猪伪狂犬病净化案例

2017-03-30祖海涛张长莹王爱国

猪业科学 2017年2期

关键词：狂犬病毒株猪只

祖海涛，张长莹，王爱国

(勃林格殷格翰动物保健，上海 200120）

猪伪狂犬病净化案例

祖海涛，张长莹，王爱国

(勃林格殷格翰动物保健，上海 200120）

2011年以来我国的猪伪狂犬病（PR）发病率明显增加，多篇报道显示猪伪狂犬病毒（PRV）发生了变异，变异毒株致病力增强，同时市场上产生了很多对Bartha-K61毒株疫苗保护力质疑的声音。随着国家颁布《中长期动物疫病防治规划（2012-2020）》和各项鼓励政策的出台，以及养殖场自身竞争力和盈利能力需求的提升，猪伪狂犬病的净化已成为行业呼声。勃林格殷格翰自2014年底开始提出实施猪伪狂犬病净化项目，在一些种猪场探索净化道路，经过1年的实践和努力已卓见成效。下面就跟大家分享使用Bartha-K61毒株伪狂犬疫苗免疫结合系统方案实现猪场PR净化的成功案例。

1 猪场背景

华东某养猪集团，生产纯种杜洛克、长白、大白母猪。其中A、B、C场为集团自身选种繁育的核心场，母猪规模分别为600、1200、600头，单点式生产，全进全出，猪伪狂犬病均为阳性，E场为从国外引种的核心猪场，猪伪狂犬病为阴性。这4个猪场均使用某国产品牌猪伪狂犬基因缺失疫苗（Bartha-K61株）进行常规免疫，猪伪狂犬病免疫程序为：母猪普免4次/年；仔猪55日龄、90日龄分别免疫1次。

2 猪伪狂犬病的诊断

2.1 临床症状

3个猪场偶尔会出现产房仔猪腹泻，个别仔猪呕吐等表现，部分仔猪在出现临床症状后不久表现不同程度的神经症状，抽搐，划船样，逐渐出现间歇性转圈运动，一些仔猪叫声嘶哑，口吐白沫，很快死亡，发病猪只体温一般在41℃左右。

2.2 解剖病变

解剖发病猪只，可见在肝、脾等脏器表面有米粒大小的灰白色坏死点，喉头充血，扁桃体出现灰白色的坏死灶。出现神经症状的仔猪，可见脑膜肿胀，脑脊液增多。

2.3 PCR检测和基因测序

采取2头发病猪只的脑组织、扁桃体进行PCR检测，结果gE和gB基因片段扩增结果均呈阳性。将分离到的毒株命名为SHX-2015，分别将gE和gB序列测定结果在GenBank上与相关序列比对，在NCBI基因库GenBank上查找了经典毒株和中国近几年PRV变异毒株的gE/gB序列，并绘制遗传进化树，gE基因序列对比结果显示检测到的毒株与JS-2012毒株（上海兽医研究所童光志研究员分离的PRV变异强毒株）亲缘关系最近；gB基因序列对比结果显示检测到的毒株与TJ株（哈尔滨兽医研究所仇华吉研究员分离的PRV变异强毒株）亲缘关系最近。

图1 产房仔猪神经症状

图2 产房仔猪腹泻

图3 扁桃体白色坏死灶

图4 肝脏表面白色坏死点

图5 脑脊液增多，脑膜肿胀

表1 被检毒株与国内流行毒株同源性比较%

3 血清学检测结果

根据各猪场的猪伪狂犬病毒gE抗体检测结果，计算每个猪场各阶段猪只gE抗体阳性率分布情况。3个猪场公猪、后备母猪及经产母猪的野毒阳性率均高于60%，有的甚至达到100%，生长育肥猪在22周龄时，猪伪狂犬野毒阳性率也高达100%，在这3个猪场中，C场的gE抗体阳性率最高，A、B场gE抗体阳性率相对稍低。

