液质联用法测定盐酸美西律片的含量

杨敏，崔艳，吴威

（1.黑龙江省齐齐哈尔市食品药品检验检测中心，黑龙江齐齐哈尔 161005；2.黑龙江省哈尔滨市第一医院，黑龙江哈尔滨 100730）

液质联用法测定盐酸美西律片的含量

杨敏1，崔艳2，吴威2

（1.黑龙江省齐齐哈尔市食品药品检验检测中心，黑龙江齐齐哈尔 161005；2.黑龙江省哈尔滨市第一医院，黑龙江哈尔滨 100730）

目的建立测定盐酸美西律片含量的高效液相色谱－质谱联用（HPLC－MS／MS）法。方法采用HPLC－MS／MS仪，色谱柱为Agilent Zorbax SB－C18柱（150 mm×2.1 mm，5 m），以0.1%甲酸乙腈－0.1%甲酸水（30∶70）为流动相，流速为0.2 mL／min，柱温为30℃；以阿替洛尔为内标物，采用电喷雾电离（ESI），正离子模式，多反应监测（MRM）扫描方式。结果盐酸美西律质量浓度在0.627～20.064 g／mL范围内与峰面积线性关系良好（r＝0.999 7），定量限为0.5 ng／mL，方法回收率为99.32%，RSD＝0.85%(n＝9)，稳定性良好。结论该方法分析快速，专属性强，灵敏度高，可用于盐酸美西律片的质量控制。

盐酸美西律片；含量；高效液相色谱－质谱联用法；质量控制

盐酸美西律（mexiletine hydrochloride）为钠通道阻滞剂，临床主要用于治疗慢性室性心律失常，属于Ib类抗心律失常药物[1－3]。该药品治疗窗较窄，有效剂量与最小中毒剂量很接近，因此有必要建立准确、灵敏、专属性强的质量标准对其制剂的质量进行有效控制。近些年，其含量测定的方法有很多报道，主要有HPLC法[4－7]、毛细管电泳法[8]、滴定法[7，9]、紫外分光光度法[10]等，尚未检索到用高效液相色谱－质谱联用（HPLC－MS／MS）法对该药品进行分析的报道。与以上这些方法相比，HPLC－MS／MS法的专属性更强，灵敏度更高，更适用于该药品定性鉴别和含量测定等，以实现质量控制，也可为该药品的痕量测定提供方法学依据。为此，本研究中采用HPLC－MS／MS法测定了盐酸美西律片的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1200型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；Agilent 6460型三重四极杆质谱仪配有电喷雾离子源，B.05.00 Masshunter色谱工作站（美国安捷伦公司）；BP 211D型电子天平（德国赛多利斯公司）。

1.2 试药

盐酸美西律对照品（中国食品药品检定研究院，批号为100218－201203）；阿替洛尔对照品（中国食品药品检定研究院，批号为100117－201105）；盐酸美西律片（上海信谊药厂有限公司，批号为151101，151102，151103，标示量均为0.1 g）；乙腈为色谱纯（DikmaPure公司，批号为50101）；甲酸为分析纯（天津光复科技发展有限公司，批号为20130705）；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱与质谱条件

色谱柱为十八烷基键合硅胶柱Agilent Zorbax SB－C18柱（150 mm×2.1 mm，5 μm）；流动相为0.1%甲酸乙腈－0.1%甲酸水（30∶70）；流速0.2 mL／min；柱温30℃，进样量20 μL。质谱采用电喷雾离子源（ESI）、正离子扫描、多反应监测方式（MRM）进行定量分析。干燥气和雾化器均为氮气，干燥气温度300℃，干燥气流量30 L／min，鞘气流量15 L／min，毛细管电压4 500 V，喷嘴电压2 000 V，扫描时间0.3 s，MRM扫描参数见表1。离子流色谱图峰面积以内标法定量。离子全扫描二级质谱图见图1。可见，内标阿替洛尔和盐酸美西律均破坏出了3个明显的二级碎片离子，且响应值较强、丰度比稳定，因此亦为该2种化合物的专属性鉴别提供了数据依据。

