甲状腺癌组织中Stat3、Survivin、MMP-13的表达变化及对淋巴结转移的影响

徐亚东，李华，宋春霞

(1海阳市人民医院，山东海阳265100;2海阳市妇幼保健计划生育服务中心)

甲状腺癌组织中Stat3、Survivin、MMP-13的表达变化及对淋巴结转移的影响

徐亚东1，李华2，宋春霞1

(1海阳市人民医院，山东海阳265100;2海阳市妇幼保健计划生育服务中心)

目的探讨信号传导与转录激活因子3(Stat3)、凋亡抑制基因(Survivin)、基质金属蛋白酶13(MMP-13)在甲状腺癌患者癌组织中的表达及其对淋巴结转移的影响。方法选取接受根治术治疗的甲状腺癌患者60例。采集患者甲状腺癌组织以及癌旁正常组织，以免疫组化法分别检测Stat3、Survivin、MMP-13的表达，并比较甲状腺癌有无淋巴结转移患者Stat3、Survivin、MMP-13表达水平。结果甲状腺癌组织中Stat3、Survivin 、MMP-13阳性表达率高于癌旁正常组织(P均<0.05)。甲状腺癌淋巴结转移患者Stat3、Survivin、MMP-13阳性表达率均高于无淋巴结转移者(P均<0.05)。结论甲状腺癌患者癌组织中Stat3、Survivin、MMP-13表达升高，且可促进淋巴结转移。

甲状腺癌；Stat3；Survivin；基质金属蛋白酶13；淋巴结转移

甲状腺癌属于临床上最常见的颈部恶性肿瘤[1]。临床上根据患者分化程度的不同分为乳头状癌、滤泡样癌、鳞癌以及髓样癌等。其中鳞癌、髓样癌均属于高度恶化的癌肿，具有发展迅速、预后差等特点，临床上常规治疗以及放、化疗均无显著效果[2]。有研究报道显示，甲状腺癌存在早期侵袭四周组织，以及出现淋巴结转移等情况的倾向，对患者的预后以及生存期具有不同程度的影响[3]。本文通过研究信号传导与转录激活因子3(Stat3)、凋亡抑制基因(Survivin)、基质金属蛋白酶13(MMP-13)在经根治术治疗的甲状腺癌患者组织中的表达变化及其对淋巴结转移的影响，旨在为临床诊治提供新型靶点。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2016年2月～2017年2月于海阳市人民医院接受根治术治疗的甲状腺癌患者60例，均经病理检查确诊。纳入标准[4]：均经手术病理检查确诊为甲状腺癌；均行根治术治疗；入院前未接受任何抗肿瘤治疗；临床病历资料完整。其中患者男34例、女26例，年龄22～72(45.4±10.4)岁；病理组织类型：乳头状腺癌30例，滤泡状腺癌18例，髓样癌7例，鳞癌5例；伴颈部淋巴结转移38例，无颈部淋巴结转移22例。术中取患者甲状腺癌组织60例份，癌旁组织(距癌组织5 cm)60例份。患者均知情并签署了同意书，且经医院伦理委员会批准。

1.2 组织Stat3、Survivin、MMP-13表达的检测 采用免疫组化法。所有组织标本通过10%甲醛固定，予以常规石蜡包埋，而后取4 μm厚连续切片。对组织切片实施常规脱蜡水化，经高温高压法给予抗原修复；再滴加一抗置于4 ℃孵育箱内过夜；随后严格按试剂盒内说明书滴加试剂，行DAB显色；然后行苏木素复染、脱水、封片，最后在高倍显微镜下进行结果评价。将已知阳性标本用于阳性对照，并以PBS代替一抗用于阴性对照。其中兔抗人Stat3多克隆抗体与兔抗人Survivin多克隆抗体均购自武汉博士德公司，兔鼠共用二抗购自北京中山金桥生物技术有限公司。兔抗人MMP-13型多克隆抗体购自北京博奥森生物公司。DAB显色剂和免疫组化染色有关试剂盒均购自北京中山金桥公司。评价标准[5，6]：切片均选择双盲法，并由本院两名病理科医师进行独立阅片。其中Stat3染色阳性信号呈棕黄色或棕色颗粒状，定位于细胞质与细胞膜；Survivin染色阳性信号棕色或棕褐色颗粒状，定位于细胞质。MMP-13染色阳性信号呈棕褐色颗粒，定位于细胞质。每张切片随机选取10个高倍镜视野，根据染色程度以及阳性细胞占比进行结果判定：其中不着色计为0分，染色强度较差计为1分，染色强度中等计为2分，染色强度较深计为3分；阳性细胞占比<5%计为0分，阳性细胞占比5%～25%计为1分，阳性细胞占比26%～50%计为2分，阳性细胞占比>50%计为3分。两项得分相乘所得结果即为最终判断结果。其中0～1分计为阴性，2～3分计为弱阳性，4～6分计为中度阳性，>6分计为强阳性。阳性率=弱阳性占比+中度阳性占比+强阳性占比。

