高效液相色谱法测定利肺片中五味子醇甲、五味子甲素及五味子乙素含量

杨立志，姜雪敏

（黑龙江省鸡西市食品药品检验检测中心，黑龙江鸡西 158100）

高效液相色谱法测定利肺片中五味子醇甲、五味子甲素及五味子乙素含量

杨立志，姜雪敏

（黑龙江省鸡西市食品药品检验检测中心，黑龙江鸡西 158100）

目的建立测定利肺片中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法采用Agilent Extend－C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 m)，以乙腈－水为流动相梯度洗脱，流速为1.0 mL／min，检测波长为220 nm。结果3种成分进样量线性范围分别为五味子醇甲0.025 8～0.515 0 g（r＝1.000 0），五味子甲素0.026 5～0.530 9 g（r＝1.000 0），五味子乙素0.026 0～0.521 0 g （r＝1.000 0）；平均回收率依次为97.35%，97.54%，97.58%，RSD分别为0.48%，0.55%，0.44%（n＝6）。结论该方法操作简便，重复性好，结果准确，可用于利肺片的质量控制。

高效液相色谱法；利肺片；五味子醇甲；五味子甲素；五味子乙素；含量测定

利肺片是由五味子、白及、枇杷叶、牡蛎、百部、甘草、百合、冬虫夏草、蛤蚧粉制成的中成药，具有驱痨补肺、镇咳祛痰的功效，可用于治疗肺结核咳嗽、咯痰咯血、气虚哮喘、慢性支气管炎[1]。目前，该药品的质量标准中未对方中任何药物进行定性或定量测定，不能有效控制产品的质量。为此，笔者参考文献[2－14]，建立了测定利肺片中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素含量的高效液相色谱（HPLC）法，并进行了方法学验证，为更好地控制该药品的质量提供了科学依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津LC－2010A型高效液相色谱仪（株式会社岛津制作所）；AG285型电子分析天平（瑞士梅特勒托利多公司）；KQ－400KDE型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药

五味子醇甲对照品（批号为110857－200608，纯度为100.00%），五味子甲素对照品（批号为110764－201010，纯度为99.60%），五味子乙素对照品（批号为110765－200508，纯度为100.00%），均购于中国食品药品检定研究院；利肺片（通化民泰药业股份有限公司，批号为140101，吉林百姓堂药业有限公司，批号为150602，150801）；水为超纯水，乙腈（Merck公司）为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent Extend－C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：流动相A为乙腈，流动相B为水，梯度洗脱（0～20 min，A为30%；20～70 min，A为30%～80%）；流速：1.0 mL／min；柱温：30℃；进样量：10 μL；检测波长：220 nm。理论板数按五味子乙素峰计算均应不低于3 000。

2.2 溶液制备

混合对照品溶液：称取五味子醇甲对照品10.30 mg，五味子甲素对照品10.66 mg，五味子乙素对照品10.42 mg，精密称定，加甲醇溶解并稀释，制成质量浓度分别为0.515，0.533，0.521 mg／mL的对照品贮备液。再分别量取对照品贮备液各1 mL，置20 mL容量瓶中，制成每1 mL含五味子醇甲25.75 μg、五味子甲素26.54 μg、含五味子乙素26.05 μg的混合对照品溶液。

供试品溶液：取本品适量，研细，称取2.0 g（平均片重为0.435 7 g），精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理40 min（功率400 W，频率40 Hz），放冷至室温，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，即得。

阴性对照品溶液：按照利肺片处方工艺制成不含五味子的空白样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干挠试验：精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，记录色谱图（见图1）。结果供试品溶液色谱中，在与对照品溶液相应位置上有相同保留时间的色谱峰，表明阴性对照无干扰。

线性关系考察：分别精密吸取五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素对照品混合溶液1，2，5，10，15，20 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，以对照品进样量（X，μg）为横坐标、峰面积积分值（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程，五味子醇甲为Y＝7.000 0×106X－9.856 5× 102，r＝1.000 0（n＝6）；五味子甲素，Y＝8.000 0× 106X＋1.909 9×103，r＝1.000 0（n＝6）；五味子乙素，Y＝8.000 0×106X＋1.323 1×103，r＝1.000 0（n＝6）。结果表明，五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素进样量分别在0.0258～0.5150μg，0.0265～0.5309μg，0.0260～0.521 0 μg范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验：精密吸取混合对照品溶液10 μL，连续进样6次，计算峰面积。结果，五味子醇甲峰面积平均值为1 877 849，RSD＝0.86%（n＝6）；五味子甲素峰面积平均值为2 049 349，RSD＝0.92%（n＝6）；五味子乙素峰面积平均值为2 031 295，RSD＝1.02%（n＝6）。表明仪器精密度良好。

