胸水P53抗体联合CEA检测在癌性胸水诊断中的价值

文智能 李霞

胸水P53抗体联合CEA检测在癌性胸水诊断中的价值

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目的 测定胸水的P53抗体、癌胚抗原(Cancer embryo antigen，CEA), 分析对良恶性胸水的鉴别意义。方法 采用酶联免疫吸附法来测定80例癌性胸水、50例良性胸水的P53抗体及CEA进行比较。结果 P53抗体在癌性胸水与良性胸水浓度分别为(20.151±5.002)IU/mL、(1.086±2.836)IU/mL，差异有统计学意义(P<0.05)；CEA浓度分别为(1001.06±220.08)μg/L、(60.54±10.51)μg/L，差异同样有统计学意义(P<0.01)。胸水中P53抗体测定联合CEA测定在癌性胸水诊断特异度为91.3% ，敏感度为90% 。结论 胸水P53抗体可作为独立癌性胸水生物标记物, 联合CEA测定更有利于提高癌性胸水的诊断水平。

P53抗体；癌胚抗原；肺癌

肿瘤是多种抑癌基因、癌基因共同作用的多步骤的复杂演变过程。目前有研究资料显示P53基因突变与人类多种肿瘤的发生有关[1]。早期肺癌就会出现p53基因的突变，因此肺癌在早期便可采用此方法诊断[2]。有研究表明50%-70%的肺癌患者有P53基因改变[3]。P53基因突变可引起表达产物P53蛋白空间构象的改变, 延长了生物半衰期，导致在细胞内囤积明显, 故而促使相应的P53 抗体的产生。癌胚抗原(CEA)是一种重要的肿瘤标志物，它通常被用于临床诊断恶性肿瘤的辅助指标。本文就测定良恶性胸水P53 抗体及CEA水平，分析在胸水中的表达情况。

资料与方法

一、研究对象

本文收集广西医科大学第四附属医院2000年1月至2015年12月胸腔积液住院患者，且均征求患者同意。癌性胸水组:女27例，男53例, 共80例， 平均年龄57.8岁。均据胸水脱落细胞学、组织病理学检查确诊。结核性胸水组：女18例，男32例, 共50例, 平均年龄48.2岁。据影像学、临床、胸水病原学培养、胸膜活检以及抗结核治疗随诊有效确诊。

二、标本收集

将加有肝素抗凝剂的无菌试管收集胸水标本,离心后则取2-3mL， 最后保存在- 70℃环境中, 等待检测。

三、测定方法

采用德国IBL公司P53-Autoantibodies 酶联免疫吸附反应试剂盒作为试剂来测定P53抗体。采用Bayer公司癌胚抗原试剂盒测定CEA，用ELISA方法检测。

四、统计学方法

以SPSS13.0软件包进行t检验。据胸水CEA蛋白、p53抗体测定情况，分别将良性胸水组50例、癌性胸水组80例进行分析比较，分段求出不同的临界点的特异性和敏感性，根据两者的相互关系制成受试者工作特性曲线(receiver operator characteristic curve，ROC曲线)，据曲线特征来选用特异性、敏感性较高的临界点作为正常的参考值。

结 果

一、胸水p53抗体、CEA在两组病人的比较分析，提示在癌性胸水(恶性胸水)p53抗体和CEA平均水平均要明显高于结核性胸水(良性胸水)者，经过统计学t检验，癌性胸水(恶性胸水)与结核性胸水(良性胸水)p53抗体、CEA测定值的差异均有统计学意义，p53抗体(P<0.05)，CEA (P<0.01)。(见表1)。

表1 不同胸水中CEA、p53抗体水平的比较

二、本实验CEA、p53抗体在单独测定及联合测定癌性胸水诊断的特异性、敏感性进行评价。根据最佳临界点(CEA<200ug/L，p53抗体< 7IU/mL)。结果两者联合测定特异性、敏感性均较高，达91.3%、90% ，明显高于单一测定。(见表2)。

表2 p53抗体、CEA单独或联合检测诊断癌性胸水的敏感性和特异性(%)

讨 论

胸腔积液病因诊断有一定困难，或有创性(如内科胸腔镜)或阳性率太低[4]。目前已知, P53有致癌、抑癌作用, 主要取决生物学上功能情况。p53基因突变在多种肿瘤中均较常见，突变区域通常在进化保守区中的第5-8外显子[5]。野生型p53蛋白对细胞由G1期进入S期的转变有着重要作用，起着调控细胞增殖作用[6]。野生型的P53基因有着多种重要功能，但突变型P53基因不仅干扰野生型P53的功能而且失去了原有的生物学功能(如抑癌功能)，在体内或体外形成突变P53 /野生聚合物，从而野生型P53丧失抗逆转、增殖、抑癌作用,加快肿瘤的发生、发展[7]。突变型P53蛋白在细胞中的半衰期较短, 容易水解, 故用突变型P53蛋白作为检测方法在临床上对肿瘤的早期诊断有一定困难。Winter[8]等报道有30%-40% 的突变蛋白可以使机体产生特异性P53 抗体。故测定P53抗体可间接反映机体P53蛋白进而了解有无基因突变。有研究表明据ELISA 法建立了针对P53 蛋白的相应抗体的测定方法, 并在临床上用来测定血清中的P53抗体取得成功[9]。郭品娥等[10]对各种肿瘤患者共240例的血清，进行P53抗体测定, 发现阳性率为22%-36%。本文已测定胸水标本中P53抗体,发现恶性(癌性)胸水P53抗体平均水平高于良性(结核性)胸水，特异度为88%，敏感度为60.5%，说明胸水P53抗体可考虑为独立的癌性胸水生物标记物之一。P53抗体对机体抗体活性无影响，可以在-80℃长期保存。较好的稳定性便于临床应用。

