞活化，杀灭肿瘤细胞[4]，已有的研究显示以DC疫苗为基础的主动免疫治疗在胶质瘤中可以取得显著的疗效[5]。本研究检测了脑胶质瘤患者外周血DC细胞的改变，探讨了其相关的临床意义。

1 材料与方法

1．1临床病例资料收集2015年1月至2016年4月我院神经外科收治的脑胶质瘤患者44例，所有病例均经病理证实，组织学类型为星形胶质细胞瘤，其中男22例，女22例，年龄40～71岁，平均年龄58．7±11．3岁，WHO分级Ⅰ级10例，Ⅱ级11例，Ⅲ级12例，Ⅳ级11例。所有病例术前未经化疗、放疗或其他治疗。另取同期我院健康体检者40例作为正常对照，其中男20例，女20例，年龄40～72岁，平均58．2±11．6岁。两组样本在性别、年龄临床资料方面无显著性差异（P＞0．05），具有可比性。

1．2主要试剂和仪器单个核细胞分离试剂盒购自天津灏洋生物制品科技有限责任公司，PECDl1c、FITC－CD123、APC－HLA－DR流式抗体购自美国BD公司，FACBCalibu流式细胞分析仪为美国BD公司产品。

1．3 DC细胞的流式细胞仪检测取受试者术前、术后1d、3d、7d外周静脉血5ml，单个核细胞的分离使用密度梯度离心分离法，按照试剂盒说明5ml静脉血加入等体积的分离液，1500g×20min，血浆层和分离液交界处即为单个核细胞层，吸出单个核细胞层。调整细胞浓度为106个细胞/ml，标本分成2份，按照抗体说明书一份标本加入PE－CDl1c、APC－HLA－DR，另一份加入FITC－CD123、APCHLA－DR室温避光孵育30min。同型对照调零，流式细胞仪检测PE－CDl1c、APC－HLA－DR双阳性的DC1细胞和FITC－CD123、APC－HLA－DR双阳性的DC2细胞。

1．4统计学方法采用SPSS 13．0软件进行分析，两组样本均数比较采用t检验，多组间均数比较采用方差分析，P＜0．05为统计学有显著性差异。

2 结果

2．1 DC细胞亚群在脑胶质瘤中的表达DC细胞分为DC1细胞和DC2细胞两个亚型，从表1可见DC1细胞和DC2细胞在对照组分别为1．82±0．43%和1．89±0．42%，显著高于胶质瘤组的1．44±0．24%和1．52±0．26%（P＜0．05）。

表1 两组DC1细胞和DC2细胞表达的比较

2．2 DC细胞亚群在脑胶质瘤不同分级中的表达从表2可见DC1细胞和DC2细胞亚型在胶质瘤Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级不同分级之间存在显著的差异（P＜0．05）。

2．3 DC细胞亚群在术后的动态变化从表3可见DC1细胞和DC2细胞术后1d和3d均显著低于术前（P＜0．05）。DC1细胞和DC2细胞术后3d又显著低于术后1d（P＜0．05），术后7d恢复到术前水平（P＞0．05）。

表2 四组DC1细胞和DC2细胞表达的比较

表3 DC1细胞和DC2细胞术后表达的动态变化

3 讨论

脑胶质瘤的发生发展是一个极为复杂的过程，发病机制目前仍不清楚，其中涉及到病毒感染、遗传、环境、免疫等多种因素，近年来免疫系统的紊乱逐渐引起了学者们的关注，并成为了研究的热点[6，7]。树突状细胞(DC)的研究是近几年肿瘤免疫治疗领域中的热点之一，由于胶质瘤的特殊性以DC细胞为基础的免疫治疗有可能成为继手术、放疗、化疗后的胶质瘤第四种临床治疗方法[8，9]。DC细胞分为DC1细胞和DC2细胞两个亚型，不同的亚型具有不同的生物学功能，例如DCl诱导Th1分化，DC2诱导Th2分化[10]，本研究检测了DC细胞的两个亚型，结果显示胶质瘤患者外周血DC1和DC2细胞比例显著低于健康对照人群，说明了胶质瘤患者DC细胞的低表达与胶质瘤的发生可能密切相关。进一步的分析显示DC1细胞和DC2细胞亚型在胶质瘤Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级不同分级之间也存在显著的差异，WHO分级中指出Ⅱ级及以上的胶质瘤为恶性胶质瘤[11，12]，结果显示Ⅱ级及以上的胶质瘤DC1细胞和DC2细胞显著低于Ⅰ级，说明了胶质瘤患者DC细胞的低表达与患者的预后也有着密切的联系。

大量的实验室证据显示DC细胞可激活患者体内自身的免疫系统，增强机体的抗癌能力，阻止肿瘤的生长、转移、复发等[13－15]，本研究的结果观察到手术后患者DC1细胞和DC2细胞比例会显著减低，第3d达到低值，到第7d时可以恢复到术前水平，术后DC1细胞和DC2细胞的减低可能是因为手术创伤以及麻醉应激等刺激儿茶酚胺、糖皮质激素等内源性激素释放入血，抑制了免疫功能，这一发现可以为胶质瘤患者免疫治疗提供一定的理论依据，例如术后尽量早期使用DC细胞免疫治疗。

综上所述，本研究显示胶质瘤患者中存在DC细胞的低表达，不同分级之间DC细胞表达存在显著差异，手术治疗可以显著减低DC细胞表达，为胶质瘤患者围手术期免疫治疗的时期选择提供了一定的理论依据。

[1]Tyrinova TV，Leplina OY，Mishinov SV，et al.Cytotoxic activity of ex-vivo generated IFNα-induced monocyte-derived dendritic cells in brain glioma patients[J].Cell Immunol，2013，284(1-2)：146-153.

