艾叶烟熏对小鼠呼吸道影响的组织学观察

杜娟，李慧侠，刘钟杰，王帅玉，林珈好，范开

(1．开封市畜牧工作站，河南开封475000;2．中国农业大学动物医学院，北京海淀100193)

艾叶烟熏对小鼠呼吸道影响的组织学观察

杜娟1，李慧侠2，刘钟杰2，王帅玉2，林珈好2，范开2

(1．开封市畜牧工作站，河南开封475000;2．中国农业大学动物医学院，北京海淀100193)

为研究艾叶烟熏对正常呼吸道的组织学影响，将54只健康SPF昆明系小鼠分为对照组、2 g艾叶/m3组和4 g艾叶/m3组，艾叶烟熏疗程，分为艾叶烟熏1次、1周和2周。结果可见:艾叶烟熏能造成小鼠肺脏和气管的水肿;2 g艾叶/ m3组艾叶烟熏后气管黏膜上皮细胞脱落数量出现先升后低的变化，艾叶烟熏2周试验组气管黏膜上皮细胞脱落数低于对照组但并无显著差异;艾叶烟熏2周试验组鼻黏膜上皮细胞间杯状细胞数量与对照组相比较具有显著性增加。结果表明，艾叶烟熏能造成小鼠肺脏和气管的水肿，但没有进一步的组织损伤。适宜浓度的艾叶烟熏能加强呼吸道黏膜的完整性，并能增加杯状细胞的数量，增加呼吸道黏液分泌。

艾叶烟熏;小鼠;呼吸道黏膜上皮;杯状细胞;

在对多种动物的不同呼吸道传染病的治疗中，我们发现艾叶烟熏疗法常能较好地控制喷嚏、流涕、咳嗽症状，在一定程度上阻断疾病的传播趋势，而这些病例中的病原微生物并不确定，由此推测，艾叶烟熏治疗可能主要是作用于动物机体，改变呼吸道的防御状态。本试验观察艾叶烟熏后小鼠呼吸道的组织学变化，探讨艾叶烟熏的治疗机理。

1 材料与方法

1．1 实验动物4～6周龄的雌性SPF昆明系小鼠54只，饲养于隔离器内。

1．2 艾叶烟熏条件艾叶(Artemisia argyi Levl．et Vant．)，购自安国中药市场，当年产。艾叶烟熏疗程，分为艾叶烟熏1次、1周和2周。艾叶烟熏在隔离器(1．5 m×0．75 m×1 m)中进行，以2 g艾叶/m3为低剂量，4 g艾叶/m3为高剂量，设无艾叶烟熏对照组。2种剂量，3种疗程。

每日9时、15时各艾叶烟熏1次。每次操作，先关闭艾叶烟熏隔离器的通风阀门，点燃称量好的艾叶。艾叶燃烧完全后开始计时，1 h后恢复通风。无艾叶烟熏对照组同步给予开关通风操作。

1．3 小鼠组织切片制作、染色及分析按各组的试验周期，结束后处死小鼠，采取鼻腔、气管和肺。固定好的组织制作石蜡切片进行多种染色。H．E．染色分析艾叶烟熏对肺脏及气管、鼻黏膜的组织结构影响;并于40倍物镜下计数100个气管黏膜上皮细胞中脱落细胞的个数，分析艾叶烟熏对气管上皮黏膜完整性影响。甲苯胺蓝染色观察、统计气管组织黏膜下层肥大细胞数量变化［1－2］。PAS染色:于40倍物镜下计数100个鼻黏膜上皮细胞中杯状细胞的数量，并分类计数其中性分泌和酸性分泌细胞的数量［3－4］。

2 试验结果

2．1 艾叶烟熏对鼻腔黏膜下层肥大细胞数量影响于物镜20倍镜下观察并统计甲苯胺蓝染色切片中气管内黏膜下层肥大细胞数(见封三彩版图1)。经t检验各组未见显著差异(见表1)。

表1 上皮黏膜下层肥大细胞数量比较

2．2 H．E．染色观察艾叶烟熏对肺脏、气管和鼻黏膜组织结构影响小鼠肺脏组织切片可见，首次艾叶烟熏后，低剂量单次艾叶烟熏无明显病理变化(封三彩版图2)，高剂量静脉血管周围轻微水肿(封三彩版图3)。艾叶烟熏1周后，低剂量组与对照组相比较表现出轻微水肿，而高剂量组水肿加剧，两组肺脏其他结构无明显病理变化。艾叶烟熏2周后，低剂量组和高剂量组肺脏血管周围水肿。

小鼠气管组织切片可见，首次艾叶烟熏后，有少量黏膜上皮细胞与基底膜脱落。艾叶烟熏1周后，而对照组和低剂量组无显著病理变化(封三彩版图4)，高剂量组气管“C”环接口处黏膜褶皱结构局部消失，黏膜下层结缔组织水肿(封三彩版图5);艾叶烟熏2周后，高、低剂量组均见气管黏膜下层局部水肿，软骨“C”环接口处的褶皱状上皮黏膜结构消失，且高浓度治疗组局部上皮黏膜脱落(封三彩版图6)。

小鼠鼻黏膜组织切片中，各组结构均无明显变化(封三彩版图7)。艾叶烟熏2周后，高、低剂量组杯状细胞数量均增多。

2．3 艾叶烟熏对小鼠气管上皮完整性影响经单因素多重t检验可见:同一剂量不同时间点比较时:低剂量组内，2周时细胞脱落数量显著低于单次刺激后(P＜0．05)，其他各数据间差异不显著，结果见表2。

