生防菌对白术根腐病菌的拮抗作用及盆栽防治效果

倪方方徐红梅宋腾蛟王博林徐建中袁小凤

1.浙江中医药大学生命科学学院 杭州 310053 2.浙江省中药研究所

生防菌对白术根腐病菌的拮抗作用及盆栽防治效果

倪方方1徐红梅1宋腾蛟1王博林1徐建中2袁小凤1

1.浙江中医药大学生命科学学院 杭州 310053 2.浙江省中药研究所

[目的]探究生防菌对白术根腐病菌的拮抗作用及盆栽防治效果，为新型、高效的生物杀菌剂的研发提供理论基础。[方法]从浙江磐安根腐病发病的白术中分离出根腐病致病菌尖孢镰刀菌，采用平板对峙法检测四株益生菌枯草芽孢杆菌、哈茨木霉菌、荧光假单胞菌和苏云金芽胞杆菌对尖孢镰刀菌的抑菌作用，同时测定菌株发酵滤液中细胞壁水解酶活性及吲哚乙酸含量，之后扫描电镜观察拮抗性代表菌株对病原菌菌丝生长及形态的影响；通过盆栽试验，将枯草芽孢杆菌和哈茨木霉菌配置成1.0×108CFU·mL-1的菌液加入到白术根部，对白术干重、鲜重、株高及存活率进行统计。[结果]经平板对峙实验，细胞壁水解酶活性及吲哚乙酸含量检测，4种菌均可对白术根腐病病原菌产生抑制作用，其中枯草芽孢杆菌和哈茨木霉菌综合抑菌效果较好，平板对峙抑菌率达50%以上，发酵滤液中蛋白酶、纤维素酶、几丁质酶活性及吲哚乙酸含量较高；扫描电镜观察发现，枯草芽孢杆菌和哈茨木霉菌均使致病菌的菌丝生长及形态产生了影响，菌丝体发生相互缠绕、扭曲变形、褶皱、折叠、断裂、干瘪，甚至菌丝表面炸开溶解等现象；盆栽实验表明，枯草芽孢杆菌和哈茨木霉菌均可有效促进白术生长，降低发病率，提高生物量。[结论]枯草芽孢杆菌和哈茨木霉菌在室内拮抗及盆栽防治均表现出较好的抑菌防治效果，这为白术根腐病的生物防治及菌种资源的应用奠定了理论基础。

白术；根腐病；枯草芽孢杆菌；哈茨木霉菌；盆栽实验；平板对峙；扫描电镜

白术是菊科植物白术（Atractylodes macrocephala）的根茎，其性温，味苦甘，具有健脾益气、燥湿利水、止汗安胎等作用，为我国常规大宗药材，在中药市场上占有很大的份额[1]。然而，白术忌连作，即使在正常管理条件下，也容易得根腐病，发病率极高且呈逐年加重的趋势，严重时甚至绝苗绝收[2]。白术根腐病为土传病害，主要致病菌为尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）[3]。由于尖孢镰刀菌属于适应性广的土壤习居性真菌，寄存在土壤及空气中10年以上仍表现出很强的致病性，一般的化学药剂也难于防治，而且还容易引起病菌产生抗药性，造成农残污染[4]。目前，对白术根腐病防治方法主要侧重于轮作换茬及喷洒农药，但却存在土地资源有限和污染生态环境等缺点。因此，寻找安全高效的防治方法对提高白术产量和质量减少病害具有重要意义。

研究表明，土壤微生物对维持土壤健康和抑制植物病害的生物过程负主要责任[5]。一般来说，连作后土壤微生物区系会发生改变，微生物群落结构失衡，有益菌受到抑制，有害菌大量发生，从而导致土传病害猖獗[6-7]。许多证据表明植物根部病害的生物防治可通过调控根际微生物区系，添加益生菌来抑制根部病原菌[8-9]。在生防菌防治植物病害的研究中，有学者发现，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、哈茨木霉菌（Trichoderma harzianum）、荧光假单胞菌（Psdeuomnoda fluoerncnet）和苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis）在生物防治工作中占有重要地位，对多种植物土传病害都具有防治效果[10-15]，这些生防菌对白术根腐病的防治作用鲜有报道，鉴于此，本文拟从根腐病发病的白术中分离、筛选、鉴定病原菌，检测枯草芽孢杆菌、哈茨木霉菌、荧光假单胞菌及苏云金芽孢杆菌对病原菌的抑制效果，并通过盆栽实验初步探测其防治效果，从而为白术根腐病的防治及其拮抗性益生菌资源的开发和利用提供科学依据。

