尿膀胱肿瘤抗原在膀胱癌中的表达及意义

丁丽丽，黄玲莎，叶俭，张云，刘志明，黄昭东，梁艺华

（广西医科大学附属肿瘤医院，广西 南宁 530021）

尿膀胱肿瘤抗原在膀胱癌中的表达及意义

丁丽丽，黄玲莎，叶俭，张云，刘志明，黄昭东，梁艺华

（广西医科大学附属肿瘤医院，广西 南宁 530021）

目的探讨膀胱肿瘤抗原（BTA）的临床应用价值。方法 收集46例膀胱癌、35例泌尿系良性疾病、10例健康者尿液，同时做尿脱落细胞学及BTA检测。结果 ①BTA检测的敏感性为86.9%，特异性为82.2%，假阳性率为17.8%（95%CI：0.759，0.924）；尿脱落细胞学检测的敏感性为34.7%，特异性为97.8%，假阳性率为2.2%（95%CI：0.550，0.775）；②BTA表达水平和敏感性与肿瘤分级分期、有无肉眼血尿有关（P＜0.05），与复发或初发无关（P＞0.05）；BTA对各级、各期的膀胱癌的敏感性均高于尿脱落细胞学检测（P＜0.05）；③BTA在早期膀胱癌（Ta～T1期）中表达水平高于良性疾病组、健康组（P＜0.05）。结论 BTA对膀胱癌的诊断、早期筛查及跟踪随访有较高的临床应用价值，但应注意血尿影响BTA检测结果。

酶联免疫吸附法；膀胱肿瘤抗原；膀胱癌；尿脱落细胞学

膀胱癌是泌尿系统中最常见的恶性肿瘤，约70%膀胱癌最初表现为浅表性病变，复发率高达65%～85%[1]。膀胱癌生物学行为复杂多变，表现为易复发、多发、浸润和转移，因此需要早期诊断和长期随访[2]。目前，膀胱癌的诊断主要依靠尿脱落细胞学和膀胱镜检查。尿脱落细胞学检查敏感性低，而膀胱镜检查增加患者的痛苦和经济压力，目前尚缺乏理想的标记物协助诊断和治疗后的追踪[3-6]。膀胱肿瘤抗原（bladder tumour antigen，BTA）是由膀胱癌细胞表达，并可释放入尿液中[7-8]，本研究通过酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测尿BTA在膀胱癌中的表达，并与尿脱落细胞学作比较，探讨尿BTA在膀胱癌诊断和随访中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取2015年5月-2016年1月广西医科大学附属肿瘤医院膀胱癌住院患者46例，均经膀胱镜活检或术后病理检查确诊为膀胱癌，作为膀胱癌组。其中，膀胱移行细胞癌43例，膀胱鳞癌1例，膀胱腺癌2例；另收集同期门诊有泌尿系统良性疾病患者35例作为良性疾病组。其中，泌尿系炎症16例，结石10例，前列腺肥大1例，不明原因血尿5例，腺性膀胱炎3例；同时收集体检中心健康者10例作为健康组。所收集的良性疾病患者和健康者在年龄、性别方面与膀胱癌组比较，差异无统计学意义。

1.2 方法

留各实验对象有创操作前的晨尿60 ml，取各样本尿沉渣作尿脱落细胞学检查，诊断结果为可见癌细胞或可疑癌细胞定为阳性处理；同时留各实验对象尿液标本10 ml，按以下步骤进行实验操作：①加样温育：在样品孔中加入45 μl BTA样品稀释液，加入5 μl的尿标本，再加入BTA酶工作液50μl，震荡混匀，加盖封板膜，37℃温育30 min。②洗板：每孔加入350 μl洗液，静置5～10 s后弃尽，重复冲洗5次后，拍干。③显色：每孔加入50μl底物液A和50 μl底物液B，充分混匀，37℃温育15 min。④终止：每孔加入50 μl终止液，充分混匀。⑤测定：终止反应后，立即置酶标仪450 nm波长下测定光密度值。⑥计算：使用双对数线性拟合方式log（X）-log（Y）计算结果。BTA检测试剂盒由北京普恩光德生物科技公司提供。实验方法为ELISA法。

