蛇床子素的高效液相色谱分析

李 婷，许艳秋，安万霞，王广成，高立明，陈丙坤，吴春先

（四川省农药检定所，成都 610041）

◆农药分析◆

蛇床子素的高效液相色谱分析

李 婷，许艳秋，安万霞，王广成，高立明，陈丙坤，吴春先

（四川省农药检定所，成都 610041）

采用高效液相色谱法，以乙腈＋水为流动相，使用ZORBAX SB-C18不锈钢柱和二极管阵列检测器，在321 nm波长下对蛇床子素水乳剂中有效成分进行定量检测。结果表明，方法的线性相关系数为0.999 8，标准偏差为0.002 3，变异系数为0.24%，平均回收率为101.11%。

蛇床子素；高效液相色谱；分析

蛇床子素（cnidiadin）CAS登录号为[484-12-8]，分子式为C15H16O3，化学名称为7-甲氧基-8-异戊烯基香豆素。其结构式见图1。

图1 蛇床子素结构图

蛇床子素是从伞形科植物中提取分离出的天然香豆素类化合物，外观为黄绿色至白色结晶粉末，不溶于水，易溶于丙酮、甲醇、乙醇等多种常用溶剂[1]。蛇床子素作为植物源杀虫剂，以触杀为主，胃毒为辅，药剂进入昆虫体内后，作用于神经系统，导致害虫肌肉非功能性收缩，最终衰竭死亡。其对多种害虫，如菜青虫、茶尺蠖、棉铃虫、甜菜夜蛾以及各种蚜虫等有效[2]。作为植物源杀菌剂，其通过抑制病原菌对葡萄糖和钙的吸收，阻碍病原菌细胞壁中几丁质的沉淀，从而造成菌丝断裂，孢子产生、萌发、粘附、入侵及芽管伸长受阻[3-4]。

本文建立反相高效液相色谱法对蛇床子素水乳剂进行定量分析。方法操作简便、快速、准确，适用于企业生产过程产品质量控制。

1 试验部分

1.1 试剂与仪器

乙腈（色谱纯）、水（蒸馏水）；98%蛇床子素标样，北京百灵威科技有限公司；1%蛇床子素水乳剂。

Waters 2695高效液相色谱仪，具有二极管阵列检测器（2996）和自动进样器；Empower I色谱工作站；色谱柱：不锈钢柱（150 mm×4.6 mm），内装ZORBAX SB-C18填充物（5 μm）；过滤器：滤膜孔径约0.45 μm。

1.2 液相色谱操作条件

流动相：V（乙腈）∶V（水）=60∶40；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；检测波长：321 nm；进样体积：10μL。在此条件下，蛇床子素保留时间约为6.36min。

蛇床子素标样和水乳剂的高效液相色谱图见图2、图3。

图2 蛇床子素标样高效液相色谱图（321nm）

图3 蛇床子素水乳剂高效液相色谱图

1.3 测定步骤

1.3.1 溶液的配制

称取蛇床子素标样约0.03 g（精确至0.000 2 g）于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，超声10 min。移取上述标样母液10 mL于50 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，制得标样溶液。

称取含蛇床子素0.006 g（精确至0.000 2 g）左右的试样于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，超声10 min，过滤、待测。

1.3.2 测定与计算

在1.2液相色谱操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，至相邻2针的响应值相对变化＜1.5%。按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进样测定。

将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中蛇床子素的峰面积分别进行平均，然后按下式计算试样中蛇床子素的质量分数w（%）。

式中：A标、A样分别为标样溶液、试样溶液中蛇床子素峰面积的平均值；m标、m样分别为标样和试样的质量，g；P标为标样中蛇床子素的质量分数，%。

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

通过Waters二极管阵列检测器2996的数据采集功能，得到蛇床子素200～400 nm紫外波长扫描图（图4）。从图4中看出，蛇床子素的最大吸收波长为321 nm，其在257 nm处也有相对较好的吸收。当检测波长为321 nm时，基线噪音小，杂质峰干扰少，故将方法检测波长定为321 nm。

图4 蛇床子素紫外吸收光谱图

2.2 流动相的选择

依据蛇床子素的理化性质，选用乙腈溶解样品。流动相的选择则根据蛇床子素的特点，对不同体积比的乙腈＋水在色谱柱上进行选择比较。当乙腈＋水（体积比60∶40）为流动相，流速为1.0 mL/min时，有效成分与杂质能很好分离，峰形对称，基线平稳，且分析时间适中。

2.3 线性相关性试验

称取蛇床子素标样配制质量浓度分别为0.059 3, 0.095 7,0.120 5,0.143 8,0.180 0,0.236 3 g/L的标样溶液。在1.2色谱操作条件下进行分析，以蛇床子素质量浓度为横坐标，相应峰面积为纵坐标，绘制标准曲线（见图5）。方法线性方程为y=35134163x-41499，线性相关系数（R2）为0.999 8。

图5 蛇床子素线性关系图

2.4 精密度试验

从同一水乳剂中准确称取5份试样，在1.2反相高效液相色谱操作条件下进行测定。测得蛇床子素的标准偏差为0.002 3，变异系数为0.24%（表1）。

2.5 准确度试验

称取6份试样，分别准确加入不同体积的标样溶液，在1.2色谱操作条件下进行分析。测得蛇床子素的平均回收率为101.11%（表2）。

表1 蛇床子素精密度试验结果

表2 方法准确度试验结果

3 结论

通过对高效液相色谱分析条件进行选择与优化，建立了蛇床子素水乳剂的高效液相色谱分析方法。本方法的准确度和精密度较高，线性关系良好，是蛇床子素水乳剂的一种可行分析方法。

[1]孙小兵,叶吉琴.蛇床子素研究进展[J].大众科技,2009(2): 132-133.

[2]石志琦,陈浩.新型植物源创制农药蛇床子素 [J].世界农药, 2010,32(6):52-54.

[3]Shi Z Q,Shen S G,Zhou W,et al.Fusarium graminearum Growth Inhibition Due to Glucose Starvation Caused by Osthol[J].International Journal of Molecular Sciences,2008,9(3):371-382.

[4]石志琦.蛇床子素作为杀菌剂的活性研究[D].南京:南京农业大学,2008.

（责任编辑：顾林玲）

Analysis of Cnidiadin by HPLC

LI Ting,XU Yan-qiu,AN Wan-xia,WANG Guang-cheng,GAO Li-ming,CHEN Bing-kun,WU Chun-xian
(Sichuan Province Institute for the Control of Agricultural,Chengdu 610041,China)

A method for quantitative analysis of cnidiadin was described by HPLC,using acetonitrile and water as mobile phase,on ZORBAX SB-C18column and DAD,at 321 nm wavelength.The results showed that the linear correlation coefficient of the method was 0.999 8,the standard deviation was 0.002 3,the variation coefficient was 0.24%,the average recovery was 101.11%.

cnidiadin;HPLC;analysis

TQ 450.7

A

10.3969/j.issn.1671-5284.2017.02.011

2016-09-01

李婷（1985—），女，四川省遂宁市人，农艺师，主要从事农药管理和农药检测工作。E-mail：liting5114@163.com