溶出度测定方法与布洛芬缓释胶囊体内血药浓度和退热效应的相关性研究

耿东升，马光霞，赵婷

（中国人民解放军新疆军区药品仪器检验所，新疆乌鲁木齐 830063）

·实验研究·

溶出度测定方法与布洛芬缓释胶囊体内血药浓度和退热效应的相关性研究

耿东升，马光霞，赵婷

（中国人民解放军新疆军区药品仪器检验所，新疆乌鲁木齐 830063）

目的建立测定布洛芬缓释胶囊药物溶出度的新方法，并评价其与体内血药浓度和退热效应的相关性。方法选择布洛芬缓释胶囊，采用药物溶出度测定的新方法，即溶出介质为pH＝7.6的磷酸盐缓冲液，溶出装置为桨法装置，转速为50 r／min；用光纤在线药物溶出度测定仪分别实时测定布洛芬缓释胶囊的药物溶出度，并与2010年版《中国药典》规定的方法比较；家兔单剂量口服布洛芬缓释胶囊，测定其不同时间的血药浓度；利用内毒素致家兔发热模型，检查布洛芬缓释胶囊的退热效应。结果新方法测定的体外药物溶出过程呈现失缓释作用；近最大药物累积溶出百分率的时间与体内达到血药峰浓度的时间相关性更好，血药峰浓度与家兔同时段最大退热效应一致。结论增大溶出介质pH，可改变布洛芬缓释胶囊的体外缓释行为，其体内外相关性可能较《中国药典》相关方法的结果好。

布洛芬缓释胶囊；药物溶出度；测定方法；血药浓度；退热效应；体内外相关性

当前，有些药物溶出度规定的测定方法存在人为干挠，如采用化学手段以满足制剂工艺的药物溶出过程特征，导致药物溶出度测定条件因药而异、多种多样且难以相互比较。如2010年版《中国药典（二部）》[1]（简称Ch.PⅡ）规定，布洛芬缓释胶囊药物溶出度测定方法：溶出介质为pH＝（6.0±0.05）的磷酸盐缓冲液，溶出装置为篮法装置，转速为30 r／min。其酸碱度既不符合胃内及小肠总体环境，篮法运动幅度很小且平稳，转速又较低，可使其药物溶出呈现良好的弧形曲线和“缓释效应”[2]。本课题中为适应肠道较高的pH环境，采用统一规定的药物溶出度测定方法[3]，溶出装置为桨法装置，转速为50 r／min，发现布洛芬缓释胶囊溶出加快，与Ch.PⅡ规定的“本品每粒在1小时、2小时、4小时与7小时时的释放量应分别为标示量的10%～35%，25%～55%，50%～80%，75%以上”的缓释要求不符，但与家兔单剂量口服给药后达到最高血药浓度及发挥最佳退热效应的时间一致。现报道如下。

1 仪器、试药与动物

1.1 主要仪器

FODT－601型光纤药物溶出度实时测定仪（富科思生物技术有限公司）；ZKT－18型真空脱气仪（天大天发科技有限公司）；CPA224S型万分之一电子天平，ME.225S型十万分之一电子天平（Sartorius公司）；Agilent 1100型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；UV－2450型紫外分光光度仪（日本岛津公司）；PHSSB型精密酸度计（上海虹益仪器仪表有限公司）；TCL－16C型低温离心机（湖南星科科学仪器有限公司）；AKHL－Ⅲ－16型艾柯超纯水仪（成都康宁实验专用纯水设备厂）；YKH－Z型涡旋混合器（江西医疗器械厂）；玻璃温度计（常州中轩商贸有限公司）。

1.2 试药

布洛芬对照品（批号为101381－201105，纯度为100.00%），购自中国食品药品检定研究院；布洛芬缓释胶囊（中美史克制药公司，批号为13020521，规格为每粒0.3 g）。试验用水为超纯水（电导率＜10 μS／cm）；氢氧化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾（均为分析纯，天津市致远化学试剂有限公司，批号分别为20131006，20121028，20121102，20130518）；甲醇、乙腈（均为色谱纯，每瓶4 L，赛歌飞世尔科技＜中国＞有限公司，批号分别为A452－4，A998－4）。

