血清游离轻链检测方法及其在多发性骨髓瘤诊治中的应用研究进展

陈曦，许荟，史嘉颖，陈家楠，金韡，钱晓丹，管俊

(江苏省苏北人民医院，江苏扬州225001)

血清游离轻链检测方法及其在多发性骨髓瘤诊治中的应用研究进展

陈曦，许荟，史嘉颖，陈家楠，金韡，钱晓丹，管俊

(江苏省苏北人民医院，江苏扬州225001)

多发性骨髓瘤(MM)是一种骨髓中浆细胞克隆性增殖的血液系统恶性肿瘤，患者血清游离轻链(sFLCs)水平可升高至正常人的30～40倍，因此sFLCs成为MM等浆细胞克隆性增殖疾病的敏感、准确、实时监测指标。目前，临床上sFLCs的检测方法很多，包括血清蛋白电泳、免疫固定电泳、免疫比浊法、重轻链免疫分析法、质谱法等，由于sFLCs分子结构复杂多样，对同一患者使用不同的检测技术可提高对sFLCs检测的准确性及敏感性。sFLCs检测在MM的早期诊断、疗效评价及预后判断中均具有重要意义。

多发性骨髓瘤；血清游离轻链；质谱法；临床诊断；疗效评价；预后判断

多发性骨髓瘤(MM)是一种骨髓中浆细胞克隆性增殖的恶性肿瘤，约占所有肿瘤的1%，约占血液系统肿瘤的3%[1,2]。尿本周蛋白(BJP)即游离轻链(FLC)的发现，使得人们对浆细胞疾病(PCD)尤其是MM的认识更加深入[3,4]。正常的免疫球蛋白是由两条相同的轻链和两条相同的重链在B淋巴细胞的发育过程中通过二硫键连接而成；但轻链合成速度较重链略快，因此血清游离轻链(sFLCs)是浆细胞分泌Ig而产生的副产品。正常人血清中可出现一定比例的FLC，其中一小部分在肾脏近端小管被分解代谢，绝大部分是通过肾小球被重新吸收，超过肾小管重吸收的部分可从尿液中排出[5]。因此，正常情况下尿FLC即可代表sFLCs的正常水平。但MM患者B淋巴细胞克隆性增殖，sFLCs水平可升高至正常人的30～40倍，肾脏清除负荷过重，超过其正常代谢能力，因而产生了一个异常指标血清κ/λ，成为MM等浆细胞克隆性增殖疾病更为敏感、准确、实时的监测指标[6,7]。本文就sFLCs的检测方法及其在MM诊治中的应用研究作一综述。

1 sFLCs检测方法

1.1 血清蛋白电泳(SPE) SPE主要是利用载体如聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖等，使带电物质在外加电场的作用下向异种电荷的电极移动，将各自成分分离于不同区带。由于目的蛋白很容易被染色或吸光度扫描，所以很容易被识别和鉴定[7]。但SPE只可作为一种定性方法，单克隆蛋白尤其是sFLCs水平为500～2 000 mg/L时敏感性较高[8]，当低于该水平时SPE检测的敏感性较低。

1.2 免疫固定电泳(sIFE) sIFE是M蛋白定性和分型的确认方法，包括琼脂糖凝胶蛋白电泳和蛋白沉淀两个过程，同时具有蛋白质电泳的高分辨率及抗原抗体反应的特异性。sIFE检测sFLCs的敏感性是SPE的10倍，可以发现SPE不能检测出来的M蛋白[8]。但对于某些寡多肽型疾病患者，如轻链型多发性骨髓瘤(LCMM)、淀粉样变性(AL)、轻链沉积病(LCDD)等，往往不能通过SPE或sIFE检测出单克隆FLC。

1.3 免疫比浊法 免疫比浊法主要是应用抗原抗体的特异性结合形成复合物，并通过对复合物形成量进行测定，从而完成对抗原或抗体进行定量检测的方法[9,10]。免疫比浊法包括免疫透射比浊法及免疫散射比浊法。免疫透射比浊法的原理是利用一定波长的光线通过含有免疫复合物的浑浊介质溶液，由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一部分，吸收的多少与混浊颗粒的含量成正比[9]。免疫散射比浊法的原理是利用一定波长的光沿着水平轴照射溶液中的抗原抗体复合物，光线偏转后产生散射光，所形成光的强度与抗原抗体复合物的含量成正比[10]。这两种检测方法在目前临床检验中应用广泛，能够检测出sFLCs中的κ、λ链水平，从而计算出血清κ/λ，为MM提供更敏感的检测指标，其可以检测到的sFLCs水平可低至1.5～3 mg/L[11]。

1.4 重轻链(HLC)免疫分析法 HLC免疫分析法可通过量化各种免疫球蛋白的轻链类型，将小型M蛋白和与之交叠的免疫球蛋白β或γ区别开来，从而得出单克隆免疫球蛋白/多克隆免疫球蛋白的配对比率[12]。这种方法在MM患者sFLCs检测中的应用比较广泛，尤其是在监测微小残留病灶以及预测意义不明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)等方面作用突出[12]。此外，用该方法检测人类白细胞抗原(HLA)水平变化还可作为MM患者移植后浆细胞恢复正常的判断指标之一[13]。

