HPLC法测定玉葡萄根中儿茶素的含量

逯珍花甘肃省天水市中西医结合医院，甘肃 天水 741020



HPLC法测定玉葡萄根中儿茶素的含量

逯珍花
甘肃省天水市中西医结合医院，甘肃 天水 741020

目的：建立高效液相色谱法定量测定玉葡萄根中儿茶素。方法：玉葡萄根甲醇提取液，采用Agilent ZORBAX Extend-C18柱(4.6mm×250mm，5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(10:90)；体积流量：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：280nm。结果：儿茶素在 0.1998～1.9980μg(r=0.9997)范围内具有良好的线性关系，平均回收率为99.32%，RSD为0.83%。结论：本方法操作简便，结果准确，可以较好的测定儿茶素。

高效液相色谱法；玉葡萄根；儿茶素

中药材“玉葡萄根”为葡萄科蛇葡萄属多年生攀援藤本植物三裂蛇葡萄Ampelopsisdelavayana(Franch.) Planch.的根，别名肥猪藤、鸟血藤、三裂蛇葡萄、万初牛、赤木通、野葡萄根、金刚散、绿葡萄、玉葡萄、耳坠果、野葡萄、五爪金等。其味涩、微苦，温，归肝、肾、膀胱、大肠经。临床用于跌打损伤、骨折、烧伤、烫伤、肠炎腹泻、尿涩尿痛、小便淅沥[1]，在骨折方面效果很好，能显著减轻患者的炎症和疼痛，并对骨折的愈合有促进作用[2]。玉葡萄根广范分布于云南省各地[3]，近年来，对于该属的药用植物研究较多。在化学成分研究方面，其化合物类型有黄酮类、低聚茋类、酚酸类、甾醇类、萜类、挥发油等，主要为黄酮类、低聚茋类化合物、酚酸类化合物[4-5]。但对于玉葡萄根的化学成分和含量测定研究很少。根据笔者对玉葡萄根化学成分的研究结果，拟以从中分离得到的含量较高的儿茶素作为对照品，建立高效液相色谱含量测定方法，作为玉葡萄根质量控制的含量检测指标。

1 仪器与材料

1.1 仪器 LC-2010AHT高效液相色谱仪(四元泵、脱气单元、UV检测器、柱箱/带制冷、自动进样器、系统控制器、CLASS-VP， 日本岛津)；色谱柱：Agilent ZORBAX Extend-C18柱(4.6mm×250 mm,5μm),AUW1200型分析天平(日本岛津)。

1.2 试药 儿茶素(批号：110877-201102，中国药品生物制品检定所 )。乙腈为色谱纯，水为超纯水(自制)，其他试剂均为分析纯。

玉葡萄根(批号：20110602，新平县大开门 ；批号：20110605，石屏县龙朋镇；批号：20110620，楚雄州禄丰县；批号：20110621，大理市巍山巍宝山；批号：20110625，昆明市厂口乡；批号：20110810，丽江市永胜县；批号：20110825，弥渡县密祉乡； 批号：20110910，大理市巍山大仓； 批号：20110915，禄劝撒营盘乡；批号：20110928，寻甸县狗街)粉末(过50目筛)，十批药材均为自采。分别经杨树德教授、赵仁主任药师、谭文红副主任药师鉴定为葡萄科蛇葡萄属植物三裂蛇葡萄Ampelopsisdelavayana(Franch.) Planch.的根(玉葡萄根)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent ZORBAX Extend-C18柱(4.6mm×250mm,5μm)；流动相：乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)(10∶90)，等度洗脱；体积流量：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：280nm；进样量：5μL。

2.2 对照品溶液的制备 精密称定儿茶素对照品0.02498g，加入甲醇使溶解，定容至25mL容量瓶中。制成含儿茶素0.1998mg/mL的溶液，作为对照品溶液，备用。

2.3 供试品溶液的制备 取样品粉末(过50目筛)2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声处理30min，放至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，吸取上清液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，作为供试品溶液。

在“2.1”项色谱条件下，分别精密吸取“2.2”项下对照品溶液和“2.3”项下供试品溶液各5μL，注入HPLC色谱仪进行测定。结果，儿茶素与相邻组分基线完全分离，峰形良好，保留时间为8.1min，见图1、图2。