根据A、B、C3个猪场猪只临床表现、解剖病变、gE抗体检测及病毒基因序列分析结果，结合这几年伪狂犬病毒变异毒株的流行特点等综合分析，可以判断这3个猪场感染的伪狂犬病毒均是目前主要流行的PRV变异毒株。在发病猪场实施净化之前，一直在使用某国产品牌猪伪狂犬病疫苗进行免疫，但是从血清学结果看来猪场的PRV野毒阳性率依然很高，防控压力很大。

图6 gE基因序列进化树分析

4 A、B场猪伪狂犬病的控制

4.1 首次调整免疫程序和生产管理措施

4.1.1 更换疫苗并调整免疫程序

根据A、B两场的临床表现和猪场gE抗体检测的情况对猪伪狂犬病疫苗及其免疫程序做如下调整：所有猪伪狂犬病疫苗均更换为勃林格公司的猪伪狂犬病疫苗。更换疫苗时，所有公猪、母猪普免1头份，1个月后加强免疫一次，以后每3个月普免一次，每次免疫的剂量均为1头份；新生仔猪在出生后的3 d内滴鼻免疫1头份，5周龄、9周龄肌肉注射免疫各1头份。其他疫苗的免疫程序不做调整。每个季度对猪群作一次抗体检测，并根据检测结果及时调整免疫程序。

4.1.2 生产管理和生物安全措施调整

在猪场的操作方面，要求猪场在做疫苗接种时，种猪一猪一针头，生长猪群一栏一针头，并要求专门技术人员对猪只保定后再接种疫苗。每个季度对全场做一次彻底的灭鼠。

同时对猪场实行McRebel管理法则及其他生物安全措施：

1)产房严格限制寄养，如必须寄养时，需在仔猪出生后24～48 h内进行；

2)不同窝之间更换针头，在剪牙、阉割、断尾时严格消毒；

3)猪只生病后，不将病猪移至其他猪栏，如猪只疾病较为严重，对其实施安乐死；

4)每栋猪舍同时断奶、转栏，仔猪断奶后立刻转入保育舍，并对产房彻底清洗、消毒、空栏5 d以上；

5)严格的批次生产、全进全出、一对一转栏，禁止工具、人员、猪只之间的交叉；

6)严禁不同日龄猪只之间接触、混群；

7)严禁种猪和商品猪群接触，猪只销售时运猪车辆需要在指定地点清洗、消毒。

4.1.3 血清学监测及结果分析

图7 gB基因序列进化树分析

图8 A、B、C3个猪场猪伪狂犬病毒gE抗体阳性率

图9 A场gE、gB抗体检测结果

图10 B场gE、gB抗体检测结果

本次调整3个月后对A、B两场的猪群进行抗体检测，结果如图9、图10所示。

由于PRV感染后，猪群会终身带毒，种猪群更新速度有限，短时间内阳性率没有太大变化。从检测结果看，A场生长猪群gE抗体阳性率明显下降，临床上也比较稳定，说明A场PRV得到了较好的控制。B场猪群gE抗体阳性率下降不明显，而且可以发现，10周龄以前gE抗体逐渐下降，以后gE抗体又逐渐增加，从抗体的变化规律可以推断，B场在10周龄左右的短时间内可能有猪伪狂犬野毒感染。结合猪群的临床表现和猪场的生产管理，发现猪群在10周龄从保育舍转入育肥舍后，存在明显的发烧、咳嗽表现。同时B猪场育肥舍的湿度较大、育肥舍没有做到严格的全进全出，部分达到出售日龄的猪只因为体重较小继续留在育肥舍内饲养，同时育肥舍存在猪群混栏、调栏的现象。

4.2 第2次调整免疫程序和生产管理措施

4.2.1 调整免疫程序

通过首次调整后，A场的商品猪群PRV得到了较好控制，感染时间往后推移，为避免母源抗体对疫苗免疫的影响、提高疫苗对育肥猪群的保护，将A场生长猪群免疫程序调整为新生仔猪出生后3 d内滴鼻免疫，9周龄、12周龄肌肉注射免疫。B场免疫程序不变。