1 材料

1.1 菌株及白术 根腐病致病菌尖孢镰刀菌（F. oxysporum）从发病的白术根部分离培养获得；枯草芽孢杆菌（B.subtilis）、荧光假单胞菌（P.fluorescens）、哈茨木霉菌（T.harzianum）、苏云金芽孢杆菌（B.thuringiensis）均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，菌种编号分别为CICC10275、CICC21620、CICC41290和CICC10061。健康饱满的白术种茎购买自浙江省金华市磐安县新渥镇，由浙江省中药研究所鉴定为菊科苍术属白术(A.macrocephala)。

1.2 培养条件 尖孢镰刀菌和哈茨木霉菌均活化于PDA培养基中，枯草芽孢杆菌、荧光假单胞菌和苏云金芽孢杆菌活化于NA培养基。PDB培养基：200g去皮土豆切块煮沸30min，4层纱布过滤后用蒸馏水补足1000mL，加入葡萄糖20g。PDA培养基：PDB培养基中加入琼脂15g。NA培养基：牛肉膏3g，蛋白胨5g，琼脂15g，水1000mL，PH7.2～7.4。

1.3 主要试剂 Protease Elisa Kit试剂盒（SBJ-P242）、Cellulase Elisa Kit试剂盒（SBJ-P243）、Chitinase Elisa Kit试剂盒（SBJ-P244）均由森贝伽（南京）生物科技有限公司生产；Ezup柱式真菌基因组DNA提取试剂盒(B518259-0050)由生工生物工程有限公司生产。

2 方法

2.1 白术根腐病致病菌的分离纯化及鉴定 采用组织分离法[16]及平板划线分离法[17]对白术根腐病致病菌进行分离纯化，纯化出单菌落后，置于PDA培养基中，28℃培养。采用提取真菌基因组 DNA，并以之为模板，进行18S rDNA的扩增。所用引物、扩增体系、反应条件见参考文献[18]，扩增产物送上海生物工程技术有限公司测序，根据测序结果，将扩增得到的序列在GenBank中进行 BLAST分析，与GenBank数据库进行同源序列比对。

2.2 生防菌的抑菌作用检测 采用平板对峙培养法测定四种生防菌对病原菌菌丝生长的抑制作用。分别将生防菌与致病菌活化之后，用接种环挑取致病菌菌丝于PDA平板中央，距致病菌边缘3cm处接种生防菌，倒置后放入28℃恒温培养箱中培养，同时以不添加益生菌作为对照，7d后观察有无抑菌圈，计算抑菌率。

抑菌率（%）=（对照组致病菌菌落直径－处理组致病菌菌落直径）/对照组致病菌菌落直径×100%

2.3 生防菌代谢物中细胞壁水解酶活性及吲哚乙酸含量的检测 采用摇瓶发酵培养法制作四种菌株的发酵液，哈茨木霉菌发酵液的制备参照Zhang等[19]的方法，枯草芽孢杆菌、荧光假单胞菌和苏云金芽胞杆菌发酵液的制备均参照Solanki等[20]方法。即将菌株接种于PDB或NA培养基中，恒温震荡（180r/min）培养，发酵液于10000r/min离心10min，收集上清液经微孔过滤器（滤膜孔径0.22μm）过滤，制得无菌发酵液，用ELISA酶活试剂盒，采用双抗体夹心法测定发酵液中蛋白酶、纤维素酶及几丁质酶活性，具体参照说明书；参照吴翔等[21]的方法，检测生防菌代谢物中吲哚乙酸活性。

2.4 扫描电镜观察生防菌对致病菌菌丝生长及形态的影响 利用钱天乐等[22]的方法进行扫描电镜片的制作，略做改进。将生防菌与致病菌对峙培养在含2%水琼脂的盖玻片上，菌种成熟后，取下盖玻片，在4℃冰箱中用2.5%戊二醛固定1d，PBS溶液洗3次，每次10min，再浸泡于1%饿酸溶液中，4℃下2h左右，用50%、75%、90%、100%系列乙醇各脱水10 min，之后分别50%、75%、90%、100%叔丁醇梯度除酒精10min。临界点干燥，真空镀金。制好的扫描电镜标本在场发射扫描电镜（日立SU-8010）下观察并记录结果。

