四数九里香挥发油对离体蟾蜍坐骨神经动作电位的影响*

李旭伟 伏清尧 包煜忠 蔡雪敏 陈珍 张世鹏

(1.川北医学院基础医学院机能实验中心；2.川北医学院麻醉学系；3.川北医学院药学院，四川 南充 637000)

四数九里香挥发油对离体蟾蜍坐骨神经动作电位的影响*

李旭伟1伏清尧2包煜忠2蔡雪敏2陈珍3张世鹏3

(1.川北医学院基础医学院机能实验中心；2.川北医学院麻醉学系；3.川北医学院药学院，四川 南充 637000)

目的：研究四数九里香挥发油对离体蟾蜍坐骨神经动作电位的传导阻滞作用。方法：采用水蒸气蒸馏法提取四数九里香挥发油，观察四数九里香挥发油对离体蟾蜍坐骨神经复合动作电位的振幅和传导速度的影响。结果：四数九里香挥发油使坐骨神经复合动作电位的振幅变小(P<0.01)，传导速度变慢(P<0.01)，并最终使坐骨神经动作电位消失。结论：四数九里香挥发油能阻滞神经动作电位的传导。

四数九里香挥发油；离体坐骨神经；复合动作电位；阻滞

四数九里香(murrayatetramerahuang)为芸香科九里香属植物，以干燥树叶入药，全年均可采收。主产于云南、广西、贵州、福建、台湾等亚洲热带及亚热带地区[1]，其味辛、微苦，性微温，具有祛风解表、行气、活血散痛、抗炎、解热之功效[2]，可治胃痛、风湿痹痛，外用则可治牙痛、跌扑肿痛、虫蛇咬伤等[3]。现代药理学研究表明，九里香具有抗生育和终止妊娠、抗菌、抗甲状腺肿大、降血糖、麻醉镇静及增强免疫功能等作用[4]。相关研究表明，九里香挥发油在醋酸致痛小鼠扭体试验(Nakainur的方法)及热板试验(Edd的方法)中均表现出一定的镇痛作用，说明其具有一定的外周镇痛及中枢镇痛作用[5]。本研究从电生理学的角度，观察四数九里香挥发油对离体蟾蜍坐骨神经动作电位的影响，以进一步探讨九里香镇痛作用的可能机制。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 实验试剂

任氏液(NaCL6.5g，KCL0.14g，CaCL20.12g，NaHCO30.20g，NaH2PO40.01g)加蒸馏水至1000ml，所用试剂均为化学纯，购自成都市科龙化工试剂厂；四数九里香挥发油：四数九里香购自南充市德胜堂大药房，水蒸气蒸馏提取法提取挥发油(川北医学院药学实验中心制备)[6]，具体如下：取250g四数九里香，加纯水1000ml浸泡30min，用挥发油提取器加热提取挥发油2h，至挥发油不再增多，停止加热，冷却后分液漏斗收集挥发油2.5ml。

1.1.2 实验仪器

BL-420F生物机能实验系统(四川成都泰盟科技有限公司)；神经屏蔽盒(四川成都泰盟科技有限公司)；调温电热套(北京中兴伟业仪器有限公司)；电子天平(沈阳龙腾电子有限公司生产)。

1.2 方法

1.2.1 实验动物分组

中华大蟾蜍12只，雌雄兼用，体重100-110g，由川北医学院实验动物中心提供，随机分为2组：任氏液组和四数九里香挥发油组，每组6只。

1.2.2 坐骨神经标本制备

将蟾蜍进行称重，捣毁脑和脊髓，分离坐骨神经3～5cm，尽量将神经干周围的组织剔除干净，神经干脊柱端和足端用棉线结扎，置于任氏液中浸泡孵育5min稳定其兴奋性[7]。

1.2.3 动作电位引导并记录

将孵育后的神经干慢慢沿培养皿壁取出，沥干其水分，搭到神经屏蔽盒的电极上，测定动作电位振幅和传导速度。在位于刺激电极与引导电极的神经干上分别放置浸湿药液(任氏液组，四数九里香挥发油组)的小棉条，浸润神经干后取出小棉条，用BL-420F生物机能实验系统每隔1min检测动作电位相关值。动作电位速度测定需要测量两个引导电极之间距离。单个动作电位及传递速度测定仪器设置值：方式，单刺激；延时：5.00ms；波宽：0.05ms；强度：1.00v；频率：10KHZ；采样率：1.25ms·div-1[8]。

1.3 数据处理

2 结果

2.1 四数九里香挥发油对蟾蜍坐骨神经复合动作电位振幅的影响

随着四数九里香挥发油作用时间的延长，可使坐骨神经干复合动作电位的振幅逐渐变小(P<0.01)，见表1。

2.2 四数九里香挥发油对蟾蜍坐骨神经复合动作电位速度的影响

随着药物作用时间的延长，可使坐骨神经干复合动作电位的传导速度逐渐变小(P<0.01)，神经传导速度的改变与神经动作电位振幅的改变基本同步，见表2。

3 讨论

四数九里香为芸香科植物，主要产于广西的百色、德保和云南东部的砚山、富宁、文山、西畴，常见于石灰岩山顶阳光充足的地方。民间常用于治疗感冒、发热、支气管炎、哮喘、风湿麻木、筋骨疼痛、跌打瘀血肿痛、胃痛及水肿等，现代中药学已研制三九胃泰治疗胃痛，将其枝叶醇提取物和精油制成注射剂，用于治疗急慢性肾盂肾炎、急性肾小球肾炎、慢性肾炎、肺癌等。