表1 MRM扫描参数表

图1 全扫描二级质谱图

2.2 溶液制备

内标贮备溶液：称取阿替洛尔对照品50.02 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为内标贮备溶液（500 μg／mL）。

对照品溶液：称取盐酸美西律对照品50.16 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液（500 μg／mL）。精密量取1 mL，置100 mL容量瓶中，精密加入内标贮备溶液1 mL，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

供试品溶液：取样品20片，研细，精密称取细粉适量（约相当于盐酸美西律50 mg），精密称定，置100 mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过。精密量取续滤液1 mL，置100 mL容量瓶中，精密加入内标贮备液1 mL，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

阴性对照品溶液：按质量标准中处方比例同法制备不含盐酸美西律的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

干扰试验：分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液，按拟订色谱及质谱条件进样测定，记录HPLC－MS／MS定量离子离子流色谱图。结果见图2。可见，组分出峰的区域无干扰峰，且阴性对照基底响应值极低，表明处方中其他成分及辅料对样品的测定无干扰。

图2 HPLC－MS／MS定量离子离子流色谱图

线性关系考察：分别精密量取对照品贮备溶液0.25，0.50，1.00，2.00，4.00，6.00，8.00 mL，置200 mL容量瓶中，分别精密加入内标贮备液2 mL，加流动相稀释至刻度，摇匀，配成盐酸美西律对照品系列溶液，按拟订色谱及质谱条件进样分析，记录定量离子总粒子流色谱图，以盐酸美西律峰与阿替洛尔峰面积比值（Y）为纵坐标，以盐酸美西律质量浓度（X，μg／mL）为横坐标进行线性回归，得回归方程Y＝0.283 1 X＋0.033 24，r＝0.999 7(n＝7)。结果表明，盐酸美西律质量浓度在0.627～20.064 μg／mL范围内与内标物峰面积比值线性关系良好。将对照品系列溶液继续稀释，进样分析，记录信噪比（S／N）为10时盐酸美西律的质量浓度(即定量限)为0.5 ng／mL。

精密度试验：取同一对照品溶液，连续进样6次，测定盐酸美西律与内标峰面积比值。结果的RSD为0.11%（n＝6），表明该方法精密度良好。

重复性试验：取盐酸美西律片（批号为151101）6片，依法测定其含量。结果平均含量为97.24%，其RSD为0.33%（n＝6），表明该方法重复性良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，室温放置，分别于0，2，4，6，8，24 h时进样分析，内标法计算含量。结果的RSD为0.20%（n＝6），表明供试品溶液在24 h内稳定。

加样回收试验：取已知含量的盐酸美西律片（批号为151101）20片，研细，分别精密称取细粉适量（约相当于盐酸美西律50 mg），置100 mL容量瓶中，分别精密加入对照品40，50，60 mg，各3份，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过。分别精密量取续滤液1 mL，置9个100 mL容量瓶中，再分别精密加入内标贮备液1 mL，加流动相稀释至刻度，摇匀。精密吸取20 μL，进样分析，计算盐酸美西律的加样回收率。结果见表2。

表2 盐酸美西律加样回收试验结果（n＝9）

2.4 样品含量测定

取3批盐酸美西律片，依法制备供试品溶液，进样分析，记录定量离子离子流色谱图，按内标法计算含量。结果批号为151101，151102，151103的样品盐酸美西律含量分别为标示量的97.24%，98.15%，97.64%。在液质联用的同时，本试验中还用液相色谱紫外检测器在216 nm波长处对该样品含量进行了检测，并用外标法计算了盐酸美西律片的含量，结果3批样品含量分别为标示量的97.30%，97.95%，97.69%。可见，2种方法检测结果无显著性差异。

3 讨论

色谱及质谱条件选择：本试验中分别考察了0.02mol／L乙酸铵－乙腈、0.1%乙酸－乙腈、0.1%甲酸－甲醇等流动相，结果流动相为0.1%甲酸乙腈－0.1%甲酸水（30∶70）时塔板数最高、质谱响应值最高，理论塔板数均可达4 000以上。因此，本研究中采用该流动相系统作为检测条件。在对二级质谱进行优化时，盐酸美西律和阿替洛尔均得到了稳定的碎片离子，因此本文献也为这两种药品的定性鉴别提供了参考数据。