2.5 盆栽实验设计 2016年3月7日将购买的健康白术种茎种到盆中，1周后白术陆续发芽，专人管理，给予水分及光照。盆栽实验于5月22日正式进行，此时白术的幼苗已长出四到五片真叶。实验共分为6个处理组，分别为正常对照组（不添加任何菌）、枯草芽孢杆菌组（只添加枯草芽孢杆菌）、哈茨木霉菌组（只添加哈茨木霉菌）、枯草芽孢杆菌+尖孢镰刀菌组（先加枯草芽孢杆菌，2d后加尖孢镰刀菌）、哈茨木霉菌+尖孢镰刀菌组（先加哈茨木霉菌，2d之后加尖孢镰刀菌）、根腐病组（往健康的白术根部添加致病菌尖孢镰刀菌）。将10mL1.0×108CFU·mL-1的菌液加入到白术根部。每组11株，每个处理组3个重复。2月之后，统计每个处理组白术植株株高、存活率；采挖之后以电子天平秤量每组地上及地下部分鲜重；之后将白术地上及地下部分放入托盘，以65℃烘干至恒重，电子天平称量干重。

3 结果

3.1 白术根腐病致病菌的分离和鉴定 从患根腐病的白术根部分离纯化出来的致病菌，提取其DNA，利用尖孢镰刀菌特异性引物进行扩增，PCR产物通过凝胶电泳分析得到320bp左右的片段（图1A），上述结果表明：成功扩增出致病菌的核酸片段。获得其18SrDNA核酸序列（图1B），NCBI上进行BLAST同源性比对，与登录号为Ku382585.1的F.oxysporum isolate AS220的18SrDNA同源性高达99%，因此，鉴定致病菌为尖孢镰刀菌。

图1 以致病菌DNA为模板的PCR扩增结果及致病菌的基因序列Fig.1 The results of the PCR amplification of the pathogenic bacteria DNA and its DNA sequence

3.2 生防菌对致病菌的抑制作用 平板对峙实验结果如图2所示。在PDA平板上培养7d后，枯草芽孢杆菌与哈茨木霉菌均对尖孢镰刀菌的生长产生了明显的抑制作用。未接种益生菌时，尖孢镰刀菌呈圆形生长，菌落棉白色（图2A1）与平板接触面可见红色甚至紫红色菌丝（图2A2）；接种哈茨木霉菌后，其菌落形态变为梭形，且菌落面积明显缩小，两菌的接触部位出现了抑菌带（图2C），抑菌率达到了62.4%（表1）；接种枯草芽孢杆菌后，尖孢镰刀菌生长受到了明显的抑制，菌落形态为不规则形状，与枯草芽孢杆菌相接触部位出现了明显的抑菌圈（图2B），抑菌率达到了52.3%（表1）；而荧光假单胞菌（图2D）和苏云金芽胞杆菌（图2E）对尖孢镰刀菌的抑菌效果并不明显，且并未看到抑菌圈的出现，测量菌落大小之后发现，两者的抑菌率分别为20.3%及15.7%，明显低于枯草芽孢杆菌和哈茨木霉菌。由此可知，4种生防菌均可对白术根腐病致病菌尖孢镰刀菌的生长产生抑制作用，而枯草芽孢杆菌和哈茨木霉菌的抑菌效果较明显，尤其是哈茨木霉菌与病原菌对峙培养后，能迅速繁殖，有效抑制病原菌的生长。

图2 4种生防菌与尖孢镰刀菌的对峙培养Fig 2 Confronting incubation of four kinds of probiotics on Fusarium oxysporum

表1 4种生防菌对白术根腐病菌的抑菌效果（±s）Tab.1 Inhibition effect of four kinds of probiotics against F.oxysporum（±s）

表1 4种生防菌对白术根腐病菌的抑菌效果（±s）Tab.1 Inhibition effect of four kinds of probiotics against F.oxysporum（±s）

注：每个样本有3个重复。同一列中小写字母代表不同生防菌对尖孢镰刀菌抑菌率的差异性，不同字母代表组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。Note:Three replications were used for each treatment.The lower case letters in the same column represent the difference between different bio-control bacteria of F.oxysporum;There were significant differences between the different letters(P＜0.05).

