Hort16A猕猴桃顶芽培养

刘子花　杨玲

摘要：以Hort16A猕猴桃（Actinidia chinensis Planch.）顶芽为外植体，研究了不同植物生长调节剂组合对丛生芽诱导、生根培养的影响。结果表明，在丛生芽诱导培养中，培养基中生长调节剂最适浓度组合为6-BA 1 mg/L与NAA 0.03 mg/L，丛生芽的诱导率到达92%，芽的长势较好。生根培养中，在1/2MS培养基中生长调节剂IBA最适浓度为0.5 mg/L，生根率到达了98%。

关键词：Hort16A猕猴桃（Actinidia chinensis Planch.）；顶芽；组织培养；丛生芽；生根

中图分类号：S663.4 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）04-0749-03

Hort16A猕猴桃（Actinidia chinensis Planch.）是新西兰园艺与食品研究院杂交选育而成的猕猴桃新品种，属中华猕猴桃。其树势强健，适应性广，果肉黄色至金黄色，风味甜香，果实倒圆锥形，重80～140 g，果实软熟时可溶性固形物含量为15%～17%，维生素C含量120～150 mg/100 g[1，2]。10月中旬成熟，耐贮藏，是市场售价较高的品种，市场发展潜力巨大。

Hort16A为雌雄异株，可进行扦插、嫁接、种子播种。虽然种子繁殖较无性繁殖容易，但实生苗性状不稳定，且难以获得大批雌株；用扦插、嫁接繁殖成活率较低，效率也低，采用植物组织培养技术可实现对良种猕猴桃的快速繁殖。猕猴桃组织培养的外植体种类很多，当前选用的外植体包括茎段、叶片、根段、顶芽、花药、花粉以及胚[3]。但不同品种不同外植体之间愈伤组织发生率和植株再生率均有较大的差异，且多是通过愈伤组织培养获得再生植株[4-6]。而在植物快繁中，通过丛生芽发生型途径进行器官再生，不经过愈伤组织，能使无性系后代保持原品种的特性[7]。本试验利用植物的顶芽分生组织旺盛分裂的特点，进行Hort16A猕猴桃组织培养，探索了组织培养快速繁殖技术，为将引种和育种有机结合，更好地开发利用本土的种质资源，进行分子辅助育种奠定了基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验材料采自西南林业大学苗圃的Hort16A猕猴桃，选择生长旺盛、无病虫害植株上带顶芽的枝条。

1.2 试验方法

1.2.1 培养基配制 丛生芽诱导培养基为MS+3%蔗糖+0.7%琼脂（pH 5.8），添加不同浓度组合的6-BA和NAA。生根培养基为1/2MS或1/4MS+3%蔗糖（pH 5.8），添加不同浓度的IBA。

1.2.2 外植体预处理 将采回带顶芽的枝条先用洗涤剂溶液刷洗，再用自来水充分冲洗。沥干水分后转移至超净工作台进行表面灭菌，75%的乙醇浸泡30 s后，用20%的次氯酸钠溶液（每升滴加5滴吐温-80）进行表面灭菌14～16 min，然后用无菌水清洗备用。

1.2.3 外植体接种 将灭菌后的材料剥取0.3～0.5 cm大小的顶芽接种于培养基上，每瓶接种2个，每处理接3瓶，2次重复。丛生芽诱导培养条件；培养温度（25±2） ℃，暗培养20 d后，然后光照培养，时间12 h/d，光照度1 000 lx。生根诱导的培养条件，温度25±2 ℃，光照时间12 h/d，光照度1 000 lx。

1.2.4 数据统计和分析 光照条件下培养20 d，观察并统计各处理下外植体的诱导情况，包括丛生芽诱导率、丛生芽生长状况、存活率等；对生根处理的进行定期观察，并统计生根率和生长情况。用SPSS 17.0统计分析软件进行显著性分析。

2 结果与分析

2.1 丛生芽的诱导

将剥取的顶芽接种在添加不同浓度生长调节剂的培养基上诱导丛生芽，为了防止褐化在培养初期需要暗培养20 d左右，然后转移至光照条件下培养20 d，观察记录培养情况，诱导结果见表1。由表1可知，在不同浓度6-BA与NAA的生长调节剂组合诱导下有不同的培养情况。在6-BA浓度为1 mg/L的培养基中，Hort16A猕猴桃顶芽能诱导出丛生芽，并且丛生芽的生长情况都较好（图1A）；当6-BA浓度为2 mg/L时，多数诱导形成愈伤组织，少数愈伤组上长出不定芽（图1B）；而6-BA浓度为3 mg/L时虽然也能诱导出丛生芽，但是部分丛生芽的叶片细长或不长叶片或形成畸形（图1C）。

2.2 生根培养

选择长势健壮的组培苗进行生根培养，其诱导生根情况见表2。由表2可知，在培养基中不添加任何植物生长调节剂，组培苗没有生根，并且苗的长势也不好。在相同浓度IBA的1/2MS和1/4MS培养基中，根的诱导情况和苗的长势明显不同，1/2MS培养基中培养15 d有不定根生成，而1/4MS培养基中15 d时则观察不到，且1/2MS培养基中组培苗的根数多且根分布均匀，总体上1/2MS培养基中组培苗从诱导生根情况和苗的长势都优于1/4MS培养基（图2），与张海平等[7]研究结果一致。

对表2中1/2MS培养基中添加不同浓度的IBA对生根率的影响进行t检验，t=24.276（自由度df=3，P=0.000<0.01），IBA对生根率有极显著差异。在1/2MS培养基中IBA浓度为0.1 mg/L根率达到80.5%，当IBA浓度为0.5 mg/L生根率最高达到98%，而IBA浓度为0.7 mg/L时生根率为89%，生根率随IBA浓度升高而升高，但当IBA上升到一定浓度时生根率下降。

将生长良好的猕猴桃生根苗在大棚中进行1周炼苗即可进行移栽，移栽后的前10 d每天给移栽苗喷水至少3次，移栽苗叶片鲜绿，长旺盛。

3 结论与讨论

细胞分裂素和生长素的比例是影响增殖系数和不定芽质量的主要因素[8-10]。在Hort16A猕猴桃顶芽的诱导中，培养基中不同浓度6-BA对顶芽的诱导有不同的影响，在6-BA 1 mg/L时全部诱导生成丛生芽，诱导率均达到70%以上；当6-BA 2 mg/L的培养基中则全部诱导形成愈伤组织，仅有部分愈伤组织有不定芽分化；而在6-BA 3 mg/L时诱导率有所下降，并且出现外植体褐化死亡或无菌苗出现畸形等现象。该现象与李浚明等[11]提出的较高水平细胞分裂素能有利于诱导不定芽的形成，但添加的细胞分裂素浓度过高会引起形态上异常出現畸形甚至抑制生长或死亡相符。本研究中在6-BA浓度相同的情况下，不同浓度的NAA也对诱导结果有不同的影响，在6-BA浓度固定不变的情况下诱导率随着NAA浓度增高而增高，当NAA达到一定浓度时诱导率开始下降。本研究中丛生芽诱导时培养基中生长调节剂的最佳浓度组合为6-BA 1 mg/L+NAA 0.03 mg/L，诱导率达到了92%，并且丛生芽长势健壮，数量也较多。在1/2MS培养基中组培苗的生根率随着IBA浓度的升高而升高，但当IBA升到一定浓度时生根率又下降，IBA为0.5 mg/L时组培菌苗生根率最高到达98%。

参考文献：

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[11] 李浚明，朱登云.植物组织培养教程[M].北京：中国农业大学出版社，2005.