1.5 质谱法 质谱法可作为定量检测各种极低浓度分析物的一种检测手段[14]。来自梅奥中心的研究人员开发出一种高分辨率质谱方法，能够在血清中检测出完整的单克隆免疫球蛋白以及多克隆游离轻链[15]。Barnidge等[16]研究证实，采用微流液相色谱-电喷雾-四极杆飞行时间质谱法可快速、准确检测sFLCs的精确分子质量，其原理是基于相同种群克隆性浆细胞分泌的FLC具有相同的氨基酸序列，因此也具有相同的分子质量。这一检测方法目前在检测低肿瘤负荷的轻链淀粉样变性(AL)患者血清中的κ、λ链等方面应用相对较多。

2 sFLCs在MM诊治中的应用

骨髓瘤权威机构如国际骨髓瘤工作组(IMWG)、美国国家综合癌症网(NCCN)以及中国骨髓瘤国家指南均将sFLCs水平升高作为诊断MM的必要条件；MM的疗效评价标准中严格意义上的完全缓解(SCR)把sFLCs降低作为标准之一；MM的病情监测也是以sFLCs水平变化为依据。因此，sFLCs检测在MM的早期诊断、疗效评价及预后判断中均具有重要意义。

2.1 sFLCs在MM早期诊断中的应用 IMWG提出将sFLCs水平升高作为诊断MM的必要条件，并认为即使没有检出异常的血清κ或λ，κ/λ异常亦可作为诊断依据[17]。Mead等[18]对499例初诊MM患者血清样本进行回顾性分析，结果显示超过96%的患者存在血清κ、λ升高或κ/λ变化。Bradwell等[7]对224例初诊轻链型MM患者血清进行检测，结果显示sFLCs水平均升高。Drayson等[19]以28例不分泌型MM患者为研究对象，发现19例患者sFLCs水平升高。NCCN对于诊断 MM 的检测项目进行更新，明确提出sFLCs是诊断MM的指标之一[20]。sFLCs分子结构复杂多样，对同一患者使用不同的分析技术才可能对sFLCs进行识别和定量检测。因此，sFLCs的检测需联合应用多种分析手段[21,22]。Secˇ ník等[23]报道了1例疑诊轻链型MM患者，该例患者反复多次SPE及sIFE固定电泳检测均显示阴性，sFLCs检测结果显示κ轻链阳性，最终诊断为κ型MM。

2.2 sFLCs在MM疗效评价中的应用 sFLCs作为MM早期疗效及复发判断的敏感指标，可实时反映患者的治疗效果，早期判断患者对化疗药物的耐受情况，指导临床及时调整治疗方案。Caldini等[24]报道，对MM患者进行sFLCs监测可以预测疾病的复发。Prag等[25]研究发现，17例MM患者治疗后sFLCs下降至原来的1/120，sFLCs水平急剧下降反映了其对肿瘤负荷微小变化的敏感性较高。Henry等[26]对MM患者治疗后的血清sFLCs进行监测，结果显示患者治疗后原先单克隆条带逐渐被小异常条带所取代，该研究提示检验技师在对治疗后MM患者的sFLCs单克隆条带进行解读时需谨慎分析，因为小异常条带也提示有潜在复发的可能。目前还有一种相对新颖的复发模式被称为“轻链逃逸”[27]。Brioli等[28]研究显示，对于轻链逃逸患者治疗后应尽早监测sFLCs，降低复发可能。Kraj等[29]研究发现，3例MM患者治疗后肾功能急剧性下降，sFLCs检测结果显示患者均发生了“轻链逃逸”。因此，MM患者治疗后仍需监测sFLCs水平变化，对于降低复发率具有重要意义。

2.3 sFLCs在MM预后判断中的应用 Kyrtsonis等[30]对94例初诊MM患者的血清样本进行sFLCs检测，结果显示患者sFLCs水平升高与广泛骨髓浸润、乳酸脱氢酶及肌酐水平升高有关，而sFLCs水平≤中位值与>中位值的MM患者5年生存率分别为82%、30%，说明sFLCs检测可作为判断初诊MM患者预后的相关指标。Rajkumar等[31]以1 148例意义未明的MGUS患者为研究对象，并对其初诊时的血清标本进行sFLCs检测，结果发现异常κ/λ是MGUS进展为MM等恶性浆细胞疾病的独立影响因素，提示sFLCs可以作为预测MGUS患者疾病进展的相关指标。Palumbo等[33]研究指出，对于MGUS患者或冒烟型MM患者应定期随访，初诊患者应每隔半年检测一次sFLCs，若疾病未有明显进展，可间隔两年或三年后再次随访[33]。

综上所述，对同一患者使用不同的检测技术可提高对sFLCs的检测准确性及敏感性，sFLCs检测在MM的早期诊断、疗效评价及预后判断中均具有重要意义。

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扬州市社会发展项目(YZ2015052)。

管俊(E-mail： guanjun-tt@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.44.036

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