HPLC测定达原饮中的芍药苷和黄芩苷的含量

利 玲，高 音

（鄂东医疗集团黄石市中心医院（湖北理工学院附属医院）药学部，湖北黄石435000）

HPLC测定达原饮中的芍药苷和黄芩苷的含量

利 玲，高 音*

（鄂东医疗集团黄石市中心医院（湖北理工学院附属医院）药学部，湖北黄石435000）

目的：建立同时测定达原饮中芍药苷和黄芩苷含量的方法。方法：采用双波长HPLC，Aglient ZORBAX SB-C18柱（4.6×250mm，5μm）；流动相：0.2%H3PO4溶液-甲醇（体积比50∶50）；检测波长分别为230nm（芍药苷）和280nm（黄芩苷）；柱温为30℃；流速为1mL·min-1。结果：芍药苷和黄芩苷分别在9.69～155.04μg·mL-1，18.66～298.56μg·mL-1线性关系良好，平均回收率分别为99.03%，98.98%，RSD分别为1.95%，1.67%。结论：该法简便、准确、灵敏、重现性好，可用于达原饮中芍药苷和黄芩苷含量的同时测定。

HPLC；达原饮；芍药苷；黄芩苷；含量测定

达原饮出自于《温疫论·温疫初起》段中，是明朝中医吴又可以决气伏于膜原而制[1]。该方由槟榔、厚朴、草果仁、知母、芍药、黄芩和甘草七味中药组方而成，又名达原散。用于瘟疫或疟疾邪伏膜原之憎寒壮热，胸闷呕恶，头痛烦躁，脉弦数，舌边深红，苔垢腻等症，具有开达膜原，辟秽化浊之功。现代多应用于各种发热、盗汗、病毒性脑炎等[2,3]。达原饮是经典用于湿遏热伏的半表半里证的名方，沿用千年，并在国人抗击非典的过程中发挥了重要的作用。

为了有效地控制达原饮的质量，本研究选择芍药苷和黄芩苷作为检测对象，建立了双波长HPLC法同时测定达原饮中芍药苷和黄芩苷两种成分的含量。该方法简单快速，稳定可靠，重现性好，对于控制该中药方剂的质量提供了重要依据。

1 实验部分

1.1 仪器与试药

日立L-7000型高效液相色谱系统，配有L-7110型泵，L-7200型自动进样器，L-7420型UV检测器；BS110S型电子天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）；KQ 500DE型数控超声波清洁器（昆山市超声仪器有限公司）。

芍药苷（96.4%中国食品药品检定研究院，批号：110736-201438）；黄芩苷（93.3%中国食品药品检定研究院，批号：110715-201318）；芍药、黄芩、槟榔、厚朴、草果、知母、甘草药材购自湖北蕲州中药材市场；甲醇（色谱纯，美国Fisher Scientific公司）；磷酸（AR国药集团化学试剂有限公司）；水为纯净水。

1.2 色谱条件

色谱柱为Aglient ZORBAX SB-C18柱（4.6× 250 mm，5 μm）；流动相：0.2%H3PO4溶液-甲醇（体积比50∶50）；检测波长分别为230 nm（芍药苷）和280nm（黄芩苷）；柱温为30℃；流速为1 mL· min-1。

1.3 溶液的制备

1.3.1 对照品溶液精密称取芍药苷对照品10mg，黄芩苷20mg，分别置25mL容量瓶中，加入甲醇超声溶解，室温放冷后用甲醇定容至刻度，即得芍药苷对照品储备液（385.6μg·mL-1）和黄芩苷对照品储备液（746.4μg·mL-1），保存于4℃冰箱。临用时，分别精密量取两种储备液，按体积比1∶1混合均匀，得到芍药苷和黄芩苷的对照品混合溶液，浓度分别为芍药苷193.8μg·mL-1，黄芩苷373.2μg· mL-1。

1.3.2 供试品溶液取装量差异项下的本品5g，研细，精密称取约1g，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，超声处理30min，滤过，弃去初滤液，取续滤液，作为供试品溶液。

1.3.3 阴性供试品溶液按处方分别自制不含芍药和不含黄芩的达原饮浸膏粉各10g，取适量按供试品制备项下方法制备阴性对照溶液。

2 结果与讨论

2.1 专属性考察

参考相关文献[4-8]，经过色谱条件的摸索与优化，采用0.2%H3PO4溶液-甲醇（体积比50∶50）等度洗脱的方法。取对照品溶液、供试品溶液及各阴性供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样分析，分别在230nm和280nm记录供试品溶液色谱图，分别有与对照品溶液芍药苷、黄芩苷保留时间一致的特征峰，所测样品的色谱峰之间以及和杂质色谱峰分离良好，保留时间分别为4.94min和12.31min，阴性对照样品无此特征峰，如图1，2。表明供试品中其它组分对所测组分无干扰。

图1 HPLC色谱图（230 nm）Fig.1 HPLC chromatogram（230 nm）

图2 HPLC色谱图（280 nm）Fig.2 HPLC chromatogram（280 nm）

2.2 线性关系考察

分别取混合储备液0.5、1.0、2.0、4.0、6.0和 8.0mL置10mL容量瓶中，用甲醇定容。配制成含芍药苷9.69、19.38、38.76、77.52、116.28、155.04μg·mL-1和含黄芩苷18.66、37.32、74.64、149.28、223.92、298.56μg· mL-1的标准系列溶液。以芍药苷的峰面积比值为Y，以芍药苷的浓度为X，得到芍药苷的回归方程和相关系数，芍药苷对照品在9.69～155.04μg·mL-1浓度范围内线性关系良好，其回归方程为Y=2201.4X -29608，相关系数r=0.9994。以黄芩苷的峰面积比值为Y，以黄芩苷的浓度为X，得到黄芩苷的回归方程和相关系数，黄芩苷对照品在18.66～298.56μg· mL-1浓度范围内线性关系良好，其回归方程为Y=64373.1X-41202.5，相关系数r=0.9991。