2.4 线性关系考察 分别精密吸取“2.2”项下对照品溶液1、2、4、6、8、10μL，按“2.1”项色谱条件进行测定，记录峰面积积分值，以儿茶素进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归分析，计算出回归方程及检测范围。结果，儿茶素的回归方程为Y=778958X+39755，r=0.9997。表明儿茶素在0.1998～1.9980μg范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验 精密吸取“2.2”项下对照品溶液5μL，连续进样6次测定，结果，儿茶素的RSD=0.56%，表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验 取同一批次药材(批号：20110910)6份，按“2.3”项下方法平行制备供试品溶液进行测定。结果，儿茶素的RSD=2.74 %，说明该方法重复性良好。

2.7 稳定性试验 精密称取药材(批号：20110910)2.0g，按2.3项下方法制备供试品溶液。对放置不同时间(0、2、4、8、12h)的供试品溶液分别进行测定。结果，儿茶素的RSD=0.55%，表明供试品溶液在12h内稳定。

2.8 加样回收率试验 取已知含量的同一批药材(批号：20110910)6份，每份约1g，精密称定，分别精密加入相同量的儿茶素对照品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，并测定其含有量，结果见表1。由表可知，该方法加样回收率良好。

表1 加样回收率试验结果

2.9 样品测定 按“2.3”项下方法，对十批样品进行儿茶素测定，结果见表2。

表2 不同产地玉葡萄根儿茶素含量测定结果

3 讨论

10批不同产地玉葡萄根中儿茶素含量的测定，平均为0.34%。从样品采集时间分析，集中在6～9月，不会对儿茶素含量产生明显影响。从样品来源地理分布分析，玉葡萄根药材中的儿茶素含量，依次升高，顺序为：大理市巍山巍宝山、楚雄州禄丰县、石屏县龙朋镇、丽江市永胜县、新平县大开门和寻甸县狗街、大理市巍山大仓、弥渡县密祉乡、昆明市厂口乡和禄劝撒营盘乡。大理市巍山巍宝山产含量最低，昆明市厂口乡和禄劝撒营盘乡产玉葡萄根中含量较高。从上述分析结果得出初步结论，不同产地对玉葡萄根药材和饮片中儿茶素含量的影响较大。以测定所得中值，平均为0.30%，按70%计算，将玉葡萄根药材和饮片含量限度暂定为：本品按干燥品计算，含儿茶素(C15H14O6)不得少于0.21%。本试验采用HPLC法测定玉葡萄根中儿茶素的含量，为今后更深入的研究玉葡萄根提供参考。

[1]云南省食品药品监督管理局. 云南省中药材标准(第二册 彝族药)[S].昆明：云南科技出版社,2005: 45-46.

[2]刘晓波,刘晓正,晏彩芬,等.玉葡萄根耐缺氧作用的研究[J].云南中医中药杂志, 2007, 28 (11): 39-40.

[3]陈燕,梁敬钰. 蛇葡萄属药用植物的研究进展[J].海峡药学,2009, 21 (3):5-7.

[4]He GX，Pei G，Zhou TD，et al,Determination of total flavonoids and dihydromyricetin in Ampelopsis grossedentala (Hand-Mazz) W. T. Wang[J]. China journal of Chinese materia medica,2000, 25 (7): 423-425.

[5]Du Q,Chen P， Jerz G,et al.Preparative separation of flavonoid glycosides in leaves extract of Ampelopsis grossedentata using high-speed counter-current chromatography[J]. J Chromatogr A,2004, 40 (1):147-149.

Determination Catechin of Root ofAmpelopsisDelavayanaby HPLC

LU Zhenhua

Tianshui Combine Traditional Chinese and Western Medicine Hospital,Tianshui 741020,China

Objective To establish a method for determining catechin of root ofAmpelopsisdelavayanaby HPLC.Methods Theanalysis of A.delavayanamethanolic extract was carried out on Agilent ZORBAX Extend-C18 column(4.6mm×250mm,5μm)with acetonitrile-0.1% phosphoric acid aqueous (10:90)as mobile phase,flow rate wsa 1.0mL/min,column temperature was maintained at 30℃,and detection wavelength was set at 280 nm.Results catechin was 0.1998～1.9980μg(r=0.9997),respectively,The average recoveries were 99.32%(RSD0.83%).Conclusion The method is simple,accurate and candeterminecatechin.

HPLC;Root ofAmpelopsisDelavayana;Catechin

逯珍花(1976-)，女，硕士，主管中药师，研究方向为医院制剂的研发及注册申报。E-mail:463760252@qq.com

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2017-01-23 编辑：程鹏飞)