相同时间点不同剂量间比较时:单次艾叶烟熏时，低剂量和高剂量组细胞脱落数量均高于对照组，并且低剂量组与对照组差异显著(P＜0．05)，其他各数据间差异不显著，结果见表2。

以各组上皮细胞脱落的均值变化趋势看，随着艾叶烟熏时间延长，低剂量组逐渐降低，高剂量组先降低后升高;艾叶烟熏2周时低剂量组脱落细胞数量较低于对照组，高剂量组细胞脱落数量高于对照组，但未达显著差异。

表2 气管黏膜上皮细胞脱落数比较(n=6)

2．4 艾叶烟熏对鼻腔黏膜内杯状细胞数量及黏液影响经单因素多重t检验可见:单次烟熏，杯状细胞数随艾叶烟熏浓度增加而增加，并且高剂量组显著高于对照组(P＜0．05);1周时，各组与对照组无显著差异。2周时结果与单次烟熏组相似，高剂量组显著高于对照组(P＜0．05)。杯状细胞酸性分泌与中性分泌(见封三彩版图8)，在各时段、各组间无显著差异，未见规律性变化(见表3)。

表3 上皮细胞间杯状细胞数量及黏液酸碱性比较(n=6)

3 讨论

试验结果表明，首次艾叶烟熏后，高低浓度艾烟对小鼠呼吸道黏膜均有刺激损伤，造成上皮细胞死亡脱落，但是随着艾叶烟熏时间延长，低剂量艾叶烟熏的小鼠可达完全修复。且低剂量艾叶烟熏2周后，其黏膜完整性优于对照组，说明了艾叶烟熏在适当浓度和适当疗程下能够强化气管上皮黏膜完整性，增强黏膜免疫屏障。

杯状细胞对呼吸道黏膜黏液分泌量有重要影响，本试验中随着艾叶烟熏时间增加，杯状细胞数量有增加趋势，提示艾叶烟熏会在一定程度上增加呼吸道黏膜的分泌。实际治疗中，也常可见有脓浊涕的动物艾叶烟熏后排出较前稀薄的痰涕。

艾叶烟熏虽可刺激呼吸道造成血管周围水肿，但在所有组，水肿程度未造成试验鼠出现明确的呼吸不畅症状。而且，通过控制艾烟的浓度和疗程，也可限制水肿的程度。

肥大细胞的变化对鼻窍充血、瘙痒等炎症反应状态有影响。对感冒鼻腔瘙痒的人作艾叶烟熏后可见自觉痒感减轻，推测艾叶烟熏有可能对肥大细胞的数量和功能产生影响。但本试验各组间气管黏膜下肥大细胞无显著差异且数量很少。另外，本试验结果为生理状态下取得，并不表明病理状态下也是如此。

艾叶烟熏是传统的呼吸道病防治手段，操作简便，效果比较可靠。其防治机理，可能与上述内容有关。要进一步研究和发展这种简便的防治手段，还需要进一步探讨是否有其他组织学机制参与，分析艾叶烟熏的作用更多来源于烟雾颗粒的直接刺激或是其他药效成分，观察其他芳香避秽药物是否有同样效果，是否可有配伍协同作用，并探索对不同动物、不同疾病的最适剂量和疗程。

［1］郭相杰，许素军，廖慧丹，等．3种甲苯胺蓝异染肥大细胞方法的比较［J］．中国法医学杂志，2014;29(2):563-565．

［2］赵香汝，王家鑫，崔平．肥大细胞用甲苯胺蓝染色之体会［J］．中国组织化学与细胞化学杂志，2000，9(3):359-359．

［3］白春学．气道粘液高分泌和药物治疗研究进展［J］．中国处方药，2006，01:33-35．

［4］刘大鹏，宋立强．干预支气管哮喘小鼠气道黏液高分泌的研究［J］．中华肺部疾病杂志(电子版)，2013;6(5):416-420．

The observation of histological Impact of respiratory tract in mice by Moxa-smog treatment

DU Juan1，LI Hui-xia2，LIU Zhong-jie2，WANG Shuai-yu2，LIN Jia-hao2，FAN Kai2
(1．Animal Husbandry Station at Kaifeng，Kaifeng 475 000，China;2．College of Veterinary Medicine，China Agricultural University，Beijing 100193，China)

To study the histological effect in normal respiratory tract by different Moxa-smog treatment，54 healthy SPF KM mice were divided into control group，2 g Argyi/m3group，and 4 g Argyi/m3group．Mice in each group were exposed in Moxa-smog twice a day and continue 2 weeks．Results:After Moxa-smog treatment，the number of goblet cells in nasal mucosa increased significantly．However，the number of mast cells in nasal mucosa did not changed significantly;the lung and trachea had slight edema;In 2 g Argyi/m3group，the amount of tracheal exfoliated epithelium increased and then decrease．Our results show that the suitable concentration of Moxa-smog can enhance the integrity of respiratory epithelium as well as the mucus secretion，and increase the number of goblet cells．

Moxa-smog;respiratory symptom;goblet cell;respiratory epithelium

FAN Kai

S854．5

A

0529-6005(2017)01-0109-02

2015-10-14

中央高校基本科研业务费专项资金(2015DY004);中国农业大学动物医院临床基金

杜娟(1989—)，女(回族)，助理兽医师，硕士，从事动物防疫工作，E-mail:dujuan0824@163．com

作者简介:李慧侠(1992—)，女，硕士，从事兽医临床工作，E-mail:lihuixiaecho@126．com

注:李慧侠与杜娟对本文具有同等贡献

范开，E-mail:dirtyfan@sina．com