乙型肝炎病毒携带者血清MIF的表达与肝组织病理状态相关性研究

付 军，唐庆新，熊晓晴，曾卫新，熊国荣，李 勇，徐 龙

(南昌市第九医院肝病科,南昌 330002)

乙型肝炎病毒携带者血清MIF的表达与肝组织病理状态相关性研究

付 军，唐庆新，熊晓晴，曾卫新，熊国荣，李 勇，徐 龙

(南昌市第九医院肝病科,南昌 330002)

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)携带者血清中巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的表达与肝组织病理状态相关性及其临床意义。方法 选取住院并完成肝脏穿刺的HBV携带者65例，进行肝组织病理病变程度诊断、慢性肝炎的炎症分级(GO—G4)和纤维化分期(S0—S4)；同时用ELISA法、基因扩增法分别检测血清乙肝病毒标志物、HBV-DNA。用ELISA法测定血清MIF水平。结果 65例HBV携带者血清MIF水平为(19.352±23.710)ng·mL-1;肝脏病理炎症分级G值为1.34±0.567；肝脏病理纤维化分级S值为1.51±0.868。直线相关分析结果显示：HBV携带者血清MIF与肝脏病理炎症分级G和纤维化分级S呈正相关(r分别为0.379、0.637，P分别为0.02、<0.01)。结论 MIF的高水平表达可能与HBV携带者炎症慢性化和纤维化加重的发生相关，检测其血清水平可作为评估HBV携带者肝脏病理病情严重程度的重要指标。

乙型肝炎病毒携带者；巨噬细胞移动抑制因子；肝组织病理；炎症；纤维化

乙型肝炎病毒(HBV)携带者可分为慢性HBV携带者和非活动性HBsAg携带者，两者的血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)在1年内连续随访3次以上均在正常范围。90%HBV携带的患者会出现不同程度的炎性反应和(或)纤维性病变。一般认为，HBV导致肝炎的发病机制与患者机体免疫状态(特别是细胞免疫状态)有关，众多细胞因子，如肿瘤坏死因子、IL-1、IL-6、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)等均参与其中，导致肝细胞坏死，并发生不同程度的炎症和纤维化改变。而MIF参与了多种炎症性疾病的病理、生理过程，是许多炎性疾病发病机制中重要的介质，涉及炎症和自身免疫性疾病的发病机制，且MIF的高水平表达和疾病的严重性程度有相关性[1]。目前，MIF在HBV携带者病程中的研究尚不多见，本研究对HBV携带者血清中的MIF水平与肝组织病理状态的关系进行探讨，将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选择2014年6月至2016年8月在南昌市第九医院传染科住院并完成肝脏穿刺的HBV携带者，共65例。其中男55例，女10例，年龄18～45(25.1±2.3)岁。纳入标准：1)发现HBsAg阳性时间≥6个月；2)无慢性肝炎症状和体征，既往肝功能正常；3)肝脏穿刺病理检查且血清HBsAg阳性；4)B超检查示肝脾无明显异常；5)患者对本研究知情同意，并签订“手术同意书”。剔除标准：1)有肝炎病史，或使用过核苷类药物和干扰素抗病毒治疗；2)有其他嗜肝病毒感染；3)有自身免疫性疾病；4)合并心、脑、肾等其他脏器疾病；5)吸毒、酗酒者；6)曾服用肝细胞损害药物。

1.2 标本采集与检测

常规检测血小板，出、凝血时间和凝血酶原时间。在超声定位下，应用1 s穿刺针进行快速肝穿刺。标本长1.5～2.0 cm，包括至少3个汇管区，获取的肝组织均用10%甲醛固定送检。送病理室检查，进行苏木精-伊红染色、网状纤维染色、Masson染色、免疫组织化学和肝细胞HBV-DNA原位杂交，石蜡包埋切片。由高年资病理科医师盲法阅片。病理诊断按2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会联合修订的《病毒性肝炎防治方案》的诊断标准，并进行慢性肝炎的炎症分级(GO—G4)和纤维化分期(S0—S4)。