各国药典比较：中国药典[7]、美国药典、英国药典、欧洲药典收载的盐酸美西律含量测定方法为HPLC法和电位滴定法，其中，HPLC条件大体一致，均为甲醇－0.1 mol／L醋酸钠溶液，液质联用法由于只可用挥发性成分作流动相，故不适用于该系统。与各国药典的方法相比，本研究中建立的方法适用于液质联用法分析盐酸美西律的含量，且引入了适当的内标物，定量限也更低，能更准确、灵敏、专属地检测盐酸美西律的含量，与上述药典中的方法比较更先进。

检索到很多盐酸美西律含量测定的HPLC法[4－8]，但其色谱系统均不适用于质谱检测器的测定。本研究中与上述文献报道中的色谱系统均不相同，为盐酸美西律的分析开发了新的条件，且该系统适用于质谱检测，能为HPLC－MS／MS法对该药品的体内分析、复方制剂含量测定等提供参考。

[1]郑斌，周旭华.胺碘酮联合盐酸美西律治疗ICU高危快速型心律失常的效果分析[J].中国当代医药，2014，21（18）：63－65.

[2]曾强，张娅，李艳华.盐酸美西律片、酒石酸美托洛尔片联合应用治疗左心室假腱索所致的室性早搏[J].实用心电学杂志，2015，24（3）：204－205.

[3]Shibuya K，Misawa S，Kimura H，et al.A single blind randomized controlled clinical trial of mexiletine in amyotrophic lateral sclerosis：Efficacy and safety of sodium channel blocker phaseⅡtrial[J].Amyotroph Lateral Scler Frontotemporal Degener，2015，16（5－6）：353－358.

[4]韩学静，张轶华，庞文哲.HPLC测定盐酸美西律片的含量[J].华西药学杂志，2011，26（1）：77－78.

[5]刘红莉，韩学静，闫凯.反相高效液相色谱法测定盐酸美西律片的含量[J].中国药业，2012，21（3）：20－21.

[6]蔡涛，霍玉.高效液相色谱法测定盐酸美西律片的含量[J].中国药品标准，2010，11（2）：129－131.

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[9]韩学静，孙婷，姜建国.电位滴定法测定盐酸美西律的含量[J].中国药师2009，12（10）：1500－1501.

[10]韩学静，王晓琦，孙婷.紫外分光光度法测定盐酸美西律片的含量[J].中国药品标准，2010，11（3）：224－227.

Content Determination of Mexiletine Hydrochloride Tablets by HPLC－MS／MS

Yang Min1，Cui Yan2，Wu Wei2

(1.Qiqihaer Institute for Food and Drug Control，Qiqihaer，Heilongjiang，China161005；2.Harbin First Hospital，Harbin，Heilongjiang，China100730）

ObjectiveTo establish an HPLC－MS／MS method for the determination of mexiletine hydrochloride tablets.Methods The LC－MS／MS was used.The samples were carried out on an Agilent Zorbax SB－C18column（150 mm×2.1 mm，5 μm）.The mobile phase was composed of 0.1%formic acid acetonitrile－0.1%formic acid water（30∶70）at a flow rate of 0.2 mL／min.The column temperature was 30℃.Atenolol was used as the internal standard.The detection was performed with MRM using electrospray ionization （ESI）.ResultsA good linearity of mexiletine hydrochloride was obtained in the range of 0.627－20.064 μg／mL（r＝0.999 7）and the limit of quantitation of mexiletine hydrochloride was 0.5 ng／mL.The recovery rate was 99.32%（RSD＝0.85%，n＝9）and the stabilities were good.ConclusionThis method is fast，sufficiently selective and sensitive which provides an analytical basis for the quality control of mexiletine hydrochloride tablets.

mexiletine hydrochloride tablets；content；HPLC－MS／MS；quality control

R972＋.2；R927.2

A

1006－4931(2017)02－0035－03

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.02.010

2016－10－07)

杨敏（1979－），女，大学本科，主管药师，主要从事药物分析工作，（电子信箱）wangchaozhongkcn＠163.com。