1.3 实验动物

健康家兔，体质量1.8～2.0 kg，雌雄各半，由新疆医科大学动物实验中心提供，动物许可证号为SCXK＜新＞2011－0004。在温度为（20±2）℃、相对湿度为（42±5）%的洁净级环境下，由家兔提供单位生产的专供兔饲料饲养。实验经使用单位伦理委员会讨论，符合动物实验伦理原则。

2 方法与结果

2.1 药物溶出度实时测定

2.1.1 溶液制备

溶出介质：按Ch.PⅡ项下规定，分别配制布洛芬药典法溶出介质（pH＝6.0的磷酸盐缓冲液）和新方法溶出介质（pH＝7.6的磷酸盐缓冲液）。

对照品溶液：分别取采用药典法和新方法测定的对照品布洛芬324.90 mg和323.80 mg，精密称定，置200 mL容量瓶中，分别用以上2种溶出介质溶解并定容，即得质量浓度分别为布洛芬1.624 5 mg／mL和1.619 0 mg／mL的布洛芬对照品贮备液。分别精密量取贮备液20 mL，置100 mL容量瓶中，用以上2种溶出介质分别定容，得布洛芬质量浓度为324.900 μg／mL和323.800 μg／mL的对照品溶液。

2.1.2 检测条件

分别取以上2种对照品溶液，预先在UV－2450型紫外－可见分光光度计上扫描，确定布洛芬的检测波长均为264 nm，参比波长均为550 nm，传感探头的光程均为5 mm。

2.1.3 方法学考察

线性关系考察：分别精密移取对照品贮备液5，8，11，14，17，20 mL，置100 mL容量瓶，分别用2种溶出介质稀释至刻度，摇匀。布洛芬质量浓度，药典法分别为81.225，129.960，178.695，227.430，276.165，324.900 μg／mL，新方法分别为80.950，129.520，178.090，226.660，275.230，323.800 μg／mL，分别加入1～6号10 mL烧杯中（供测定标准曲线用），固定，测定波长和参比波长，规定适宜的时间间隔，将光纤探头浸入线性关系考察用对照品溶液中，扫描系列标准溶液，得药物质量浓度（折算成相对药物溶出百分率）－吸光度吸收光谱，以药物溶出百分率（C）对吸光度（A）进行线性回归，结果药典法回归方程为C＝185.43A－0.23，r＝0.999 9（n＝6）；新方法回归方程为C＝170.92 A－0.23，r＝0.999 9（n＝6），表明2种方法的线性关系均良好。

精密度试验：分别取2种对照品溶液，连续进样测定6次，测定仪器精密度。结果的RSD分别为0.57% （n＝6）和0.63%（n＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取2种对照品溶液，分别于1，4，7，9，12 h时测定对照品溶液的质量浓度。结果的RSD分别为1.01%（n＝6）和1.20%（n＝6）。表明对照品溶液在12 h内稳定。

2.1.4 药物溶出度测定[4－7]

分别采用2种方法（见表1）实时在线测定布洛芬缓释胶囊受试制剂随时间变化的药物累积溶出百分率。结果显示，药典法与新方法的药物溶出过程不同，其药物溶出曲线前者呈“弧”型，后者呈“厂”型；新方法药物溶出速度明显加快，失去缓释作用。结果见表2和图1。

2.2 体内血药浓度测定[8－9]

2.2.1 服药家兔的血浆采集与制备

取健康家兔6只，放置在稳定的人工光照的动物房内喂养2周，自由进食和饮水。正式试验开始时禁食12 h，给予布洛芬缓释胶囊前先采集空白血浆（每只0.2mL）；之后口服受试药品1粒，并记录服药时间。于给药后在0.5，1，1.5，2，3，4，5，6，8，10，12，15，24 h时在家兔耳缘静脉处采血0.2 mL，置肝素化EDTA抗凝采血管中放置30 min后，以3 000 r／min的速率离心10 min后，用微量移液枪将血浆移入聚苯乙烯离心管中，于－20℃冰箱中保存。

