趋化因子I-TAC及其受体3对腺样囊性癌转移影响的研究①

庄桂婧，李铁成，邱 明

(1.佳木斯大学附属第二医院 ，黑龙江 佳木斯 154002 ；2.大庆油田总医院口腔科，黑龙江 大庆 163001 )

趋化因子I-TAC及其受体3对腺样囊性癌转移影响的研究①

庄桂婧1，李铁成2，邱 明2

(1.佳木斯大学附属第二医院 ，黑龙江 佳木斯 154002 ；2.大庆油田总医院口腔科，黑龙江 大庆 163001 )

目的:初步研究趋化因子(I-TAC)及其受体(CXCR3)诱导血管生成拟态形成在腺样囊性癌中的作用和意义。方法:实验选用唾液腺样囊性癌病理蜡块24块，综合临床症状和镜下观察应用免疫组织化学法，检测唾液腺腺样囊性癌及正常唾液腺组织旁组织中I-TAC-CXCR3的表达并采用PAS、CD31双重染色法检测各组组织中血管生成拟态的形成状况。结果:I-TAC和CXCR3在腺样囊性癌组织中的表达量高于瘤旁组织(P<0.05)。在有神经转移的腺样囊性癌组织中高于无神经转移的腺样囊性癌组织(P<0.05)。有神经转移和无神经转移组织都存在血管生成拟态，然而在有神经转移的腺样囊性癌中血管生成拟态的表达数量明显高于无神经侵袭组和正常组织。结论:I-TAC和CXCR3在腺样囊性癌组织中高表达提示二者可能在腺样囊性癌的发病机制中发挥作用血管生成拟态在有神经转移的腺样囊性癌中高表达且CXCR3与组织阳性表达的血管生成拟态呈正相关 (相关系数r=0.718,P<0.01)。初步得出趋化因子及其受体可能与腺样囊性癌的神经转移相关。

腺样囊性癌;趋化因子及其受体;血管生成拟态;免疫组织化学

I一TAC为干扰素诱导的T细胞趋化因子(分子标记CXCLll)被称为1型趋化因子(或Thl趋化因子),其受体是CXCR3[9]。I-TAC强有力的趋化现象和代理激活T细胞的这两种活动依赖在CXCR3激活[1]。腺样囊性癌具有嗜神经侵袭的特性，因此我们推测I-TAC-CXCR3这对生物轴诱导血管拟态形成为腺样囊性癌发生嗜神经侵袭的机制之一[2]，本实通过检测腺样囊性癌及其癌旁组织中I-TAC-CXCR3 表达的差异及其与血管生成拟态[3]多少的关系来分析其与对腺样囊性癌神经转移的趋化性和对血管拟态形成的诱导关系。

1 材料与方法

1.1 标本来源

取大庆油田总医院病理科2014～2015年间的唾液腺腺样囊性癌病理蜡块27例，其中男15例，女12例；年龄25～73岁。分别取腺样囊性癌组织和肿瘤外1.0cm正常腮腺组织，标本转至液氮罐中，后置于-80℃低温冰箱中保存待用,其余标本送病理科石蜡包埋，常规病理检查,病理诊断均由两位病理医生确诊，神经侵袭腺样囊性癌18例，无神经侵袭9例。每例肿瘤标本连续切片，厚度约 4～6μm，选取完整均匀的切片HE染色后光镜下观察，如发现1处及以上在神经周围和(或)神经内有肿瘤细胞的存在，即将该例组织划为侵袭神经现象组。共计侵袭神经现象标本 18例,未侵袭现象标本9例。

1.2 免疫组化SP法检测I-TAC和CXCR3的表达

I-TAC和CXCR3的检测采用SP免疫组化法，染色程序按SP试剂盒说明书进行。

1.3CD31与PAS双重染色方法

首先进行CD31免疫组化染色(染色步骤如上),DAB显色后。显微镜下观察,血管内皮细胞着色后,水流冲洗1min终止显色反应。将切片置于0.5%的过碘酸溶液中氧化8～15min。水流冲洗3min后置于Schiff液中,闭光环境在Schiff液中反应15～30min,一般15min为宜。蒸流水洗3次,每次1min,流水冲洗3～5min。苏木精浅染胞核l2min(苏木精为实验开始时配置),自来水冲洗2min。盐酸酒精分化,氨水返蓝。常规酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。

1.4 统计学方法

采用SPSS19.0软件进行统计分析，各计量资料以均数 ± 标准误表示，表达水平分析采用四格表资料的Fisher确切概率法，P<0.05表明差异有统计学意义。两组变量间的相关性分析采用Pearson等级相关分析,以P<0.01为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 免疫组织化学法检测I-TAC和CXCR3 的表达结果显示:27对腺样囊性癌组织及其瘤旁组织均测得I-TAC和CXCR3的表达，腺样囊性癌组织及其瘤旁组织I-TAC和CXCR3平均表达量见表1，I-TAC和CXCR3 在有神经侵袭组织的腺样囊性癌中的表达高于无神经侵袭的腺样囊性癌组织和正常组织，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2 在腺样囊性癌组织中观察到血管拟态的存在并且有神经侵袭组明显多于无神经侵袭及正常组织，差异有统计学意义(P<0.05)。

表1 CXCR3,I-TAC,VM在腺样囊性癌和正常组织免疫组化染色结果

图1I-TAC在有神经侵袭的SACC的表达(×400)

图2 CXCR3 在有神经侵袭的SACC的表达(×400)

图3 VM在神经侵袭的SACC的表达(×400)