以非抗凝干燥无菌真空采血管取患者清晨空腹全血5 mL，置于4 ℃冰箱放置2～4 h，然后以1300×g离心5 min，取上清液2 mL分装于EP管内，标记后冻存于-20 ℃冰箱内备用。用ELISA法、基因扩增法分别检测血清乙肝病毒标志物、HBV-DNA。用ELISA法测定血清MIF水平，试剂盒是由美国Raybio公司生产，按说明书进行操作。

1.3 统计学方法

应用SPSS19.0软件进行数据分析，用Pearson做相关性分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

65例HBV携带者血清MIF水平为(19.352±23.710)ng·mL-1;肝脏病理炎症分级G值为1.34±0.567；肝脏病理纤维化分级S值为1.51±0.868。直线相关分析结果显示：HBV携带者血清MIF与肝脏病理炎症分级G和纤维化分级S呈正相关性(r分别为0.379、0.637，P分别为0.02、<0.01)。

3 讨论

我国1～59岁一般人群中HBsAg携带率为7.18%，绝大部分是在婴幼儿时期感染，其中80%会发展成为慢性HBV携带者[2]。慢性HBV感染的自然史演变复杂，HBV携带者属于观察对象，处于相对稳定阶段。经肝脏病理检查发现，HBV携带者并不是既往认为的“乙肝病毒健康携带”，有一部分HBV携带者的肝脏发生了不同程度的炎症和纤维化改变[3-5]，甚至还可以进展到慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌[6-7]。HBV感染所引起的机体免疫病理反应与众多细胞因子有关，当机体免疫细胞被暴露于病原体及其产物或特异性抗原下，免疫细胞被激活并释放炎症前细胞因子[8]。MIF是由活化的免疫细胞(主要是T细胞和巨噬细胞)分泌的一种炎症前细胞因子，是分子量为12 500的蛋白质。在肝血窦内，MIF可能抑制巨噬细胞游走和促使巨噬细胞聚集，并趋化和刺激T单核细胞、细胞、NK细胞、嗜酸性粒细胞等免疫细胞，促进某些细胞因子的表达，如肿瘤坏死因子、IL-1、IL-6等，对炎性反应起到调控和扩大作用[9-10]。在HBV感染所致的肝脏病理改变的发病机制研究中，张卡等[11]发现MIF的早期生成可能与病毒复制有关，与肝功能无关。在肝纤维化的过程中，MIF可以诱导巨噬细胞分泌IL-8，IL-8可通过趋化炎症细胞，刺激释放大量的肌酸激酶而间接激活肝星状细胞，影响肝纤维化的病理过程[12-14]。如果在非活动性HBsAg携带状态，肝硬化已经存在，尽管发展缓慢，但仍在继续[15]，而MIF中和性抗体则对过度炎症反应具有显著的保护作用[16]。

本研究分析HBV携带者外周血MIF与肝脏炎症和纤维化程度的相关性，发现MIF水平与肝脏的G、S分级呈正相关(r分别为0.379、0.637)，提示HBV携带者MIF水平的变化与肝脏组织损害程度相关，亦与肝病的严重程度有关。由于肝活检具有创伤性、标本误差以及判读误差，患者也不愿意接受一次或多次的肝脏穿刺检查，从而很难及时发现肝脏病理改变[17]。相较与肝组织活检，血清MIF作为更简便、更客观、更有价值且非创伤性的血清学监测指标，可提高对HBV携带者的早期诊断、早期干预能力，更准确地判断病情，以期有效改善预后。

综上所述，MIF可能在肝脏炎症和纤维化发病过程中起重要作用，检测血清MIF水平可作为HBV携带者肝脏组织出现病理改变早期诊断的重要指标。对MIF在HBV携带者肝脏病理改变过程中参与机制的深入研究，有利于探求治疗慢性乙型肝炎和降低慢性乙肝发病率的新途径。

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(责任编辑：罗芳)

2016-11-09

南昌市科技支撑计划项目-社会发展领域(洪科发计字[2013]203号13)

R512.62

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1009-8194(2017)03-0011-02

10.13764/j.cnki.lcsy.2017.03.004