2.2.2 色谱条件

色谱柱：AichromBond－AQ C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇－磷酸二氢钾（pH＝4）－乙腈（65∶30∶5）；流速：1.0 mL／min；柱温：室温；检测波长：225 nm；进样量：20 μL。

表1 药典法和新方法测定条件比较

表2 药典法和新方法不同时点的药物累积溶出百分率（%）

图1 不同测定方法下布洛芬缓释胶囊溶出曲线

2.2.3 血浆样品处理

将血浆样本以3 500 r／min的速率离心5 min，精密量取上层血浆200 μL，置1.5 mL离心管中，加入600 μL甲醇，涡旋混合1 min后，以12 000 r／min的速率低温高速离心10 min。用注射器吸取上清液，经0.22 μm针头式过滤器过滤后，注入进样瓶内插管中。

2.2.4 方法学考察

专属性考察：称取布洛芬对照品20 mg，精密称定，置25 mL容量瓶中，加入甲醇定容配制成质量浓度为0.8 mg／mL的标准贮备液。将布洛芬对照品贮备液用甲醇稀释制成质量浓度为80 μg／mL的标准液，进样分析，得布洛芬标准液色谱图。取健康人的空白血浆样本，混合均匀后取200 μL，依法处理，进样分析，得空白血浆色谱图。取混合均匀的空白血浆190 μL，加入布洛芬贮备液10 μL，涡旋混匀后依法处理，进样分析，得加样血浆色谱图。结果显示，布洛芬色谱峰形对称，分离效果好，分离度大于1.5，对称因子为0.95～1.05，柱效大于8 000，药物的测定不受血浆内源性物质干扰。

线性关系考察与检测限确定：精密吸取布洛芬贮备液1.25，2.5，12.5，25，50，100 μL，分别加入空白血浆至200 μL，配制成质量浓度分别为5，10，50，100，200，400 μg／mL的系列布洛芬血浆样品，依法处理后进样分析。以峰面积（Y）对血药浓度（C）进行线性回归，得回归方程Y＝2.619 1 C－1.718 4，r＝0.999 8(n＝6)。结果表明，布洛芬血药浓度在5～400 μg／mL范围内与峰面积线性关系良好。制备5个独立的定量下限浓度的血浆样本，进一步验证其浓度是否使信噪比（S／N）不低于3。结果显示，布洛芬血浆检测限为1 μg／mL。

精密度试验：分别制备布洛芬低、中、高（50、200和400μg／mL）质量浓度的质控样品，加入空白血浆至200μL，每个质量浓度平行做5份，每个样品分析测定1次，测定的峰面积用代入标准曲线得出样本浓度，计算3个质量浓度的批内相对标准偏差（RSD），考察日内精密度；同法，在4℃放置1，2，3，5，7 d测定，考察日间精密度。测定结果表明，测定血浆中布洛芬的分析方法符合要求（日内和日间RSD均小于15%）。结果见表3。

回收率试验：分别吸取布洛芬对照品贮备液12.5，50，100 μL，加入本底空白血浆至200 μL，其布洛芬质量浓度分别为50，200，400 μg／mL，每个质量浓度平行做5份，不加布洛芬的本底血浆平行做3份，依法操作，测定峰面积，代入标准曲线方程计算药物浓度，并推算布洛芬的回收率及其RSD。结果见表3。可见，布洛芬的提取回收率均大于90%，RSD均小于15%，且结果稳定。

