配对相关同源框-1蛋白在胆囊癌组织中的表达及意义

白明辉，刘海潮

（郑州大学附属洛阳中心医院 肝胆疝外科二病区，河南 洛阳 471009）

胆囊癌（gallbladder carcinoma，GBC）是最常见的胆道系统恶性肿瘤，占胆道恶性肿瘤的80%～95%[1-2]，且在我国有增高的趋势[3]。其5年生存率＜5%[4]，平均中位生存期＜6个月[5]。主要原因是其早期诊断困难，手术切除率低，因此预后极差[6-7]。胆囊癌早期缺乏特异的症状及体征，而生物标志物能够客观的测量和评价生物过程、病理过程及治疗反应，因此人们对于胆囊癌的生物标志物进行了大量的研究，希望能为胆囊癌的早期诊断及治疗提供相应的帮助[8]。配对相关同源框-1蛋白（paired-related homeobox 1，Prrx-1）已被证实在多种恶性肿瘤中起着作用[9-10]。但目前鲜见有Prrx-1与胆囊癌关系的研究。本研究通过免疫组化的方法测定Prrx-1在胆囊癌中的表达，并探讨其与胆囊癌临床病理参数之间的关系。

1　资料与方法

1.1　一般材料

选取郑州大学附属洛阳中心医院病理科2010年10月—2015年12月存档的蜡块，经病理证实胆囊癌组45例，男20例，女25例；年龄32～84岁，平均56.7岁。Nevein分期：I期4例，II期6例，III期12例，IV期15例，V期8例。组织学类型分类：腺癌38例，鳞癌7例。据病理分级：高分化癌8例，中分化癌26例，低分化癌11例。所有入选的胆囊癌患者术前均未接受放疗、化疗及生物治疗等，均可以找到完整的临床病例资料。同时随机选取我院同期胆囊良性病变（慢性胆囊炎及胆囊腺瘤样息肉）35例作为对照组。兔抗人Prrx-1单克隆抗体购自美国Cell Signaling Technology公司，PBS缓冲液，S-P试剂盒，DAB显色试剂盒及抗原修复液均购自福州迈新生物技术开发有限公司。其他试剂及设备由郑州大学附属洛阳中心医院病理科及中心实验室提供。

1.2　免疫组化SP法及结果判定

将蜡块制成4 μm厚度的切片，常规脱蜡脱水，PBS洗涤5 min；3%H2O2阻断灭活内源性过氧化物酶，室温孵育30 min，PBS溶液洗涤3次；修复抗原，自然冷却至室温，PBS溶液洗涤3次；10%山羊血清封闭抗原，37 ℃孵育90 min；加入适量一抗（浓度1:100），4 ℃过夜，PBS洗涤洗涤3次；加生物素化二抗，37 ℃反应30 min，PBS洗涤3次；加入S-A-HRP工作液置于湿盒，37 ℃反应40 min，PBS洗涤3次；DAB显色，PBS洗涤3次，终止显色；苏木素染核1 min，PBS洗涤3次，封片。显微镜下阅片。每张切片随机取5个视野，每个视野计数200个细胞左右，在相同放大倍数（×400）及相同光强度等条件下由2名经验丰富的病理科医师阅片判定评分。参照方帆等[11]对Prrx1阳性表达结果进行判定。染色强度的评分标准为：不着色0分，淡黄色1分，棕黄色2分，黄褐色3分。显微镜下阳性细胞数所占百分比的评分标准：无阳性细胞0分，≤10%为1分，10%～50%为2分，50%～75%为3分，＞75%为4分。将染色强度分数和阳性细胞百分比的分数相乘的结果作为最后评分，其中≤2分为阴性，＞2分为阳性。

1.3　统计学处理

应用SPSS 17.0统计学软件进行分析。采用χ2检验分析计数资料，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结　果

2.1　Prrx-1在胆囊癌组织及胆囊良性病变组织中的表达

Prrx-1阳性颗粒为棕褐色，位于细胞核中（图1）。Prrx-1在胆囊癌组织中的表达比在胆囊良性病变中强。Prrx-1在45例胆囊癌组织中阳性表达率为55.6%（25/45），35例胆囊良性病变组织中Prrx-1的阳性率为5.7%（2/35），Prrx-1在胆囊癌组织中的表达明显高于胆囊良性病变组织，差异有统计学意义（χ2=21.87，P＜0.05）（表1）。