3 讨论

肿瘤细胞常常表现出特定的转移方式，并且不同的肿瘤细胞具有各自的特异性侵袭器官，这提示受侵袭器官周围的微环境对肿瘤细胞的诱导、侵袭和增殖效应有着一定的影响作用。腺样囊性癌有嗜神经的特性，因此有必要对其特征性的嗜神经特性进行相关的研究。趋化因子是一类可诱导的、分子质量为7～8kD的促炎细胞因子，具有激活和趋化白细胞的作用[4]。根据其末端半肤氨酸保守序列位置的不同可分为四大类，其中CXC类趋化因子的近氨基端存在CXC(半肤氨酸一其它氨基酸一半眺氨酸)基序，这类趋化因子—可趋化中性粒细胞，刺激血管形成[10]。VM是具有侵袭性肿瘤细胞为满足自身的侵袭发展提供路径和营养，而通过自身变形和细胞外基质重塑形成的一种类似血管样的通道[5]。VM在镜下观察的情况是肿瘤细胞形成瘤细胞条索并围成管道，管道内没有血管内皮细胞衬覆，管道外是一层厚薄不一的PAS阳性物质构成的基底膜。血液则在这无内皮细胞的管道中流动。因为VM缺乏内皮细胞，所以肿瘤细胞可直接进入血液，发生血行播散,不同于经典的内皮细胞依赖的肿瘤微血管结构[6]。为了验证趋化因子和血管拟态的关系，本实验设计应用免疫组织化学法检测I-TAC和CXCR3在有无神经侵袭的腺样囊性癌中的表达程度与周围的正常组织做照，PAS、CD33双重染色观察血管拟态的形成状况。实验结果显示在有神经侵袭的腺样囊性癌中I-TAC和CXCR3 的表达明显高于无神经转移和正常组织(P<0.05)。在表达CXCR3的有神经转移的腺样囊性中均能观察到血管生成拟态。统计结果进行配对资料的相关性分析，表明CXCR3主要表达与腺样囊性癌组织临床病理特征的关系：CXCR3与I-TAC两者阳性表达呈正相关(相关系数r=0.652,P<0.01),血管生成拟态(VM)与CXCR3两者的阳性表达呈正相关(相关系数r=0.718,P<0.01)。通过以上实验现象和数据可以发现CXCR3，I-TAC和VM的表达与腺样囊性癌的病理分型有关，均为神经侵袭较无神经侵袭偏高(P<0.05)，初步分析CXCR3和I-TAC对腺样囊性癌的发展和转移有促进作用，CXCR3与血管生成拟态阳性表达呈正相关提示CXCR3和I-TAC可以诱导血管生成拟态生成，为腺样囊性癌的神经转移提供信号，实验也证实了腺样囊性癌存在VM,神经转移组阳性表达率明显增高,说明血管生成拟态与神经转移有相关性。依据实验和以往的研究结果可以初步判定CXCR3/I-TA/C受体配体对口腔腺样囊性癌细胞转移提供了信号[7]，诱导形成血管拟态为口腔腺样囊性癌侵袭转移提供血液供应促进它的嗜神经侵袭。因此,在临床上可通过CXCR3，I-TAC及血管生成拟态对腺样囊性癌患者检测,从而对腺样囊性癌神经转移进行早期预测,早期治疗[8]。考虑到治疗的安全和可靠性,还需要今后更多的体内、体外实验研究，为进一步降低腺样囊性癌转移率提供依据。

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The effect of I-TAC and its receptor 3 on the metastasis of adenoid cystic carcinoma

ZHUANGGui-jing1，LITie-cheng2，QIUMing2

(1. Department of Stomatology, the Affiliated Stomatology Hospital of Jiamusi University, Jiamusi 154002,China; 2, Daqing Oilfield General Hospital，Daqing163004,China)

Objective: To study the role and significance of chemotactic factor (I-TAC) and its receptor (CXCR3) on inducing the formation of vasculogenic mimicry in adenoid cystic carcinoma. Methods：24 blocks of salivary adenoid cystic carcinoma pathological were observed by immunohistochemical method combined with clinical symptoms and endoscopic. The expression of I-TAC-CXCR3 in salivary adenoid cystic carcinoma and normal salivary gland tissues were detected. Vascular PAS and CD31 double staining methods were used to detect the formation of tissue mimicry.Results:The expression of I-TAC and CXCR3 in adenoid cystic carcinoma tissues was higher than that nearby tumor tissues (P<0.05).Neuroinvasive-nessofadenoidcysticcarcinoma(P< 0.05)ishigherthanthatofthenonmetastaticadenoidcysticcarcinoma.Vasculogenicmimicryexistsinneuroi-nvasivenessandnonmetastaticofadenoidcysticcarcinoma.Tissueswithandwithoutnervetransferexistangiogenesismimicry.However,inadenoidcysticcarcinomawithnervetransferinangiogenesis,theexpressionquantityofmimicrywasobviouslyhigherthanthatofnonerveinvasiongroupandnormalgroup. Conclusion: The high expressions of I - TAC and CXCR3 in adenoid cystic carcinoma tissue indicate that they might play a role in the pathogenesis of adenoid cystic carcinoma. The expressions of angiogenesis mimicry in adenoid cystic carcinoma with nerve transfer are high. Angiogenesis mimicry CXCR3 and the positive expressions of tissues were positively correlated (correlation coefficientr=0.718,P<0.01).Itispreliminarilyconcludedthatchemokinesandtheirreceptorsmaybeassociatedwiththenervetransferofadenoidcysticcarcinoma.

adenoid cystic carcinoma；the chemotactic factor and its receptor；vasculogenic mimicry; immunohistochemistry

庄桂婧(1989～)女，黑龙江绥化人，在读硕士研究生。

邱明(1964～)男，黑龙江大庆人，硕士，主任医师，硕士研究生导师。E-mail:zhuang.guimi@163.com。

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1008-0104(2017)01-0082-03

2016-01-05)