1.3 统计学方法 采用SPSS20.0统计软件。计数资料以频次或百分比表示，比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同甲状腺组织中Stat3、Survivin、MMP-13表达比较 甲状腺癌组织中Stat3表达阴性、弱阳性、中度阳性、强阳性及阳性表达率分别为13、11、19、17例，78.33%； Survivin表达分别为17、11、21、10例，71.67%；MMP-13表达分别为16、12、20、12例，73.33%；癌旁组织中分别为43、6、7、4例，28.33%；48、6、4、2例，20.00%；54、4、1、1例，10.00%。甲状腺癌组织中各指标表达阳性率均高于癌旁组织(χ2值分别为30、134、30、303，49.509，P均<0.05。

2.2 甲状腺癌有无淋巴结转移患者Stat3、Survivin、MMP-13阳性表达率比较 甲状腺癌淋巴转移患者的Stat3、Survivin、MMP-13阳性表达率分别为86.84%(33/38)、92.11%(35/38)、89.47%(34/38，无淋巴结转移患者分别为63.64%(14/22)、36.36%(8/22)、45.45%(10/22)，两者比较，χ2值分别为4.421、21.321、13.806，P均<0.05。

3 讨论

近年，随着人们生活水平提高以及饮食习惯改变，甲状腺癌发病率逐年上升。该病具有较高的局部淋巴结转移率，患者预后较差[7，8]。肿瘤的侵袭转移通常是多步骤的复杂性过程，可涉及到肿瘤细胞与宿主间的相互作用，常有多种基因及其产物在该过程中起着至关重要作用[9，10]。Stat3信号传导通路和细胞的增殖、分化与凋亡存在一定相关性，且该通路的持续激活使得细胞异常增殖并向恶性转化，属于癌基因之一[11]。Survivin是凋亡抑制基因，具有抑制细胞凋亡以及调节细胞增殖的双重作用，其不但在细胞凋亡抑制、肿瘤血管形成中发挥着至关重要作用，同时还可在多种肿瘤细胞中表达[12]。MMP-13则是参与细胞外基质Ⅲ型胶原降解的重要酶，其主要是通过破坏肿瘤细胞周边，从而促进肿瘤细胞浸润及转移，与患者的预后密切相关[13，14]。

本研究结果显示，甲状腺癌组织中Stat3阳性表达率较癌旁组织高，与张晨蕾等[15，16]的研究报道一致，说明Stat3可能参与了甲状腺癌的发生、发展过程，可能成为临床上诊断甲状腺癌的指标之一。其中激活的Stat3可通过提高部分影响下游生长、凋亡相关基因的表达，进而促进肿瘤的发生、发展；而部分受Stat3调节的下游靶基因可通过与这些相关基因共同调节细胞周期和凋亡。目前，已有学者在胃癌、乳腺癌以及前列腺癌中发现，CyclinD1等蛋白的表达存在异常。笔者认为，通过对Stat3基因表达进行抑制或间接阻断Stat3的活化，可能有效治疗甲状腺癌，值得临床进行更深入的研究。此外，甲状腺癌组织中Survivin阳性表达率也较癌旁组织高，与黄海燕等[17，18]的研究报道一致，表明Survivin在甲状腺癌的发生、发展过程中可能发挥着重要作用，可能成为临床上诊断甲状腺癌的指标之一。另外，甲状腺癌组织中MMP-13阳性表达率高于癌旁组织，与侯继院等[19，20]的研究报道相似，提示MMP-13与甲状腺癌的发生、发展密切相关。本文结果还显示甲状腺癌淋巴转结移患者Stat3、Survivin、MMP-13阳性表达率均高于无淋巴结转移患者。提示Stat3、Survivin、MMP-13的表达与甲状腺癌淋巴结转移有关，临床工作中可通过对上述三项指标的表达进行有效抑制，从而达到改善患者预后的目的。

综上所述，Stat3、Survivin、MMP-13在甲状腺癌患者癌组织中表达升高，且与淋巴结转移有关。上述三项指标可能成为甲状腺癌诊断、治疗以及评估预后的新靶点。

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