表3 血浆中布洛芬HPLC测定法的精密度和回收率测定结果（n＝5）

稳定性试验：分别制备布洛芬低、中、高（50，200，400 μg／mL）质量浓度质控样品，每个浓度3份。在室温条件下放置0，4，12，24 h和在冰冻（－20℃）保存20 d，分析药物浓度改变及其RSD；冻融（3个循环）条件下，分析药物浓度改变、相对偏差（RE）及其RSD，每个样本重复测定3次。结果见表4和表5。可见，样品在上述条件下稳定，测定血浆中布洛芬浓度的分析方法符合要求（室温及－20℃冰箱20 d测定的平均值应在零时测定值的±5%范围内），可保证样品的分析测定。

表4 布洛芬常温稳定性和冻存稳定性试验结果（n＝5）

表5 布洛芬的冻融稳定性试验结果（n＝5）

2.2.5 血药浓度测定

采用外标法峰面积定量。代入血浆标准曲线方程，计算血药浓度。布洛芬缓释胶囊在家兔体内的时间－平均血药浓度结果见表6和图2。

表6 布洛芬缓释胶囊单剂量给药后的血药浓度测定结果（±s， g／mL，n＝6）

表6 布洛芬缓释胶囊单剂量给药后的血药浓度测定结果（±s， g／mL，n＝6）

时间（h）时间（h）0.5 1 1.5 68 234平均血药浓度8.61±2.53 40.51±16.39 164.25±52.7 346.14±76.8 229.49±37.2 147.77±52.9 10 12 15 24平均血药浓度85.16±62.93 21.66±4.29 11.31±3.50 7.81±2.96 2.08±1.22 1.47±0.68

图2 家兔口服布洛芬缓释胶囊后不同时间血药浓度

2.3 对家兔的退热作用[10－11]

取健康家兔12只，随机分为对照组和给药组，各6只。对照组致热后给予生理盐水，给药组致热后给予布洛芬缓释胶囊。正式试验开始前，用肛温计间断测量家兔肛温共3次，温度波动应在±0.5℃范围内，并取均值作为基础体温。根据家兔体质量5.0 mg／kg计算给药剂量，静脉注射大肠埃希菌类毒素生理盐水注射溶液，1 h后，选取体温升高0.6℃以上的家兔，将其放置在稳定的人工光照的动物房内喂养2周，自由进食和饮水。正式试验开始时，禁食12 h后，两组分别口服生理盐水和受试制剂1粒，记录服药时间和家兔给药后1，2，4，8，12，24 h体温变化，以用药后体温升高度数与基础体温的差值作为家兔发热模型评价指标，以此评价布洛芬缓释胶囊对家兔的退热或降温作用。结果两组家兔给予致热原后体温均明显升高；与本组致热后升温值比较，给予生理盐水后1～24 h各时间段升温值均无明显差异，给予受试药品后1～24 h，致热原引起的家兔体温升高均明显改善（P＜0.01或P＜0.05）；参考对照组升温趋势和比较升温的绝对数值，家兔致热后2～4 h为升温的最高时段，8 h体温开始下降（可能是自身病理生理调节机制所致）；与对照组比较，布洛芬缓释胶囊在给药后1 h即开始出现明显退热效应，2 h达到给药后4 h时段内的最大降温幅度，8 h体温开始回落，12 h体温近似于基础体温。结果见表7。

2.4 溶出度与血药浓度和药效学的相关性分析[12－16]

药典法测定的药物缓慢溶出量控制较好，药物溶出曲线呈缓升的“弧形”，但最大药物累积溶出率出现时间（5 h）明显慢于体内达到血药峰浓度的时间（2 h）和给药后4 h内出现的最大降温效应时间；采用新方法，药物溶出失去缓释作用，溶出曲线呈“厂”形，但溶出度与体内血药浓度和药物效应动力学的变化趋势一致，即随着体外偏碱性环境下药物溶出量的快速增加，体内血药浓度也迅速上升，至药物累积溶出百分率达到最大值，体内血药浓度也上升到最大值，此时，达峰时与给药后4 h内出现的最大降温效应时间一致。结果见表8。