有报道胸水CEA为鉴别良恶性胸水中最有价值的肿瘤标志物[11]。Park等人[12]比较了68例良性胸水、67例恶性胸水患者CEA浓度，提出胸水中CEA浓度检测对恶性胸水患者准确度达93.4%，明显优于其他肿瘤标志物。本文测定结果发现恶性胸水CEA平均水平高于良性胸水，特异度为90%，敏感度为79.1%，也符合CEA在良恶性胸水的鉴别上具有重要的临床意义。另本文发现，在良恶性胸水的鉴别诊断上，联合胸水p53抗体、CEA的检测其特异度、敏感度均高于单独测定，因此联合测定互补了单一指标的不足, 对提高癌性胸水的诊断率有重要的临床意义。综上，建议对临床上高度怀疑恶性胸水，但胸膜组织病理学、胸水细胞学检查均为阴性者，应联合胸水p53抗体、CEA测定，以减少恶性胸水漏诊率，提高其检出率，早期有效治疗。

[1] Ecke TH，Schlechte HH，Schiemenz K，et al．TP53 gene mutations in prostate cancer progression[J]．Anticancer Res，2010,30(5)：1579-1586.

[2] 张向群．肺癌与血清P53抗体关系的研究进展[J]. 中国急救复苏与灾害医学杂志，2008，3(1):60-62.

[3] Lee S O，Andey T，Jin UH，et al．The nuclear receptor TR3 regulates mTORCl signaling in lung cancer cells ex pressing wild-type p53[J]．Oncogene，2012， 31(27)：3265-3276．

[4] Maskell NA, Butland RJ, Pleuml Diseases Group.Standards of Care Committee，British Thoracic Society．BTS guidelines for the investigation of a unilateral pleural effusion in adults [J]．Thorax，2003，58(2)：8-17.

[5] Soussi T，Lozano G. P53 mutatiun heterogeneity in cancer [J]．Bioehem Biophys Res Commun，2005，331(3)：834-842.

[6] Otsuki T，Kanno T，Fujita Y，et al. A3 adenosine receptor-mediated p53-dependent apoptosis in Lu-65 human lung cancer cells[J]．Cell Physiol Biochem，2012，30(1)：210-220.

[7] 马军莉，胡云衢，蒲志贤. P53在非小细胞肺癌中表达的研究现状[J].医学综述，2010，16(22)：3399-3402.

[8] Winter SF, Minna JD, Johnson BE,et al. Development of antibodies against P53 in lung cancer patients appears to be dependent on the tpye of P53 mutation[J]. Cancer Res, 1992, 52(15): 4168-4174.

[9] Lubin R, Schlichtholz B, Teillaud JL,et al. P53 antibodies in patients with various types of cancer: assay, identification,and characterization[J]. Clin Cancer Res, 1995,1(12): 1463-1469.

[10] 郭品娥,沈茜,关月琴.检测抗P53蛋白抗体ABC-ELISA 法的建立和初步临床应用[J]. 第二军医大学学报, 2000, 21(1): 53-55.

[11] Wang X F, Wu YH, Wang MS, et al. CEA, AFP, CA125,CA153 and CA199 in malignant pleural effusions predict the cause[J]. Asian Pac J Cancer Prev,2014,15(1):363-368.

[12] Park DS，Hwang KE，Shim H，et al．Elevated survivin is associated with a poor response to chemotherapy and reduced survival in lung cancer with malignant pleural effusions[J]．Clin Exp Metastasis．2012．29(2)：83-89．

Diagnostic value of pleural effusion P53 antibody combined with CEA in the diagnosis of malignant pleural effusion

WENZhi-neng,LIXia.

DepartmentofRespiratoryMedicine,theFourthAffiliatedHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Liuzhou,Guangxi545005,China

Objective To investigate the clinical significance of differential diagnosis of benign and malignant pleural effusion by detecting P53 antibody and CEA in patients with pleural effusion. Methods P53 antibodies and CEA in 80 cases of malignant pleural effusion and 50 cases of benign pleural effusion were detected by enzyme linked immunosorbent assay. Results P53 in malignant pleural effusion and benign hydrothorax antibody concentration were respectively (20.151±500.2) IU/mL and (1.086±283.6) IU/mL (P<0.05). CEA concentration were respectively (1001.06±22008) g/L and (60.54±10.51) g/L (P<0.01). The diagnostic specificity of pleural effusion P53 antibody and CEA was 91.3%, and the sensitivity was 90%. Conclusion P53 antibody is an independent tumor marker of pleural effusion, and the combined detection of CEA is helpful to improve the diagnostic level of malignant pleural effusion.

P53 antibody; CEA; lung cancer

10.3969/j.issn.1009-6663.2017.04.012

1. 545005 广西 柳州，广西医科大学第四附属医院呼吸与危重症医学科一病区2. 545005 广西 柳州，广西脑科医院

2016-08-15]