姬松茸多糖增强免疫功能及抗疲劳作用的研究

李晶，魏健

（1.吉林体育学院，吉林长春130033；2.长春师范大学，吉林长春130032）

姬松茸多糖增强免疫功能及抗疲劳作用的研究

李晶1，魏健2，*

（1.吉林体育学院，吉林长春130033；2.长春师范大学，吉林长春130032）

探讨姬松茸多糖对小鼠免疫功能和抗疲劳作用的影响。成年小鼠40只随机分为对照组、姬松茸多糖低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组10只。分别以生理盐水、100、150、200mg/kg浓度姬松茸多糖灌胃给药，持续10 d，对小鼠进行抗疲劳试验和相关免疫指标的测定。姬松茸多糖显著提高小鼠脾脏和胸腺指数（中剂量时P＜0.05；高剂量时P＜0.01）；姬松茸多糖显著提高小鼠脾脏和胸腺指数，增加小鼠血清中IL-6和TNF-α的含量，提高CD4+、CD8+细胞计数；并能延长小鼠常压耐缺氧时间和负重游泳时间，提高小鼠血清中SOD活性，降低MDA含量。姬松茸多糖增强能够小鼠免疫功能和抗疲劳作用。

姬松茸多糖；免疫；抗疲劳

姬松茸（AgaricusblazeiMurrill）又称巴西蘑菇。原产于巴西和美国加利福尼亚州南部，肉质鲜美可口，富含多糖、核酸、甾醇类等生物活性成分，是一种药食兼用的名贵真菌[1]。研究证实姬松茸所富含的多糖具有抗肿瘤、抗病毒、增强机体免疫力等多种生物活性功能，也有研究报道姬松茸多糖具有抗疲劳的重要生物活性作用[2-6]。本文系统对姬松茸多糖的抗疲劳作用和免疫调节功能进行了研究，为进一步姬松茸多糖产品研究与开发提供实验参考。

1材料与方法

1.1材料和试剂

姬松茸：购于杭州众菇善年生物技术有限公司，按照文献[7]报道工艺提取和纯化多糖；胎牛血清：浙江天杭生物科技有限公司；噻唑蓝：美国Sigma公司；小鼠T淋巴细胞亚群抗体：美国BDBioscience公司；超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脱氢酶（MDA）试剂盒：购于南京建成生物工程研究所。

1.2动物分组与喂养方法

6周龄健康雄性昆明种小鼠，体重（20±2）g，由吉林大学动物中心提供。实验期间小鼠自由饮食、饮水，适应性喂养7 d，标准室温。实验小鼠随机分成4组，每组10只：姬松茸多糖低、中、高剂量组分别为100、150、200mg/（kg·d）；正常对照组（灌胃等量生理盐水）。

1.3 TNF-α、IL-6的测定

灌胃10 d，在末次给药前12 h动物禁食，小鼠摘眼球取血收集血液，血液静置后3 500 r/min离心，取血清置于4℃保存，酶联免疫法测定TNF-α、IL-6。

1.4胸腺和脾脏指数测定

取血后颈椎脱位法处死小鼠。无菌条件下分离小鼠胸腺和脾脏并称重。使用下面的公式计算胸腺和脾脏指数：胸腺（脾脏）指数=[胸腺（脾脏）重量（mg）/体重（g）]

1.5 CD4+和CD8+T细胞亚型测定

流式细胞仪分析脾脏中CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群百分比。调整脾细胞浓度至1×107个/mL，用PBS缓冲液洗涤，用小鼠T淋巴细胞亚群抗体（anti-mouse CD3+、anti-mouse CD4+、anti-mouse CD8+）4℃避光染色60 min。用PBS洗两次后，用流式细胞仪检测荧光强度。

1.6小鼠负重游泳实验

小鼠喂养方法同2.2，小鼠连续灌胃10 d，末次给药1 h后在小鼠尾部负重其体重5%的铅丝，让其在水温（28±1）℃恒温水槽中进行游泳，记录小鼠自游泳开始至力竭死亡的时间。