2.2　Prrx-1表达与胆囊癌临床病理指标的关系

胆囊癌Nevein分期I、II期Prrx-1阳性表达率20%（2/10），III、IV、V期Prrx-1阳性表达率65.7%（23/35）；两组差异有统计学意义（χ2=6.58，P＜0.05）。Prrx-1在中低分化癌中的阳性表达为64.9%（24/37），在高分化腺癌中的阳性表达为12.5%（1/8）；两组差异有统计学意义（χ2=7.31，P＜0.05）。而在胆囊癌患者的年龄、性别及胆囊癌组织学类型分组间差异无统计学意义（均P＞0.05）（表2）。

图1　免疫组化检测Prrx-1的表达（×400）　A：Prrx-1在胆囊癌组织中的阳性表达；B：Prrx-1在胆囊腺瘤样息肉组织中的阳性表达；C：Prrx-1在慢性胆囊炎组织中的阳性表达Figure 1　Immunohistochemical staining for Prrx-1 expression (×400)　A: Prrx-1 positive expression in gallbladder cancer tissue; B: Prrx-1 positive expression in tissue of gallbladder adenomatous polyps; C: Prrx-1 positive expression in tissue of chronic cholecystitis

表1　Prrx-1在胆囊癌组织及胆囊良性病变组织中的表达比较[n（%）,n=45]Table 1　Comparison of Prrx-1 expressions between gallbladder cancer tissues and gallbladder tissues with benign diseases [n (%),n=45]

表2　Prrx-1表达与胆囊癌临床病理指标的关系[n（%）]Table 2　Relations of Prrx-1 expression with clinicopathologic variables of gallbladder cancer [n (%)]

3　讨　论

研究[12]表明，Prrx-1是一种DNA相关的蛋白，其功能是转录共激活，通过增加血清反应因子的DNA结合活性转录活化Prrx-1通过调控内皮细胞分化进而参与肌腱蛋白-C表达与肺血管形成过程。Prrx-1作为转录因子可调控多种基因的表达[13]，在成人大脑中Prrx-1在成人神经干细胞的自我更新中起着重要的作用[14]。近年来关于Prrx-1与肿瘤关系的研究越来越被人们重视[15-18]。但Prrx-1与胆囊癌的研究国内外少见有报道。

本研究结果显示，Prrx-1在胆囊癌组织中阳性表达率为55.6%（25/45），高于在胆囊良性病变组织中的表达5.7%（2/35），差异有统计学意义。提示Prrx-1在胆囊癌的发生过程中起着一定的作用。Prrx-1在不同临床分期及不同病理分级中的表达差异显著，有统计学意义。提示Prrx-1可能与胆囊癌的恶性生物学行为有关，可能促进了胆囊癌的侵袭能力。范钰等[19]研究显示Prrx-1可促进胰腺癌细胞迁移和侵袭能力，其机制可能与促进上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）有关。因此，笔者推测Prrx-1可能促进EMT，进而促进了胆囊癌细胞的迁移和侵袭能力，导致了胆囊癌的发生，发展及侵袭转移等。通过本研究的观察，本研究发现Prrx-1的表达与胆囊癌的分化程度，临床分期等有关，因此其可以作为分析胆囊癌预后的重要生物学指标。Prrx-1是最近发现的EMT调节剂和诱导剂[20-22]。而研究[20-21,23-24]已经表明在人类肿瘤细胞中，如细胞发生EMT可以引起辐射抵抗，因此如果能阻断Prrx-1在胆囊癌中的表达就可以增强胆囊癌细胞对于放疗的敏感性，为胆囊癌的治疗提供新的思路。而Prrx-1在胆囊癌组织中的表达与胆囊癌患者的年龄，性别等无统计学意义。

综上所述，Prrx-1与胆囊癌的发生、发展密切相关。其具体作用机理有待进一步研究。

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