果蝇EZH2与乳腺癌分子分型及临床病理特征的关系*

李杰宝，喻晓程，田野

（湖北省武汉市第一医院，湖北 武汉 430000）

果蝇EZH2与乳腺癌分子分型及临床病理特征的关系*

李杰宝，喻晓程，田野

（湖北省武汉市第一医院，湖北 武汉 430000）

目的探讨果蝇Zeste基因增强子人类同源物2（EZH2）与乳腺癌分子分型及临床病理参数的关系。方法 根据新型乳腺癌分子分型标准，将乳腺癌进行分子分型；免疫组织化学方法检测乳腺癌组织石蜡切片中EZH2的表达；采用χ2检验分析EZH2表达与乳腺癌新型分子分型，以及临床病理参数之间的关系；采用Kaplan-Meier法分析EZH2表达与乳腺癌患者无病生存率（DFS）的关系。结果 13例管腔上皮A型乳腺癌患者中，3例为EZH2高表达（23.08%）；10例管腔上皮B型乳腺癌患者中，5例为EZH2高表达（50.00%）；7例人表皮生长因子受体2过表达型乳腺癌患者中，3例为EZH2高表达（42.86%）；12例三阴性型乳腺癌患者中，10例为EZH2高表达（83.33%）。乳腺癌各分子亚型间EZH2表达的比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。EZH2高表达与EZH2低表达患者DFS比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 EZH2可能是预测乳腺癌预后的指标之一。

果蝇Zeste基因增强子人类同源物2；乳腺癌；分子分型；免疫组织化学

乳腺癌是女性高发的恶性肿瘤之一，其具有高度异质性且近年来的发病率呈现逐年递增的趋势，但其发病机制尚未完全阐明[1]。新型乳腺癌分子分型根据乳腺癌患者肿瘤组织中的雌激素受体（estrogen receptor，ER）、孕激素受体（progesterone receptor，PR）、人表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor-2，HER-2）和Ki67的表达差异，将乳腺癌分为管腔上皮A型、管腔上皮B型、Her-2过表达型和三阴性型[2-3]。果蝇Zeste基因增强子人类同源物 2（enhancer of zeste homolog 2，EZH2）是果蝇Enhancer of zeste基因的人类同源基因，作为多梳基因（polycoml group genes，PcG）家族的重要成员之一，其参与细胞分化，并与多种肿瘤的发生、发展密切相关[4-5]。本研究根据新型乳腺癌分子分型将42例患者分为管腔上皮A型、管腔上皮B型、Her-2过表达型和三阴性型，采用免疫组织化学方法检测各分型乳腺癌组织石蜡切片中EZH2的表达，以探讨EZH2与乳腺癌分子分型及临床病理参数的关系。

1 资料与方法

1.1 乳腺癌石蜡标本收集

选取2004年5月-2008年10月在华中科技大学附属医院确诊为乳腺癌并行手术治疗的女性乳腺癌患者42例，其临床、病理和随访资料完整，切除的乳腺癌石蜡标本保存完好。实验所需兔抗人EZH2多克隆抗体购自美国GeneTex公司，鼠抗人Ki67单克隆抗体（即用型）、抗体稀释液和生物素标记二抗购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.2 免疫组织化学法

将每例患者手术切除的乳腺癌组织石蜡样本分别连续切片5张，其中1张进行常规苏木精-伊红染色法染色，观察乳腺癌的形态学；2张用于免疫组织化学法染色，观察EZH2在乳腺癌组织、细胞中的表达情况；另2张备用。

1.3 免疫组织化学法染色结果判断

EZH2的免疫组织化学法结果主要为核染色，分别由2名不知道切片病理诊断结果的观察者判断切片的EZH2染色情况，无细胞核染色计1分，细胞核染色＜25%计2分，细胞核染色在25%～75%计3分，细胞核染色＞75%计4分[6]。3～4分为EZH2高表达，1～2分为EZH2低表达。

Ki67的免疫组织化学法结果为细胞核呈棕褐色着色。分别由2位不知道切片病理诊断结果的观察者判断切片的Ki67染色情况。随机选取高倍镜下10个视野，计数每个视野中100个细胞中阳性表达的百分比，最后取10个高倍镜视野百分数的平均值。