2.3 精密度考察

取对照品混合溶液，按2.1项下色谱条件，自动重复进样5次，进样量20μL，记录色谱图。结果芍药苷、黄芩苷峰面积RSD分别为1.74%，1.59%，表明仪器精密度良好。

2.4 重复性考察

取同一批号样品（批号141001）6份，按1.3.2项下方法分别制备样品溶液，按2.1项下色谱条件，分别进样分析，进样量20μL。计算芍药苷和黄芩苷的平均含量分别为1.14，6.43mg·g-1，RSD分别为1.79%，1.94%，表明方法重复性良好。

2.5 稳定性考察

取配制好的同一批号样品溶液（批号141001），室温下放置，分别于配制后0，2，4，6，8 h各进样1次，记录色谱图，芍药苷、黄芩苷峰面积RSD分别为1.81%，1.93%，表明样品溶液在8h内基本稳定。

2.6 加样回收率试验

取同一批号（141001）达原饮样品约0.5g，共6份，精密称定，各精密加入芍药苷对照品储备液（385.6μg·mL-1）1.5mL，黄芩苷对照品储备液（746.4μg·ml-1）4mL，按1.3.2项下方法，分别制备样品溶液。用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，按2.1项中色谱条件，分别进样分析，进样量20μL，计算各被测成分的平均回收率，结果见表1。

表1 达原饮中芍药苷和黄芩苷的加样回收率（n=6）Tab.1 Recovery of peoniflorin and baicalin in Dayuanyin（n=6）

2.7 样品含量测定

取不同批号的达原饮样品3批，分别按1.3.2项下方法制备样品溶液，按2.1项下色谱条件，分别进样分析，进样量20μL，记录峰面积，分别计算样品中芍药苷和黄芩苷的含量（mg·g-1）。每批样品测定3份，结果见表2。

表2 达原饮中芍药苷和黄芩苷的含量测定结果Tab.2 Content of peoniflorin and baicalin in Dayuanyin

3 结论

达原饮方中芍药清热滋阴，可防诸辛燥药之耗散阴津；黄芩苦寒，清热燥湿。二者共为佐药。配合方中其它药味即可达奏开达膜原，辟秽化浊，清热解毒之功。芍药苷和黄芩苷分别为芍药和黄芩的有效成分，且测定方法均比较成熟，故选择这两种成分作为含量测定的指标成分。结果表明，本法简便，准确可靠，专属性强，可用于同时测定达原饮中芍药苷和黄芩苷的含量。

［1］高忠英.谈“邪伏膜原”与达原饮之运用［J］.北京中医杂志，1994，13（4）：43-45.

［2］徐宁，徐敬才.浅析达原饮的运用及其类方［J］.山东中医药大学学报，2003，27（5）：341．

［3］宋茹，迟归兵.达原饮胶囊的质量标准研究［J］.中成药，2008，30（8）：附9-附11.

［4］师永清.双波长HPLC同时测定熊胆丸中栀子苷和黄芩苷的含量［J］.中国现代应用药学，2011，28（8）：762-765.

［5］侯志坚，师永清.双波长HPLC同时测定防风通圣丸中栀子苷和黄芩苷的含量［J］.中国实验方剂学杂志，2011，17（24）：80-82.

［6］周蓬，宋青，马帅.HPLC法同时测定小儿豉翘清热颗粒中栀子苷、芍药苷、黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素［J］.中成药，2013，35（8）：1693-1696.

［7］朱冠华，顾圣莹，康雷，等.HPLC法同时测定参芍胃安颗粒中芍药苷和黄芩苷的含量［J］.中国药房，2014，25（27）：2533-2535.

［8］赵佳丽，肖国栋，徐宏祥，等.HPLC测定咽炎片中的黄芩苷、芍药苷和丹皮酚［J］.华西药学杂志，2014，29（4）：476-477.

Simultaneous determination of peoniflorin and baicalin content in dayuanyin by HPLC

LI Ling,GAO Yin*
（Department of Pharmacy,Huangshi Central Hospital（Affiliated Hospital of Hubei Polytechnic University）, Edong Healthcare Group,Huangshi 435000,China）

Objective:To establish a method for simultaneously determining peoniflorin and baicalin in Dayuanyin.Method:A double wavelength RP-HPLC method was developed.The analysis was performed on a Aglient ZORBAX SB-C18column（4.6×250mm,5μm）using methanol-0.2%phosphoric acid,the flow rate was 1.0 mL·min-1.Peoniflorin and baicalin were detected at 230～280 nm respectively.The column temperature was 30℃. Result:The calibration curves of peoniflorin and baicalin showed good linearity in the ranges of 9.69～155.04 μg· mL-1and 18.66～298.56 μg·mL-1.The average recoveries were 99.03%and 98.98%with RSD of 1.95%and 1.67%. Conclusion:The method is simple,accurate,sensitive and reproducible for simultaneous determining peoniflorin and baicalin in Dayuanyin.

HPLC;Dayuanyin;peoniflorin;baicalin;content determination

R917

A

10.16247/j.cnki.23-1171/tq.20170323

2016-11-30

利玲（1975-），女，湖北省黄石市人，主管药师，2005年毕业于中国药科大学药学专业本科，研究方向：临床药理学。

高音（1964-），女，大专学历，主管药师。