图1 高效液相色谱图

稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液，在室温下放置0，2，4，8，12，24 h后，分别进样10 μL，记录峰面积。结果，五味子醇甲峰面积平均值为1 820 881，RSD＝0.82%（n＝6）；五味子甲素峰面积平均值为2 027 508，RSD＝0.79%（n＝6）；五味子乙素峰面积平均值为2 019 439，RSD＝0.90%（n＝6）。表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验：称取同一批样品（批号为140101）6份，依法制备供试品溶液，测定含量。结果五味子醇甲平均含量为0.070 mg／片，RSD＝0.75%，五味子甲素平均含量为0.072 mg／片，RSD＝0.91%，五味子乙素平均含量为0.071 mg／片，RSD＝1.01%。表明方法重复性良好。

加样回收试验：精密称取已知含量的同一批样品（批号为140101，五味子醇甲含量为0.070 mg／片，五味子甲素含量为0.072mg／片，五味子乙素含量为0.071mg／片）约1.0 g，以2份为1组，共3组，分别置25 mL容量瓶中，分别精密加入五味子醇甲对照品溶液（161.0μg／mL）、五味子甲素对照品溶液（165.0 μg／mL）和五味子乙素对照品溶液（163.0 μg／mL）0.8，1.0，1.2 mL，加甲醇稀释至刻度，称定质量，超声处理40 min，放冷至室温，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，作为供试品溶液。按2.1项下色谱条件进样测定，并计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n＝6）

2.4 样品含量测定

取市售利肺片3批，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件测定五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素含量。结果见表2。

表2 含量测定结果（mg／片，n＝9）

3 讨论

3.1 检测波长选择

经检测，五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素最大紫外吸收波长均在（220±2）nm，本研究中采用220 nm，则3种被测成分均有较大吸收。

3.2 流动相选择

应用2015年版《中国药典（一部）》中五味子含量测定项下的流动相，3种被测成分未能达到较好分离，以乙腈－水为流动相，梯度洗脱，则使分离度更好，故选用后者为流动相。

3.3 检测对象选择

方中五味子为主药，五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素是其主要成分，且含量高，易于测定，故采用测定处方中五味子的成分含量来控制该制剂的质量。

3.4 样品提取溶剂选择

分别考察了甲醇、70%甲醇、乙酸乙酯，结果表明，以甲醇为溶剂提取效果较好，故以甲醇为溶剂。

3.5 样品提取时间选择

用甲醇分别提取20，40，60 min，结果表明，20 min提取的含量低于提取40 min和60 min，且提取40 min 和60 min含量基本相同，故确定提取时间为40 min。

[1]WS3－B－2152－96.卫生部药品标准·中药成方制剂（第十一册）[S].

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015：66－67.

[3]单鑫，陆兔林，毛春芹，等.HPLC同时测定复方五味含片中葛根素、甘草苷、甘草酸铵、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素[J].南京中医药大学学报，2014，30（1）：82－84.

[4]李正国，于立佐，张爱岑.RP－HPLC测定降酶灵胶囊中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量[J].中成药，2004，26（8）：618－621.

[5]谭生建，屈雪莲，杨成勇，等.肝复康丸中五味子甲素和五味子乙素含量测定方法研究[J].解放军药学学报，2000，16（5）：270－272.

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[7]史敏，林超，秦华.HPLC测定养肝片中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素含量[J].食品与药品，2014，16（6）：433－435.

[8]张广春，陈明明.高效液相色谱法测定安神养心丸中五味子醇甲的含量[J].时珍国医国药，2011，22（7）：1783－1784.

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Content Determination of Schisandrin，Deoxyschizandrin and Schisandrin B in Lifei Tablets by HPLC

Yang Lizhi，Jiang Xuemin

（Jixi Inspection and Testing Center for Food and Drug，Jixi，Heilongjiang，China158100）

ObjectiveTo develop an HPLC method for the content determination of Schisandrin，Deoxyschizandrin and Schisandrin B in Lifei Tablets.MethodsThe separation was performed on an Agilent Extend－C18column(250 mm×4.6 mm，5 m).The mobile phase was Acetonifrile－Water，gradient elution，with the flowing rate of 1.0 mL／min.The detection wave length was 220 nm.ResultsThe linear ranges of Schisandrin，Deoxyschizandrin and Schisandrin B were 0.025 8－0.515 0 μg（r＝1.000 0），0.026 5－0.530 9 μg （r＝1.000 0）and 0.026 0－0.521 0 μg（r＝1.000 0），respectively.The average recoveries were 97.35%，97.54%and 97.58% respectively，RSD＝0.48%，0.55%，0.44%(n＝6），respectively.ConclusionThe method is simple，reproducidle and accurate，and can be used in the content determination of Schisandrin，Deoxyschizandrin and Schisandrin B in Lifei Tablets.

HPLC；Lifei Tablets；Schisandrin；Deoxyschizandrin；Schisandrin B；content determination

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2017)02－0038－03

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.02.011

2016－09－23；

2016－10－15)

杨立志（1977－），男，大学本科，副主任药师，主要从事食品药品检验检测工作，（电话）0467－6103377。