1.7耐缺氧试验

分组及给糖同负重游泳实验，于末次给药1 h后分别放于装有碱石灰30 g的500mL广口瓶内，凡士林封口，直至小鼠窒息而死，记录坚持时间。

1.8小鼠血清SOD、MDA含量的测定

小鼠连续灌胃10 d，末次给药30min后，让小鼠自由游泳5min取出，断头取血。血样于冰箱中静置后，3 500 r/min离心10min，取上清液，分别按照SOD测定试剂盒、MDA测定试剂盒说明书方法测定血清中SOD和MDA含量[2]。

1.9统计分析

实验数据采用Tukey-Kramer post-hoc检验单因素方差分析进行多重比较。组间显著差异采用t检验。所有数据均以平均数±标准差（Mean±SD）表示。采用SPSS 14 forWindows（SPSS Inc.，USA）统计软件进行分析。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2结果与分析

2.1姬松茸多糖调节免疫的实验结果

姬松茸多糖对小鼠免疫器官的影响见表1。

由表1可以看出，随着姬松茸多糖浓度的增加，姬松茸多糖对成年鼠脾脏及胸腺促增长作用也逐渐增加，各剂量组与对照组相比胸腺和脾脏指数均有一定程度升高。中剂量组和高剂量组与对照组相比显著影响小鼠脾脏指数（P＜0.05）；高剂量组与对照组相比显著影响小鼠胸腺指数（P＜0.05）。

表1 姬松茸多糖对小鼠免疫器官的影响Table1 Effectof Agaricusblazei polysaccharideson imm une organs inm ice

姬松茸多糖对小鼠血清中IL-6、TNF-α含量的影响见表2。

表2 姬松茸多糖对小鼠血清中IL-6、TNF-α含量的影响Table2 Effectof Agaricusblazei polysaccharideson IL-6 and TNF-αin serum inm ice

表2结果显示，与正常对照组相比，姬松茸多糖中剂量组和高剂量组可显著增加正常小鼠血清中IL-6的含量（P＜0.01）；显著增加正常小鼠血清中TNF-α的含量（P＜0.05）；姬松茸多糖低剂量组对正常小鼠血清中IL-6、TNF-α的含量无明显影响。

姬松茸多糖对小鼠淋巴细胞亚群CD4+、CD8+含量的影响见表3。

表3 姬松茸多糖对小鼠淋巴细胞亚群CD4+、CD8+含量的影响Table3 Effectof Agaricusblazei polysaccharideson CD4+，CD8+content inm ice

从表3可以看出，姬松茸多糖各剂量组与对照组相比小鼠外周血细胞计数均有一定程度升高。中剂量组和高剂量组显著提高了CD4+、CD8+细胞计数，中剂量组与对照组比较有显著性差异（P＜0.05）；高剂量组均与对照组比较具有极显著性差异（P＜0.01）。

2.2姬松茸多糖抗疲劳实验结果

姬松茸多糖对小鼠负重游泳时间和耐缺氧时间的影响见表4。

表4 姬松茸多糖对小鼠负重游泳时间和耐缺氧时间的影响Table4 Effectof Agaricusblazei polysaccharidesswimm ing time and hypoxia tolerance time inm ice

表4结果表明：姬松茸多糖能增加小鼠负重游泳时间，低剂量组与对照组有显著性差异（P＜0.05），中剂量组和高剂量组均与对照组有极显著性差异（P＜0.01）；姬松茸多糖能延长小鼠常压耐缺氧时间，低、中剂量组与对照组比较有显著性差异（P＜0.05）；高剂量组均与对照组比较具有极显著性差异（P＜0.01）。

姬松茸多糖对小鼠血清SOD、MDA的影响见表5。

表5 姬松茸多糖对小鼠血清SOD、MDA的影响Table5 Effectof Agaricusblazei polysaccharideson SOD，MDA in serum inm ice