4.2.2 生产管理和生物安全措施调整

根据首次抗体检测的结果，以及猪场所存在的问题，在原有生产管理、生物安全的基础上，对B场作出如下调整：

1)育肥舍严格做到全进全出，并加强育肥舍的空栏、消毒、干燥工作；

2)保育舍转入育肥舍时，一对一转栏，严禁混栏、调栏；

3)加强病猪、弱猪的淘汰和管理工作；

4)猪群转入育肥舍前后1周内饲料中添加抗生素和电解多维进行保健。

4.2.3 血清学监测及结果分析

调整3个月后对A、B两场的猪群做抗体检测，检测结果如图11、图12。

此次检测结果可见，与前2次相比，A场10周龄以内的gE抗体阳性率有所下降，说明通过加强母猪的疫苗免疫、生产管理、生物安全管理等措施，并不断用阴性后备猪更换阳性母猪，半年以后，母猪群的伪狂犬野毒阳性率有所降低，母猪体内gE抗体滴度、通过母源抗体传递给仔猪的gE抗体滴度明显降低；生长育肥猪群的gE抗体阳性率也明显降低，并能够培育出阴性后备猪。B场检测结果显示，通过加强保育舍转入育肥舍期间的生产管理和生物安全，结合正确的疫苗免疫，22周龄的育肥猪群gE抗体阳性率从之前的100%下降至40%，临床上也趋于稳定，说明B场的猪伪狂犬病也得到有效控制，随后将B场的生长猪群免疫程序调整为新生仔猪出生后3 d内滴鼻免疫，9周龄、12周龄肌肉注射免疫。

5 C场猪伪狂犬病的净化

由于C场猪伪狂犬病阳性率较高，防控压力很大，同时设备老旧，生物安全方面限制性因素较多。为净化C场猪伪狂犬病并保留多年育种所取得的优秀品种，决定采用清群/重新建群的方案来净化猪伪狂犬病。具体方案包括以下步骤：

1)清空C场，将优秀种猪转入A、B场饲养，C场内进行彻底清洗、消毒，并对设备进行改造、维修、空栏，历时半年；

2)同时经过半年的调整，A、B场通过疫苗免疫、改善生产管理、生物安全等措施使猪伪狂犬病得到有效控制，临床稳定并能培育出阴性后备种猪；

3)从PRV野毒阳性A、B场及PRV野毒阴性的E场内挑选13～20周龄伪狂犬阴性后备种猪进入C场，隔离饲养，所有后备种猪在转入C场前至少肌肉注射接种猪伪狂犬疫苗2次，待C场后备母猪数量达到标准（450头左右），停止引种，对C场封群，转为自繁自养；

4)对后备种猪进行系统筛查和淘汰：

①猪只转入C场2周后进行第1次检测，gE抗体阳性猪立即淘汰，阴性猪继续留在C场隔离饲养；②每次检测4周后，对该批次引入的所有猪只再次采血检测gE抗体；③如一批猪只，连续2次gE抗体检测均为阴性，并且做完所有疫苗的免疫程序，猪只结束隔离饲养，并入基础母猪群；④每一批猪转入C场后的第6周、第10周分别接种1次猪伪狂犬病疫苗；⑤C场正常生产后，每个季度全群检测母猪、公猪猪伪狂犬病gE抗体，并按照一定比例检测生长猪群，发现阳性种猪立刻淘汰。连续2次所有猪只的检测结果均为阴性，判断猪场为伪狂犬病野毒阴性，以后每个季度对猪群按照一定比例抽检gE抗体。

5)执行严格的生产管理和生物安全措施，定期对员工培训，提高员工的生物安全意识。

历时一年之后，C场实现了猪伪狂犬病野毒阴性的目标，并已投入正常生产。