新型乳腺癌分子分型：ER+和/或PR+，Her-2-，Ki67＜14%为管腔上皮A型；ER+和/或PR+，Her-2+ 或ER+和/或PR+，Her-2-，Ki67≥14%为管腔上皮B型；ER-，PR-，Her-2+为Her-2过表达型；ER-，PR-，Her-2-为三阴性型。

1.4 统计学方法

数据分析采用SPSS 17.0统计软件，计数资料以率（%）表示，用χ2检验；两组生存率的比较采用Log-rank χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 免疫组织化学染色法结果

42例乳腺癌患者中，13例为管腔上皮A型（30.95%）；10例为管腔上皮B型（23.81%）；7例为Her-2过表达型（16.67%）；12例为三阴性型（28.57%）。在42例乳腺癌患者中，21例为EZH2高表达（50.00%）。

2.2 EZH2表达与乳腺癌分子分型的关系

13例管腔上皮 A型乳腺癌患者中，3例为EZH2高表达（23.08%）；10例管腔上皮B型乳腺癌患者中，5例为EZH2高表达（50.00%）；7例Her-2过表达型乳腺癌患者中，3例为EZH2高表达（42.86%）；12例三阴性型乳腺癌患者中，10例为EZH2高表达（83.33%）。乳腺癌各分子亚型间EZH2的表达比较，差异有统计学意义（χ2=9.240，P=0.020）。

2.3 EZH2表达与乳腺癌临床病理特征的关系

EZH2表达在患者年龄及患者绝经状态之间比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；EZH2表达的高低在肿瘤大小、淋巴结是否转移及术后分期之间比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。与EZH2低表达的乳腺癌患者比较，EZH2高表达的乳腺癌患者肿瘤生长速度较快、发生淋巴结转移的概率较大、术后分期较晚。见附表。

2.4 EZH2表达与乳腺癌预后的关系

42例乳腺癌患者随访＞5年，21例EZH2高表达的乳腺癌患者中，有6例死亡，2例发生复发和转移；21例EZH2低表达的乳腺癌患者中，有2例死亡，1例发生复发和转移。采用Kaplan-Meier法对42例乳腺癌患者进行生存分析，对EZH2高表达和EZH2低表达患者的无病生存率（disease free survival，DFS）进行Log-rank检验，差异有统计学意义（χ2=7.041，P=0.008）。见附图。

附表 乳腺癌患者临床病理特征与EZH2高表达的关系例（%）

附图 不同EZH2表达水平乳腺癌患者的DFS生存曲线

3 讨论

乳腺癌是一种严重威胁女性健康的恶性肿瘤，具有高度异质性以及较高的发生率，且其发病机制尚未完全阐明，已成为近年来的研究热点[7]。GOLDHIRSCH等[3]确立新型的乳腺癌分子分型，根据乳腺癌患者肿瘤组织中的ER、PR、HER-2和Ki67的表达差异，将乳腺癌分为管腔上皮A型、管腔上皮B型、Her-2过表达型和三阴性型。刘佳等[8]通过检测80例乳腺癌组织中ER、PR、HER-2、CK5/6、CK14、EGFR以及EZH2蛋白的表达，将乳腺癌分为腔型、HER-2（+）型、基底细胞样型和正常乳腺样型，其所占比例分别为61.25%、10.00%、25.00% 和3.75%，其中管腔上皮型在各分子亚型中的比例最高。WIECHMANN等[9]的研究中，管腔上皮型在乳腺癌各分子亚型中所占的比例最高且预后相对较好。本研究根据ST.Gallen的新型乳腺癌分子分型标准，将42例乳腺癌患者分为管腔上皮A型（30.95%）、管腔上皮B型（23.81%）、Her-2过表达型（16.67%）和三阴性型（28.57%）。其中由A型和B型组成的管腔上皮型所占比例最高，为53.76%，该结果与其他研究一致。