[2]续岭，谢明祥.胶质瘤的免疫治疗发展及展望[J].中国实用神经疾病杂志，2013，16(1)：79-80.

[3]Buchroithner J，Pichler J，Marosi C，et al.Vascular endothelia growth factor targeted therapy may improve the effect of dendritic cell-based cancer immune therapy[J].Int J Clin Pharmacol Ther，2014，52(1)：76-77.

[4]徐杰，陆华，吴卫江，等.人脑胶质瘤树突状细胞疫苗的临床应用[J].江苏医药，2012，38(10)：1193-1196.

[5]孟冉冉，张宁，张跃伟，等.树突状细胞免疫治疗恶性肿瘤的研究现状[J].医学综述，2013，19(7)：1214-1217.

[6]Yin Z，Lu G，Xiao Z，et al.Antitumor efficacy of argon-helium cryoablation-generated dendritic cell vaccine in glioma[J].Neuroreport，2014，25(4)：199-204.

[7]赵坤，姚型锋，黄俊星.自体DC-CIK免疫疗法治疗晚期非小细胞肺癌的临床研究[J].现代肿瘤医学，2015，23(01)：134-136.

[8]Zhang H，Tian M，Xiu C，et al.Enhancement of antitumor activity by combination of tumor lysate-pulsed dendritic cells and celecoxib in a rat glioma model[J].Oncol Res，2013，20(10)：447-455.

[9]耿奇，李秀萍，张平.DC-CIK细胞治疗晚期乳腺癌的临床观察[J].中国伤残医学，2014，22(11)：69-70.

[10]Zeng J，Wang S.Human dendritic cells derived from embryonic stem cells stably modified with CD1d efficiently stimulate antitumor invariant natural killer T cell response[J].Stem Cells Transl Med，2014，3(1)：69-80.

[11]Bregy A，Wong TM，Shah AH，et al.Active immunotherapy using dendritic cells in the treatment of glioblastoma multiforme[J].Cancer Treat Rev，2013，39(8)：891-907.

[12]祝仲珍，王占科，傅颖媛.肿瘤患者自体外周血CIK/DC-CIK细胞培养制备技术及临床应用研究进展[J].实验与检验医学，2015，33（3）：300-303.

[13]杨学军.恶性胶质瘤生物治疗的现状及前景[J].中华神经外科疾病研究杂志，2013，12(4)：289-292.

[14]王颖，吴德平，明平静，等.DC与CIK共培养细胞体外抗肝癌细胞活性研究[J].中华微生物学和免疫学杂志，2014，34(1)：42-46

[15]郑兵，谢芳一，蔡国辉，等.虫草对DC-CIK增殖及He p G-2细胞杀伤作用的实验研究[J].中国免疫学杂志，2015，31(2)：189-192.

The expresssion of DC cells in patients with brain glioma and its clinical significance

WANG Weifeng1，ZHANG Zhifeng2.1. Department of Neurosurgery，Jiyuan people's Hospital，Jiyuan Henan，459000，China；2.Department of Neurosurgery，the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University，Zhengzhou，450000，China.

Objective To detect the expresssion of DC cells in patients with brain glioma and explore its clinical significance．Methods A total of 44 patients with brain glioma were enrolled in our hospital．Another 40 cases of healthy person were used as normal control．The DC cells were detected by cytometry analysis．Results The proportion of the DC1 and DC2 cells in control group was 1．82±0．43%and 1．89±0．42%，which was higher than that of 1．44±0．24%and 1．52±0．26%in glioma group(P＜0．05)．There was significant difference of DC1 and DC2 cells among gradeⅠ，Ⅱ，Ⅲ，andⅣ(P＜0．05)，After operation for 1d and 3d，DC1 and DC2 cells were significantly lower than that before operation(P＜0．05)，Which was significantly lower 3d than 1d after operation (P＜0．05)．DC1 cells and DC2 cells recovered to the preoperative level after operation 7d(P＞0．05)．Conclusion The expression of DC cells was lower patients with glioma，which bore significant difference among different grades．Operation therapy can significantly reduce the expression of DC cells，which provides a theoretical basis for selection of appropriate period in immunotherapy of glioma patients．

Brain glioma；Dendritic cells(DC)；Neurosurgery

R446．8，R739．41

A

1674－1129(2017)02－0196－03

10．3969/j.issn.1674－1129．2017．02．018

2016-12-12；

2017-03-09)

王伟丰，男，1980年生，本科学士，主治医师，神经外科专业，研究方向：脑胶质瘤的综合治疗。

张智峰，男，1972年生，博士毕业，神经外科专业，主任医师，硕士研究生导师，研究方向：脑胶质瘤的综合治疗、颅底肿瘤的基础与临床治疗。