菌株名称 处理菌落直径（cm） 空白菌落直径（cm） 抑菌率（%）枯草芽孢杆菌哈茨木霉菌荧光假单胞菌苏云金芽胞杆菌3.13±0.15 2.47±0.06 5.23±0.15 5.53±0.05 6.57±0.12 6.65±0.05 6.65±0.05 6.62±0.08 52.30±0.02b62.42±0.01a20.31±0.02c15.73±0.01d

3.3 生防菌代谢物中细胞壁水解酶及生长素活性取4株菌株的无菌发酵液检测其蛋白酶、纤维素酶、几丁质酶活性及吲哚乙酸的含量。由表2可知，4株菌株均具有产生蛋白酶、纤维素酶、几丁质酶及吲哚乙酸的能力，枯草芽孢杆菌与哈茨木霉菌中纤维素酶、几丁质酶活性及吲哚乙酸含量均高于荧光假单胞菌与苏云金芽胞杆菌，其中，蛋白酶、几丁质酶活性及吲哚乙酸含量在枯草芽孢杆菌中最高，而枯草芽孢杆菌与哈茨木霉菌中几丁质酶活性及吲哚乙酸含量差异无统计学意义（P＞0.05）；纤维素酶在哈茨木霉菌中活性最高，分别是枯草芽孢杆菌、荧光假单胞菌的1.3倍和2.4倍，甚至达到了苏云金芽胞杆菌的4.7倍。蛋白酶、纤维素酶及几丁质酶是真菌细胞壁的主要水解酶，因此，研究组推测枯草芽孢杆菌、哈茨木霉菌、荧光假单胞菌与苏云金芽胞杆菌均可通过分泌细胞壁水解酶而对致病菌产生拮抗作用；吲哚乙酸是促进植物生长的有效生长激素，4株益生菌均具有促生长的潜能。综合分析平板对峙结果及代谢物水解酶等物质活性，研究组筛选出枯草芽孢杆菌和哈茨木霉菌进行深入研究。

3.4 生防菌对致病菌菌丝生长及形态的影响 扫描电镜观察平板对峙实验中枯草芽孢杆菌和哈茨木霉菌对致病菌菌丝生长及形态的影响。由图3可知，枯草芽孢杆菌和哈茨木霉菌对尖孢镰刀菌菌丝的生长均产生了抑制，正常生长的尖孢镰刀菌菌丝表面光滑，长直状，无干瘪，褶皱等现象（图3A），偶见不正常状态的菌丝，但受拮抗菌抑制的尖孢镰刀菌菌丝出现了畸变现象，主要表现为菌丝体相互缠绕、穿插、紧贴、扭曲变形、褶皱、折叠（图3B）、粗细不均、断裂、干瘪（图3C），甚至出现了菌丝表面炸开溶解（图3B）等现象。尖孢镰刀菌菌丝的粗细不均、断裂及畸形等变化，说明生防菌可能产生了某些溶菌物质消解了菌丝体，或者是次级代谢物中的活性物质如细胞壁水解酶等对病原菌的孢子壁产生了溶解作用，致使孢子壁穿孔，从而产生畸变。

表2 4种生防菌代谢物中细胞壁水解酶酶活性（±s）Tab.2 The activity of cell wall hydrolase and IAA in probiotics metabolite（±s）

表2 4种生防菌代谢物中细胞壁水解酶酶活性（±s）Tab.2 The activity of cell wall hydrolase and IAA in probiotics metabolite（±s）

注：每个样本有3个重复，同一列中小写字母代表不同生防菌代谢物的差异性，不同字母代表组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。Note:Three replications were used for each treatment.The lower case letters in the same column represented the difference of metabolites between different bio-control bacteria;There were significant differences between the different letters(P＜0.05).

菌株名称 蛋白酶（mU·L-1） 纤维素酶(IU·L-1) 几丁质酶(IU·L-1) 吲哚乙酸(mg·L-1)枯草芽孢杆菌哈茨木霉菌荧光假单胞菌苏云金芽胞杆菌30.47±0.20a15.93±0.05d26.73±0.05b22.83±0.05c2.16±0.06b2.67±0.01a0.57±0.01d1.13±0.01c8.03±0.58a7.86±0.29a5.81±0.25b6.03±0.17b3.60±0.18a3.44±0.19a1.74±0.21c2.67±0.21b

图3 扫描电镜观察枯草芽孢杆菌与哈茨木霉菌对尖孢镰刀菌菌丝生长及形态的影响Fig.3 Effect of B.subtilis and T.harzianum on the morphology of hyphae of F.oxysporum under scanning electron microscope