从表5结果表明：小鼠血清中SOD活性低剂量组、中剂量组和高剂量组均高于对照组，其中中剂量组与对照组间有显著性差异（P＜0.05），高剂量组与对照组间有显著性差异（P＜0.01）；小鼠血清中MDA含量低剂量组、中剂量组和高剂量组均低于对照组，其中中、高剂高组与对照组间有显著性差异（P＜0.05）。

3讨论

脾脏和胸腺是机体的重要的中枢免疫器官和外周免疫器官，是机体清除病原和防止病原入侵的重要防御系统[4-5]。本实验研究结果表明姬松茸多糖对成年鼠脾脏及胸腺增长起到显著促进作用，各剂量组与对照组相比胸腺和脾脏指数均有一定程度升高。细胞因子是一类由活化的免疫细胞和相关细胞产生的高活性、具有多种生理功能的蛋白质多肽分子或糖蛋白，是免疫系统的重要组成部分。本实验研究中TNF-α和IL-6含量与对照组比较均显著提高，低剂量组则差异不显著，说明高、中剂量的姬松茸多糖能增加TNF-α和IL-6分泌量来调节机体免疫功能。淋巴细胞是细胞免疫的主要效应细胞和免疫调节细胞，是机体免疫应答功能的重要细胞成分，淋巴细胞的免疫调节作用主要是通过其亚群细胞实现的。CD4+和CD8+是适应性免疫中两种非常重要的T淋巴细胞[8-10]。本实验结果表明姬松茸多糖中、高剂量可显著性增加正常小鼠外周血中的CD4+和CD8+细胞数，显示姬松茸多糖可正向调节机体的免疫功能。以上结果表明，姬松茸多糖能显著提高小鼠的体液免疫、细胞免疫和非特异性免疫功能。

SOD、MDA是评价运动疲劳重要指标。SOD是体内最主要的自由基清除剂，此实验中姬松茸多糖组小鼠血清中SOD含量显著增加，具有显著抗疲劳活性。MDA为生物体内自由基作用于脂质发生过氧化反应终产物，间接地反映出细胞损伤的程度可以清除体内的自由基，从而降低疲劳的程度[11]。实验结果显示姬松茸多糖组中MDA含量均低于对照组，表明姬松茸多糖有助于降低自由基氧化过程，抵抗机体的疲劳。同时，姬松茸多糖能延长小鼠负重游泳时间和耐缺氧时间，由此表明，姬松茸多糖具有抗疲劳功效。

综上所述，姬松茸多糖不仅具有免疫调节能力，同时具有提高抗疲劳作用。姬松茸多糖可以作为新型抗疲劳制剂和免疫佐剂应用到实践中，但其深层次抗疲劳、免疫机制综合作用有待进一步探讨。

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Study on the Anti-fatigue and Im proving Imm une Function Effects of Agaricus blazei Polysaccharide

LIJing1，WEIJian2，*
（1.Jilin SportsUniversity，Changchun 130033，Jilin，China；2.Changchun NormalUniversity，Changchun 130032，Jilin，China）

To discuss the effect of the mice immune function and fatigue resistance about Agaricus blazei polysaccharide.We divided adultmice into 4 groups random ly.Therewere the controlgroup，low-dose group，middle-dose group and high-dose group.Each group of them had tenmice.Theywere injected gavage administration byweightmolal，such as100，150，200mg/kg.It continued 10 d，and thenmeasured the anti-fatigue experimentand related immune index of thesemice.According to thisexperiment，Agaricusblazei polysaccharide promoted the indexofspleen and thymus remarkably，increased the contentof IL-6 and TNF-αin themice serum，increased the cell countof CD4+and CD8+，extended the time of normal pressure hypoxia and weight loadingswimming，promoted theactivity of the SOD in themiceserum，and reduced the contend ofMDA.

Agaricusblazei polysaccharide；immunity；antifatigue

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.05.043

2016-09-20

李晶（1982—），女（满），讲师，在读博士，研究方向：食品营养与健康。

*通信作者：魏健（1980—），副教授，博士，研究方向：生命科学。