1.3 统计学方法

数据分析采用SPSS 17.0统计软件，计量资料以中位数和四分位数间距表示，用秩和检验，相关分析采用Spearman秩相关，Cut-off值的确定根据受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve，ROC），P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 尿BTA与尿脱落细胞学诊断效能评价

评估BTA作为膀胱癌的诊断性能，基于ROC曲线结果，BTA最佳转折点为93 ng/ml，BTA的敏感性和阴性预测值为86.9%和86.0%[95%可信区间（confidence interval，CI）：0.759，0.924]；尿细胞学敏感性和阴性预测值为34.7%和59.4%（95%CI：0.550，0.775）；BTA的ROC曲线下面积为0.863，尿脱落细胞学的曲线下面积为0.670，因此BTA的诊断效果高于尿脱落细胞学检查；BTA的假阳性率为17.8%，高于尿脱落细胞学（2.2%），BTA特异性和阳性预测值为82.2%和83.3%。见附图。

附图 尿BTA、尿脱落细胞学检查的ROC曲线图

2.2 尿BTA的表达与尿脱落细胞学检查结果比较

以最适有效浓度93 ng/ml为基准，所测BTA浓度≥93 ng/ml定为阳性，BTA浓度＜93 ng/ml为阴性，BTA浓度与膀胱癌分级、分期呈正相关（rs=0.420和0.660，P=0.000），即膀胱癌分级分期越高，尿BTA值越高；尿BTA敏感性与膀胱癌分级、分期呈正相关（rs=0.306和0.311，P=0.038）；BTA浓度与膀胱癌复发、初发无关（rs=0.228，P=0.127），与血尿程度呈正相关（rs=0.577，P=0.000），即血尿浓度越高，尿BTA浓度越高。尿脱落细胞学检查的敏感性与膀胱癌分级、复发或初发、有无肉眼血尿比较，差异无统计学意义（P＞0.05），但与膀胱癌分期呈正相关（rs=0.309，P= 0.037）。对不同类型膀胱癌，BTA的敏感性高于尿脱落细胞学检查（P＜0.05）。见表1。

2.3 Ta～T1期膀胱癌与良性疾病组、健康组BTA表达水平比较

将非侵润性尿路上皮癌（Ta～T1期膀胱癌）BTA表达水平与良性疾病组、健康组比较，Ta～T1期膀胱癌BTA表达中位数88.46 ng/ml，良性疾病组BTA中位数28.75 ng/ml，健康组BTA 1.28 ng/ml，经非参数Kruskal-WallisH检验，差异有统计学意义（P=0.000）。其中Ta～T1期膀胱癌BTA表达水平与良性疾病组比较，经Mann-WhitneyU检验，差异有统计学意义（Z=-2.747，P=0.006）；Ta～T1期膀胱癌BTA表达水平与健康组比较，经Mann-WhitneyU检验，差异有统计学意义（Z=-4.411，P=0.000），因此Ta～T1期膀胱癌BTA表达水平高于良性疾病组和健康组。见表2。

表1 尿BTA的表达与尿脱落细胞学结果比较

表2 Ta～T1期膀胱癌与良性疾病组、健康对照组BTA表达水平比较

3 讨论

膀胱肿瘤抗原BTA是膀胱癌细胞生成的H相关蛋白，其与补体C3b结合，从而抑制攻膜复合物的形成，使肿瘤免受免疫攻击，促进肿瘤生长[9-10]，正常膀胱上皮细胞不表达BTA。膀胱癌细胞可直接释放膀胱肿瘤抗原进入尿液[11-12]。本实验运用ELISA法检测尿液中BTA含量，研究其对膀胱癌的诊断价值。

本研究结果显示，当以93ng/ml为最适临界值时，BTA的ROC曲线下面积高于尿脱落细胞学检查，且BTA敏感性与特异性均较高（86.9%和82.2%），提示BTA与尿脱落细胞学相比对膀胱癌具有较好地诊断价值。本研究结果提示，BTA对各级别、期别膀胱癌的敏感性高于尿脱落细胞学检查，客观上弥补尿脱落细胞学检查敏感性低的缺点。BTA浓度及敏感性与膀胱癌分级、分期呈正相关，即恶性程度高的浸润性癌BTA表达水平高于低度恶性浅表性癌，这可能与该型肿瘤在增殖、凋亡方面更为活跃，肿瘤BTA表达增加有关。本研究显示，BTA对浸润性膀胱癌的敏感性达100%，虽然这可能与本研究中样本量较小有关，但仍提示随着膀胱癌恶性程度的增高，BTA表达水平亦相应增加。