3.5 不同处理对白术生长的影响 由表3可知，在健康白术植株土壤中仅仅添加生防菌枯草芽孢杆菌或哈茨木霉菌，白术鲜重、干重、株高及存活率均比健康对照组明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05），表明在正常情况下，在健康白术中添加益生菌能促进白术的生长。相反，仅仅添加致病菌尖孢镰刀菌则明显导致白术的鲜重、干重、株高及存活率下降，患病率大大提高，差异有统计学意义(P＜0.05)，其存活率仅有53%，植株也变得矮小，生物量和产量下降，严重影响白术的生长。此外，与致病菌组相比，先后在白术根部土壤中添加生防菌和致病菌后，白术的存活率明显提高，差异有统计学意义(P＜0.05)，但低于单独添加生防菌的水平，而与健康组差异无统计学意义(P＞0.05)，表明这2种菌均能抑制尖孢镰刀菌，减少白术患病率，提高植株存活率。由此可知，无论枯草芽孢杆菌还是哈茨木霉菌均可有效增加白术植株干重、鲜重、株高及存活率，提高生物量，而枯草芽孢杆菌的效果最好。

4 讨论

土传病害被认为是作物产生连作障碍的主要原因，它能显著抑制植株生长并最终降低作物产量和品质。近年来，由于较好的抗真菌特性，枯草芽孢杆菌、哈茨木霉菌已成为植物真菌病害防治中具有较大应用潜力的菌株[23-24]。本实验中，枯草芽孢杆菌室内拮抗抑菌率为52.3%，与病原菌对峙培养之后，可竞争尖孢镰刀菌的营养与空间位点，抑制尖孢镰刀菌的生长，扫描电镜发现，枯草芽孢杆菌吸附在尖孢镰刀菌上，使其菌丝出现了粗细不均、断裂、干瘪等变化，可能是枯草芽孢杆菌通过吸附于致病菌菌丝体，并随着菌丝生长而生长，产生的溶菌物质消解了尖孢镰刀菌的菌丝体，使菌丝发生断裂；或者是产生的次生代谢产物对病原菌孢子的细胞壁产生溶解作用，致使细胞壁产生穿孔、畸形等现象，这属于溶菌作用，与黄曦许[25]等人的研究结果相似。哈茨木霉菌平板对峙抑菌率为62.4%，与病原菌对峙培养后，能迅速占领空间，吸收营养，占领病原菌的侵位点，从而有效的与病原菌形成营养与空间上的竞争，抑制尖孢镰刀菌的生长；扫描电镜发现，哈茨木霉菌以缠绕、穿插、紧贴等方式寄生于尖孢镰刀菌上，使其菌丝体产生扭曲变形、褶皱、折叠等变化，这属于重寄生作用，与高智谋[26]等人的结果相似。

表3 不同处理对白术生长的影响（±s）Tab.3 The effect of different bacteria or fungi on the growth and yield of A.macrocephala（±s）

表3 不同处理对白术生长的影响（±s）Tab.3 The effect of different bacteria or fungi on the growth and yield of A.macrocephala（±s）

注：CK，健康对照组；BS，枯草芽孢杆菌组；TH，哈茨木霉菌组；FO，尖孢镰刀菌组；BS+FO，枯草芽孢杆菌+尖孢镰刀菌组；TH+FO，哈茨木霉菌+尖孢镰刀菌组。每个样本有3个重复，同一列中小写字母代表不同处理组之间的差异性，不同字母代表组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。Note:CK,control group;BS:B.subtilis group;TH,T.harzianum group;FO,F.oxysporum group;BS+FO,B.subtilis and F.oxysporum group;TH+FO,T. harzianum+F.oxysporum group.Three replications were used for each treatment,the lower case letters in the same column represent the difference between different groups;There were significant differences between the different letters(P＜0.05).

组别 鲜重（g） 干重（g） 株高(cm) 存活率（%）生物量 药材产量 生物量 药材产量CK BS TH FO BS+FO TH+FO 17.56±0.12e27.88±0.17a23.17±0.36c14.44±0.59f24.73±0.24b20.70±0.10d7.96±0.19e13.28±0.11a10.61±0.29c6.36±0.36f12.38±0.03b8.97±0.01d5.94±0.29e10.83±0.01a7.52±0.68c4.42±0.19f8.90±0.23b6.73±0.03d2.27±0.17d4.11±0.08a2.77±0.01c1.75±0.04e3.16±0.11b2.34±0.12d25.92±0.80d38.32±1.53a31.32±1.53b22.67±1.15e32.33±0.58b28.84±0.73c82.00±0.02c93.33±0.02a92.33±0.01ab53.67±0.04d90.00±0.02b85.33±0.03c