现代药理学研究结果显示[5]，四数九里香挥发油能显著抑制角叉菜胶致大鼠足肿胀程度和大鼠棉球肉芽组织重量；能显著减少醋酸引起的小鼠扭体反应次数和延长小鼠热板痛阈值。实验研究表明，四数九里香挥发油具有显著的抗炎和镇痛作用。

表1 四数九里香挥发油对蟾蜍坐骨神经复合动作电位振幅的影响±SD，n=6)

注：与任氏液组相比，*P<0.01。

表2 四数九里香挥发油对蟾蜍坐骨神经动作电位传导速度的影响±SD，n=6)

注：与任氏液组相比，*P<0.01。

本实验通过离体实验方法，观察了四数九里香挥发油对蟾蜍坐骨神经复合动作电位振幅及传导速度的影响。实验结果表明四数九里香挥发油对坐骨神经动作电位的传导具有明显阻滞的作用，提示阻滞神经动作电位的传导是四数九里香镇痛作用可能的机制之一，其分子药理学、分子病理学机制还有待进一步研究。

有关四数九里香化学成分方面的研究较多，龚志强等采用超临界CO2流体萃取法提取四数九里香挥发油鉴定了其中的38种成分，其中相对质量分数最高的是薄荷酮(38.17%)、异薄荷酮(12.34%)、胡椒酮(10.90%)和β-水芹烯(9.75%)。水蒸气蒸馏法提取四数九里香挥发油鉴定了其中的33种成分，其中胡椒酮(17.40%)、薄荷酮(20.51%)、异薄荷酮(6.94%)、β-水芹烯(11.59%)、萜品烯(13.38%)。超声波溶剂萃取法提取四数九里香挥发油鉴定了其中的12种成分，其中相对质量分数最高的是薄荷酮(43.45%)、异薄荷酮(16.31%)、胡椒酮(9.97%)、侧柏烯(11.40%)、β-水芹烯(9.35%)。因此，四数九里香有效药物成分筛选及新药制剂开发成为可能热点之一。

1 中国科学院中国植物志编辑部委员会. 中国植物志[M]. 北京: 科学技术出版社, 1997, 145-146.

2 中华本草编委会. 中华本草[M]. 上海: 上海科学技术出版社, 1998, 947-948.

3 全国中草药汇编编写组. 全国中草药汇编( 上册) [M]. 第2版. 北京: 人民卫生出版社, 1996, 10-11.

4 张宗禹,韦松,陈安兰,等. 九里香糖蛋白成分终止孕兔妊娠及其机理[J]. 中国药科大学学报, 1989, 20(5): 283-286.

5 毛长智,黄蓓,庚志斌. 四数九里香挥发油抗炎及镇痛作用研究[J]. 云南中医中药杂志, 2011, 32(8): 74-75.

6 龚志强,谈远锋,黄敏,等. 不同方法提取四数九里香挥发油气质联用分析[J]. 湖南师范大学自然科学学报, 2014, 37(2): 47-50.

7 李旭伟,张俊清,罗露,等. 辣椒碱对离体蟾蜍坐骨神经动作电位的影响[J]. 现代医药卫生, 2011, 28(7): 979-980.

8 张建武,陈诗渝,林静,等. 蛇床子提取液对离体蟾蜍坐骨神经动作电位的影响[J].四川生理科学杂志, 2014, 36(2): 58-59.

Effects of essential oil frommurrayatetramerahuangon compound action potential of sciatic nerve of toad*

Li Xu-wei1, Fu Qing-rao2,Bao Yu-zhong2,Cai Xue-min2,Chen Zheng3,Zhang Shi-peng3

(1.Functional Experimental Center of Preclinical Medical School, North Sichuan Medical College; 2.Department of Anaesthesiology, North Sichuan Medical College; 3.School of Pharmacy, North Sichuan Medical College, Sichuan NanChong 637100)

Objective：To study the blockade effect of essential oil frommurrayatetramerahuangonactionpotentialofsciaticnerveoftoad. Methods: The essential oil frommurrayatetramerahuangwasextractedbysteamdistillation.Theeffectsofessentialoilfrommurrayatetramerahuangonamplitudeandconductionvelocityofcompoundactionpotentialofsciaticnerveoftoadwereobservedinvitro. Results: The essential oil frommurrayatetramerahuangcoulddecreasetheamplitude(P<0.01)andslowdowntheconductionvelocity(P<0.01).Theactionpotentialofsciaticnervevanishedatlast. Conclusion:Murrayatetramerahuangcanblocktheconductionofactionpotentialofnerve.

Essential oil frommurrayatetramerahuang;Sciaticnerveoftoadinvitro;Compoundactionpotential;Blockade

川北医学院2016年大学生开放性实验项目(编号：2016-002)

李旭伟，男，讲师，主要从事机能实验学教学及循证医学研究，Email：lxwhi@qq.com。

2016-9-27)