本实验结果表明，BTA在复发膀胱癌中的浓度和敏感性与初发膀胱癌比较，差异无统计学意义，这对膀胱癌患者术后的跟踪随访具有重要意义，对检测术后复发有较理想的应用前景。

BTA的假阳性率为17.8%，较高的假阳性率客观上限制BTA的广泛临床运用[13]。本研究结果显示，血尿对BTA的检测有一定干扰，而80%的血尿是由泌尿系良性疾病引起。各文献报道的BTA最适临界值和其对膀胱癌检测的浓度、敏感性各不相同，且相差较大[14]。李扬等[15]发现，尿BTA（11.2 u/L为最适临界值）诊断膀胱癌的敏感性分别为73.5%，而马重等[16]报道BTA敏感性仅为50%，各实验结果差异较大，是BTA未能在临床上广泛应用的主要原因。产生该差异的原因，目前说法不一，可能是由于各研究所收集的样本数量、肿瘤类型，以及尿液性状等不同因素所致；本研究提示，差异的原因可能是各研究样本所含血尿程度不同引起。血尿对BTA检测的影响可能是造成假阳性的原因，因此运用BTA检测筛查膀胱癌应考虑血尿的影响。

本研究结果显示，BTA对Ta～T1期膀胱癌敏感性达78%，且表达水平高于良性疾病组和健康组，这为BTA用于早期膀胱癌的筛查提供了依据。

本研究结果显示：①尿BTA对膀胱癌诊断的敏感性和阴性预测值均高于尿脱落细胞学检查，且本身特异性亦不低；②尿BTA表达水平和敏感性随着膀胱癌分级、分期的增高而相应升高；③尿BTA对复发膀胱癌仍有较高的价值；④血尿影响BTA的检测值；⑤尿BTA对早期膀胱癌有较高的敏感性。综上所述，BTA对膀胱癌的诊断、早期筛查及跟踪随访有较高的临床应用价值，但应注意血尿对检测的影响。

参 考 文 献：

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（童颖丹 编辑）

Expression of urinary bladder tumor antigen in bladder cancer and significance

Li-li Ding,Lin-sha Huang,Jian Ye,Yun Zhang,Zhi-ming Liu, Shao-dong Huang,Yi-hua Liang
(Tumor Hospital Affiliated to Guangxi Medical University,Nanning,Guangxi 530021,China)

ObjectiveTo assess the diagnostic value of bladder tumor antigen (BTA)in the detection of bladder cancer.Methods Subjects,including 46 patients with bladder cancer,35 patients with urological benign diseases,and 10 normal individuals were enrolled in this study.All subjects received urine BTA assay and urinary cytology before cystoscopy.Cystoscopic result was the standard of detection.Results The sensitivity, specificity and false positive rate of the BTA test were 86.9%,82.2%and 17.8% (95%CI:0.759,0.924) respectively;the sensitivity,specificity and false positive rate of cytological test were 34.7%,97.8%and 2.2% (95%CI:0.550,0.775)respectively.The expression level of BTA and sensitivity were correlated to tumor stage,grade and hematuria degree (P＜0.05),but not correlated to relapse or initial cancer(P＞0.05).The sensitivity of BTA in diagnosis of bladder cancer at all grades and stages was higher than that of urinary cytology(P＜0.05).The level of BTA in the non-invasive bladder cancer group was significantly higher than that in the healthy group and the benign disease group(P＜0.05).Conclusions Urinary BTA expression has a high clinical value in the diagnosis,early screening and follow-up of bladder cancer,but attention should be paid to the effect of hematuria on BTA test results.

enzyme-linked immunosorbent assay;bladder cancer;bladder tumor antigen;urinary cytology

R737.14

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.06.022

1005-8982（2017）06-0106-04

2016-11-02

黄玲莎，Tel：13878133395