3 讨论

3.1 测定方法变化会改变其溶出过程和行为

尤其是溶出介质酸碱度和转速的影响尤为突出。按照药典法，采用pH较小的磷酸盐缓冲液和转速较低及试验装置转动较缓和的转篮法测定药物溶出度，主药布洛芬缓慢溶出；按照新方法，采用pH较大的磷酸盐缓冲液和转速较高及试验装置转动幅度较大的桨法测定药物溶出度，则主药布洛芬快速溶出。说明布洛芬缓释胶囊的制备处方和工艺，是针对特定的酸碱和动力学环境值或范围设计的，只要满足其体外测定条件，就能呈现较好的药物缓释过程和曲线。笔者以为，制订药物溶出度的测定方法和测定方法的检验，应紧紧围绕机体的内环境和动力学过程来设计和验证。

表7 布洛芬缓释胶囊对内毒素所致家兔发热作用的影响（±s，℃，n＝6）

表7 布洛芬缓释胶囊对内毒素所致家兔发热作用的影响（±s，℃，n＝6）

注：与本组“致热后升温值”比较， P＜0.01， P＜0.05。

组别基础体温致热后升温值体温升高度数与基础体温的差值对照组给药组38.97±0.26 39.06±0.28 1.38±0.27 1.32±0.27 1 h 1.32±0.27 0.76±0.17 2 h 1.39±0.27 0.57±0.08 4 h 1.42±0.27 0.96±0.11 8 h 1.30±0.27 0.58±0.07 12 h 1.22±0.27 0.08±0.04 24 h 1.10±0.27 0.06±0.02

表8 2种方法布洛芬累积溶出百分率、血药浓度及降温效应比较

3.2 新方法测定结果相关性较好

体外采用新方法测定的布洛芬溶出行为，可能部分反映出布洛芬在小肠中的真实吸收状况。试验结果是支持依据，即新方法测定的布洛芬溶出度结果与其体内血药浓度变化一致，如达近最大药物累积溶出百分率的时间与体内血药浓度的达峰时一致，相关性较好，相对而言，药典法的2个时相差为6 h；机体的生理解释可能为小肠是药物溶出并被吸收的主要场所[17]。新方法采用的溶出介质pH＝7.6，代表了小肠的平均酸碱环境，更符合机体生理环境；而药典法采用pH＝6.0的溶出介质，可能只代表了十二指肠球部的酸碱环境，较局限。

布洛芬缓释胶囊的血药峰浓度与服药后开始出现的最大降温效应同步。尽管家兔服药后很快出现退热效果，且12 h后体温降至正常，但服药后4 h内的最大降温效应出现在服药后2 h，此时也是体外近最大布洛芬累积溶出量和体内服药后达到最高血药浓度的时间。对此，可部分说明新方法模拟的布洛芬溶出度过程，可能较好体现了布洛芬退热作用出现的时间特点。

综上所述，采用新方法测定布洛芬缓释胶囊的药物溶出度，改变了Ch.PⅡ要求的体外药物缓释行为，其与体内血药浓度和退热效应的相关性优于药典法。但需要进一步研究如何科学制订溶出度的检查方法，了解布洛芬缓释胶囊的体外缓释作用与退热效应的相关性。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：122，附录ⅩC.

[2]谢沐风.如何科学、客观地评价口服固体制剂内在品质——纵论我国固体制剂仿制药质量[J].药品评价，2010，7（14）：19－23.

[3]平其能.现代药剂学[M].北京：中国医药科技出版社，1998：474－483.

[4]耿东升，傅小英，陈明.光纤溶出度仪测定复方磺胺甲唑片溶出度的研究[J].中国药学杂志，2009，44（17）：1343－1346.

[5]耿东升，兰建国，李新霞，等.光纤溶出度实时测定布洛芬缓释胶囊的释放度[J].中国医院药学杂志，2009，29（18）：1545－1547.

[6]耿东升.光纤药物溶出度法测定盐酸环丙沙星片及胶囊的溶出度[J].中国药事，2010，24（8）：783－786.

