分析筛查新生儿干血斑β地中海贫血的方法及效果

贾波

253000德州市妇幼保健院(山东)

分析筛查新生儿干血斑β地中海贫血的方法及效果

贾波

253000德州市妇幼保健院(山东)

目的：探讨全自动毛细管微量血红蛋白电泳技术在新生儿β地中海贫血筛查中的应用价值。方法：收治新生儿145 902例，采用Sebia全自动毛细管电泳仪进行血红蛋白电泳。对95 058例标本以HbA界值法读出β地中海贫血筛查结果，对50 844例标本根据HbA值结合HbA2/HbA比值读出β地中海贫血筛选结果。随机选取598份结果判读β地中海贫血筛选结果，同时基因检测为β地中海贫血金标准。结果：HbA界值法β地中海贫血符合率45.2%、假阳性率54.8%；综合分析法β地中海贫血符合率73.5%，假阳性率26.5%。HbA与综合分析敏感度与特异度分别54.54%、90.90%和97.57%、99.30%。综合分析法在阳性预测值与筛选准确性等方面高于HbA界值法。结论：综合分析法在筛选新生儿β地中海贫血，判断电泳结果上灵敏度与精确度等较高。

新生儿；干血斑；β地中海贫血；毛细血管电泳

β地中海贫血是受β珠蛋白异常引起的，目前国内外已经报道了很多与新生儿β地中海贫血相关的文章，但是筛选与工作模式不成熟。本次主要了解筛选新生儿干血斑β地中海贫血的方法及结果，现报告如下。

资料与方法

2014年4月-2015年4月对某市医疗机构收治的145 902例新生儿血斑标本进行采集，并进行电泳筛选，了解阳性者基因诊断情况。

分组：将2014年4月-2015年4月采集的95 058例样本使用HbA界值法筛选β地中海贫血；其余50 844例样本使用综合分析法筛选β地中海贫血；并选取2016年4月随机采集的598例样本同时使用两种方法筛选β地中海贫血，检测血斑标本。

仪器与试剂：①分析血红蛋白：使用Sebia公司的全自动毛细管电泳仪并配有血红蛋白电泳试剂盒[1]。②检测基因：基因扩增仪、分子杂交仪与β地中海贫血基因诊断盒由广东凯普生物技术有限公司提供。

新生儿干血斑血红蛋白电泳：①血红蛋白电泳：从滤纸干血斑下打下直径为4.83mm2的血斑片，将其放置于50μL的蒸馏水测试杯中，放置一夜，并将其导入全自动毛细管电泳仪中检测，按照规范要求操作。②结合全自动毛细管电泳仪报告结果对样本HbA与HbA2含量进行测定[2]。

判读β地中海贫血阳性：①综合分析法：参照血红蛋白中含有的HbA与HbA2含量及HbA2与HbA比值筛选β地中海贫血阳性。②HbA界值法：结合HbA了解β地中海贫血并筛选阳性，如果HbA≤9.5%或者出现HbE则判断为β阳性，HbA＜2%时，为疑似β地中海贫血[3]。

基因检测：使用聚合酶链反应-反向点杂交技术对β珠蛋白技术突变进行分析，主要对突变位点的41-42、IVS-Ⅱ-653、βE、71-72、-28、14-15、CAP、Int、17、IVS1-1、27/28、-30。

统计学方法：借助统计学软件SPSS 19.0分析汇总上述汇数据，[n(%)]表示计数资料，计量资料采取(±s)表示，t检验组间对比率；P＜0.05表示差异具有统计学意义。

结果

综合分析法与HbA界值法筛选阳性基因确诊符合率。使用HbA界值法筛选的95 058例中，阳性3 940例，阳性率4.1%，召回筛选阳性1 580例中，β地中海贫血确诊715例，符合率45.2%，假阳性率54.8%，召回14例HvE为轻型β地中海贫血；召回37例中，中重型β地中海贫血中34例检测为双重杂合子与地中海贫血纯合子。

以综合分析法筛选的50 854例中，阳性2 031例，阳性率4.0%，召回1 264中诊断出β地中海贫血929例，符合率73.5%，假阳性率26.5。14例筛查疑为中重型β地中海贫血的13例诊断为纯合子或双重杂合子。

HbA界值法与综合分析法的对比研究。从上述分析可知，两组在阳性率上差异无统计学意义，但综合分析法高于HbA界限法。本次使用两种方法对598例标本进行基因检测和筛选，检测出阳性577例，β地中海贫血21例，见表1。