EZH2是果蝇Enhancer of zeste基因的人类同源基因，作为PcG基因家族的重要成员之一，其参与细胞分化，并与多种肿瘤的发生、发展密切相关[4]。EZH2是一种转录阻遏因子，其高表达可抑制肿瘤细胞的凋亡，与肿瘤的发生与转移密切相关[10]。RAAPHORST等[11]研究EZH2基因在正常乳腺组织、癌前病变乳腺组织及浸润性乳腺癌组织中的表达差异，结果显示EZH2在正常乳腺组织中无表达，而在乳腺癌组织中的表达明显高于癌前病变乳腺组织。姚凡等[12]通过对105例乳腺癌患者肿瘤组织的检测发现，其中69.50%乳腺癌组织中出现EZH2阳性表达，且EZH2表达与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、术后分期、PR表达及c-erbB-2表达等无相关性。徐静等[13]对82例乳腺癌患者的研究表明，出现EZH2阳性表达的乳腺癌患者高达51.20%，EZH2阳性表达患者的组织分化较差、肿瘤直径较大且更容易发生淋巴结转移。本研究旨在探讨EZH2表达高低与乳腺癌分子分型及临床病理特征的关系，结果表明在12例三阴性型患者中，EZH2高表达者 10例（83.33%），肿瘤大小、淋巴结是否转移及不同术后分期EZH2高表达例数比较，差异有统计学意义，提示EZH2表达可能与乳腺癌的病情程度相关，病情越严重，EZH2高表达的可能性越大。且EZH2高表达的乳腺癌患者肿瘤生长速度较快、发生淋巴结转移的概率较大、术后分期较晚，表明EZH2高表达可能会加快患者的病情发展，与其他研究结果一致。

已有研究表明，EZH2高表达患者比低表达患者的无病生存率更低，差异有统计学意义，EZH2高表达患者比低表达患者的预后更差，其发生复发转移的概率更高[14]。本研究对42例乳腺癌患者随访≥5年，统计发现，21例EZH2高表达的乳腺癌患者中，有6例死亡，2例发生复发和转移；21例EZH2低表达的乳腺癌患者中，有2例死亡，1例发生复发和转移。表明EZH2高表达患者比低表达患者更易发生复发转移，其与之前的研究报道一致。

综上所述，EZH2高表达多发生在病情更为严重的三阴性型乳腺癌患者中，EZH2表达的高低在肿瘤大小、淋巴结是否转移及术后分期之间比较，差异有统计学意义，且EZH2高表达的乳腺癌患者往往预后不良，总生存率较低。因此，EZH2可能是预测乳腺癌病情以及乳腺癌预后的指标之一。

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[13]徐静,刘丽丽,赵瑞霞,等.EZH2与乳腺癌及三阴性乳腺癌相关性的研究[J].中华肿瘤防治杂志,2010,17(24)：2026-2029.

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（李科编辑）

Correlations of enhancer ofDrosophilazeste homolog 2 with molecular subtypes and clinicopathological parameters of breast cancer*

Jie-bao Li,Xiao-cheng Yu,Ye Tian
(The First Hospital of Wuhan,Wuhan,Hubei 430000,China)

ObjectiveTo investigate the correlations of enhancer ofDrosophilazeste homolog 2(EZH2) with molecular subtypes and clinicopathological parameters of breast cancer.Methods The breast cancers were classified into several molecular subtypes,according to the new standard of molecular classification of breast cancer.The expression ofEZH2 in paraffin sections ofbreastcancer tissues was tested through immunohistochemistry method.The correlations of EZH2 with clinicopathological parameters and new molecular subtypes of breast cancers were analyzed and compared through Chi-square test.The correlation between EZH2 and disease-free survival of the breast cancer patients was analyzed through Kaplan-Meier method. Results In the 13 cases of Luminal A subtype,3 cases had high EZH2 expression(23.08%).In the 10 cases of Luminal B subtype,5 cases had high EZH2 expression(50.00%).In the 7 cases of Her-2 over-expression subtype,there were 3 cases of high EZH2 expression(42.86%).In the 12 cases of triple-negative breast cancer subtype,there were 10 cases of high EZH2 expression (83.33%).Significant differences existed in the expression of EZH2 among the four groups of molecular subtypes of breast cancer(P＜0.05).There was significantdifferencein the disease-freesurvivalbetween the breastcancerpatientswith high EZH2 expression and those with low EZH2 expression(P＜0.05).Conclusions EZH2 might be one of the indexes to predict the prognosis of breast cancer.

enhancer of Drosophila zeste homolog 2;breast cancer;molecular subtype;immunohistochemistry

R737.9

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.06.010

1005-8982（2017）06-0050-04

2016-08-09

湖北省2015年武汉市卫计委临床医学课题（No：WX15B17）