[7]吴军，李新霞，陈坚.光纤药物在位溶出度释放度监测仪实时监测复方盐酸阿米洛利片体外溶出度[J].药物分析杂志，2007，27（2）：238－241.

[8]杜智敏，张波，黄丽军，等.布洛芬缓释胶囊相对生物利用度研究[J].中国药房，2002，13（11）：671－672.

[9]国家食品药品监督管理局.化学药物制剂人体生物利用度和生物等效性研究技术指导原则[Z].[H]GCL2－1.

[10]徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[M].第2版.北京：人民卫生出版社，1991：1052.

[11]Gouyon JB，Kibieur Y.Efficacy and toierabiiity of enterai formuiations of ibuprofeninthe treatment of patent ductus arteriosus in preterm infants[J].Clin Ther，2010，32（10）：1740－1748

[12]Shah VP.IV－IVC for topically applied preparations－a critical evaluate－ion[J].EurJPharmBiopharm，2005，60（2）：309－314.

[13]周静，蒋学华，张迅，等.乌拉地尔缓释胶囊相对生物利用度和体内外相关性研究[J].中国药学杂志，2005，40（2）：123－126.

[14]胡文军，万新祥.口服难溶性药物体内外相关性研究进展[J].第一军医大学分校学报，2002，25（2）：152－154.

[15]李凌冰，张娜，邓树海.应用体内外相关性模型研究红霉素缓释胶囊的体内外相关性[J].中国药学杂志，2004，2（39）：127－129.

[16]张娜，李凌冰，徐文方，等.氯氮平漂浮缓释胶囊体内外相关性评价[J].沈阳药科大学学报，2003，20（3）：170－172.

[17]周衍椒，张镜如.生理学[M].第3版.北京：人民卫生出版社，1990：231－289.

Correlation Research between the Drug Dissolution Test and Blood Drug Concentration in Vivo and Antipyretic Effect for Ibuprofen Sustained－Release Capsules

Geng Dongsheng，Ma Guangxia，Zhao Ting

（Institute for Drug and Instrument Control of Xinjiang Military Area Command，Wulumuqi，Xinjiang，China830063）

ObjectiveTo set up the new method for drug dissolution test of Ibuprofen sustained－release capsules（ISRC）and evaluate the correlation between the drug dissolution tested by new method and the drugblood concentration in vivo and the antipyretic effect.M ethodsISRC were selected for experimental drugs.The new method of ISRC dissolution test was established，which included dissolution medium pH＝7.6 buffer of phosphate，dissolution device one of paddle method，the speed of the paddle 50 r／min.To compared with the method of 2010 edition of China pharmacopoeia PartⅡ，the dissolution of ISRC tested by two method were monitored with fiber－optic in site dissolution testing equipment.The oral of single dosage of ISRC was used to rabbits，the drug blood concentrations ofdifferenttimeweremeasured.Themodelofrabbitfeverwasadoptedbyendotoxin，andtheantipyreticeffectofISRCwas checked.ResultsThe course of drug dissolution tested by the new method in vitro emerged unsustained－release effect.The time of the percent of close to the largest accumulation drug dissolution of the new method in vitro，and of the peak drug blood concentration in vivo was better correlation.The peak drug blood concentration and the largest antipyretic effect were consistent.ConclusionWhen pH value of dissolution medium is increased，the process of sustained－release of ISRC in vitro is changed and otherwise its in vitro－in vivo correlation would be better than the results of the method in the China Pharmacopoeia.

ibuprofen sustained－release capsules；drug dissolution；assay method；drug blood concentration；antipyretic effect；correlation between in vivo and in vitro

R971＋.1；R965.2

A

1006－4931(2017)02－0008－05

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.02.003

2016－10－23；

2016－11－16)

新疆维吾尔自治区自然科学基金[2013211A119]。

耿东升（1959－），河北邢台人，硕士研究生，主任药师，研究方向为抗炎免疫药理与药品质量监督，（电话）0991－4975278（电子信箱）dongsheng811＠sina.com。