此外，枯草芽孢杆菌和哈茨木霉菌还可产生多种抗菌活性物质。枯草芽孢肝菌可产生枯草菌素、伊枯草菌素、纤维素酶、β-葡聚糖酶等十多种酶[27]；哈茨木霉菌可产生小分子的抗菌肽类物质及丁质酶、纤维素酶、木聚糖酶和蛋白酶等细胞壁水解酶，这类抗菌肽可单独或与细胞壁降解酶协同作用抑制病原真菌的生长[28-29]。细胞壁溶解酶又称溶壁酶，是一种复合型水解酶，能水解真菌细胞壁，抑制病原菌生长,从而达到抗菌防病的目的，本研究发现，枯草芽孢杆菌和哈茨木霉菌代谢物中均含有蛋白酶、纤维素酶、几丁质酶3种活性成分，这说明两种菌可通过拮抗作用产生细胞壁水解酶等溶菌物质抑制病原菌生长或直接杀灭病原菌；吲哚乙酸是促进植物生长的有效生长激素，盆栽实验中，枯草芽孢杆菌和哈茨木霉菌均可有效增加白术植株干重、鲜重、株高及存活率，提高生物量，促生作用较为明显。

总之，枯草芽孢杆菌和哈茨木霉菌在室内拮抗及盆栽防治均表现出了较好的抑菌防治效果，这可能是通过拮抗作用、竞争作用、溶菌作用、重寄生等作用来有效抑制尖孢镰刀菌的生长，而白术植株干重、鲜重、株高及存活率的增加，可能和其产生的植物生长素吲哚乙酸有关。在接下来的实验中，研究组将选择枯草芽孢杆菌和哈茨木霉菌进行田间防治试验，近一步的探讨其对白术根腐病的防治效果，为白术根腐病防治机制的探索及微生物有效菌剂的开发提供理论依据。

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Bicontrol Potention of Bacillus Subtilis and Trichoderma Harzianum against Root Rot in Atractylides Macrocephala

NI Fangfang,XU Hongmei, SONG Tengjiao,et al College of Science Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou(310053)，China

[Objective]To control Fusarium oxysporum efficiently that is the pathogenic bacterium of the root rot of Atractylodes macrocephala,and for the development of new high efficient biological fungicide.[Method]We isolated the F.oxysporum that was the pathogenic bacterium of the root rot from the infected A.macrocephala at Zhejiang Pan'an.The inhibition effect of the four strain Bacillus subtilis,Trichoderma harzianum,Psdeuomnoda fluoerncnet and Bacillus thuringiensis was tested by the plate confrontation method and the activity of cell wall hydrolases and indole acetic acid content in strain fermentation filtrate.After this,we tested hypha growth and morphology of pathogenic bacteria in plate confrontation method using the scanning electron microscope.In pot expriement,we added the bacteria liquid of B.subtilis and T.harzianum in concentration of 1.0×108CFU·mL-1to the rot of the A. macrocephala and tested its dry weight,fresh weight,plant height and the survival statistics.[Results]It showed that four kinds of strains all can control F. oxysporum efficiently that was the pathogenic bacterium of the root rot of A.macrocephala.The Comprehensive antibacterial effect of B.subtilis and T. harzianum was better than others.The inhibitory effect of these two strains against mycelium growth of the pathogenic fungi was both above 50%.The activity of cell wall hydrolases and indole acetic acid content in strain fermentation filtrate were higher than the others;the morphology changed of pathogenic bacteria like intertwine,Twisted,hypha fracture dry and even hyphae blasted surface solvation were found under canning electron microscope;Pot experiment showed that B.subtilis and T.harzianum can effectively promote the growth of A.macrocephala,reduce morbidity and improve the biomass. [Conclusion]B.subtilis and T.harzianum both showed good antibacterial control effect either indoor or pot experiement,so our research laid the theoretical foundation for the biological control of A.macrocephala root rot and the application of microorganism resources.

A.macrocephala;root rot;B.subtilis;T.harzianum;scanning pot experiement;plate confrontation method;electron microscope

R282.71

A

1005-5509（2017）03-0179-07

10.16466/j.issn1005-5509.2017.03.002

2016-12-07）

浙江省自然科学基金项目（LY16H280006）；中医药行业科研专项项目(201507002-1-06)；浙江省重中之重一级学科-中药学开放基金课题(Yao2016006)

Fund projects: Program supported by Zhejiang Provincial Natural Science Foundation(LY16H280006); Specialized Research Fund for Chinese medicine industry(201507002-1-06);Open Fund of Zhejiang Provincial Top Key Discipline of Pharmacology(Yao2016006)

袁小凤，E-mail：sjyxf.ok@163.com