两组诊断能力，见表2。

讨论

正常新生儿HbF控制在70%左右，HbA占据30%，HBA2较少，一般＜1%。随着医学技术的发展，分析新生儿干血斑标本的全自动毛细管蛋白电泳技术得到快速发展，可以借助高压电分离血红蛋白组分。该项技术检测血红蛋白较敏感，而且较安全，可以检测出多种血红蛋白组分，已经成为目前临床上筛选新生儿地中海贫血的有效方式。

目前国内外都已经将HbA＜9.5%作为筛选β地中海贫血的初始方案，筛选出的阳性率稍高于分子流行病学调查结果。将HbA＜2.5%作为阀值发现，筛查的β地中海贫血新生儿符合率较高，可以作为新生儿重型β地中海贫血筛选指标。相关研究使用琼脂糖电泳对脐带血含有的HbA进行分析，得到的β地中海贫血确诊符合率为84.2%与78.3%，此结果与使用的电泳法具有很大差异。而且脐血采集时间也会对标本造成影响，一般脐血出生时采集，干血斑标本在出生后3～6 d采集。由于HbA界值法采集的阳性率较高，所以复诊与召回较多，给检查者造成了很大的心理负担，必须对分析方法进行改善。

表1 HbA界值法与综合分析法对598例标本的筛选(n)

表2 HbA界值法与综合分析法诊断能力比较

综合分析法是在HbA界值基础上根据HbA2含量及两者比值所形成的，可以对新生儿β地中海贫血毛细血红蛋白电泳结果进行分析。由于珠蛋白一般在妊娠后阶段合成，因此新生儿血液中难免会出现少量的HbA2，β地中海贫血的代偿性容易引起HbA2增加或提前出现。本次使用全自动毛细管血红蛋白电泳对新生儿干血斑标本进行检测，检测的HbA2较高，给临床分析创建了条件。试验结果表明，综合分析法总确诊率高于HbA界值法。

由于本次研究所选择的综合分析与HbA界值标本来源不一致，因此为了深入探讨两种方法在筛选β地中海贫血上的效果，本次应用两种方法对598例样本进行了筛选，并完成了基因检测。从检测结果来看，综合分析法在敏感度、筛选准确性及阳性预测等方面均优于HbA界值法，差异具有统计学意义(P＜0.05)，而且综合分析法的阴性预测与特异性也高于HbA界值法。

综上所述，新生儿干血斑采用的全自动毛细管血红蛋白电泳具有操作简单、方便等特点，主要测定HbA、HbA2与HbA2/HbA比值，均可提高筛查β地中海贫血的精确性，而且实际操作较敏感，值得临床推广。

[1]蔡稔,梁听,潘莉珍.血液学指标在育龄人群地中海贫血筛查中的诊断价值[J].中国优生与遗传杂志,2014,7(9):67-68.

[2]黄烁丹,张惠琴．广东省梅州地区地中海贫血的分子流行病学调查[J].热带医学杂志,2015,1(6):234-235.

[3]罗秋月.脐血毛细管电泳法筛查新生儿地中海贫血的应用价值[J].广州医科大学, 2014,5(4):67-69.

Method and effect o f screening for neonatal d ry blood spot beta thalassem ia

Jia Bo
TheMaternaland Child Health HospitalofDezhou City(Shangdong Province)253000

Objective:To explore the the application value of fully automatic capillary trace hemoglobin electrophoresis of screening for neonatal beta thalassemia.Methods:145902 neonates were selected,they were given hemoglobin electrophoresis using Sebia fully automatic capillary electrophoresis apparatus.Beta thalassemia screening results of 95058 caseswere identified by HbA boundary valuemethod,beta thalassemia screening results of 50844 cases were identified by HbA binding HbA2/HbA ratio.598 resultswere randomly selected to interpret the beta screening results,genetic testingwas the gold standard for diagnosis of beta thalassemia.Results:In HbA boundary valuemethod,the consistent rate was 45.2%,the false positive rate was 54.8%.In comprehensive analysismethod,the consistent ratewas 73.5%,the false positive ratewas 26.5%.The sensitivity and specificity of HbA and comprehensive analysis were 54.54%,90.90%and 97.57%,99.30%respectively.In the comprehensive analysis,the positive predictive value and the screening accuracy were higher than the HbA boundary value method.Conclusion:In the screening of neonatal beta thalassemia,determining the electrophoresis results,the sensitivity and accuracy of the comprehensive analysismethodwerehigher.

Newborn;Dry blood spot;Beta thalassemia;Capillary electrophoresis

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.7.75