硫化氢在评价急性胰腺炎严重程度中的作用研究

贾丽萍，鲁厚胜，王 丹，沈洲立，许茂涛，袁晓英,阳 光

(重庆市第九人民医院消化内科 400700)

论著·临床研究 doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2017.04.019

硫化氢在评价急性胰腺炎严重程度中的作用研究

贾丽萍，鲁厚胜，王 丹，沈洲立，许茂涛，袁晓英,阳 光△

(重庆市第九人民医院消化内科 400700)

[摘要] 目的 探讨硫化氢(H2S)在急性胰腺炎(AP)严重性程度评价中的价值。方法 选取2013年2月至2015年12月期间在该院住院的51例AP患者，其中21例为重症AP(SAP)组，30例为轻性AP(MAP)组，同时抽取36例非胰腺炎腹痛患者(腹痛组)，9例健康人作为对照组(NC组)。入院时抽取4组受试者外周静脉血，并进行Ranson评分。在12、24、48 h后继续抽取AP患者外周静脉血，使用酶联免疫吸附法(ELISA)监测患者血清H2S水平。使用单因素方差分析和事后分析比较4组受试者入院时血清H2S水平，重复测量的方差分析比较AP患者入院时、12 h、24 h和48 h时H2S水平，Spearman相关性分析AP患者血清H2S水平与Ranson评分的关系。结果 入院时，SAP组的H2S水平显著高于MAP组、腹痛组、NC组(P=0.000)，MAP组的H2S水平也显著高于腹痛组、NC组(P=0.000)，而腹痛组和NC组差异无统计学意义(P=0.131)；AP患者在入院时，12 h，24 h和48 h时H2S水平差异均有统计学意义(P=0.000)，呈逐渐下降的趋势；AP组入院时的H2S水平与Ranson评分呈显著正相关(r=0.578，P=0.000)。结论 血清H2S对诊断患者是否存在AP发生的可能性上有明确意义，血清H2S水平越高，AP为SAP的风险越大。

胰腺炎, 急性坏死性；硫化氢; 诊断, 鉴别

对急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)严重程度的评估一直是AP诊疗过程中的重要问题之一，寻找一种灵敏的血清学指标，对于把握AP的严重程度、进展趋势和治疗手段具有重要意义。近年来，有动物实验发现硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)参与了AP的发生发展过程[1-2]，甚至有研究认为血清H2S水平与胰腺组织损伤呈正相关[3-4]。但是国内鲜有研究者从临床的角度对H2S与AP的关系进行探讨，本研究对比了正常健康人群及AP患者的血清H2S水平及病程治疗过程中H2S水平的变化，探讨H2S对AP的预测及其意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2013年2月至2015年12间在本院住院的AP患者60例，其中男34例，女26例。因为各种原因，流失9例，剩余51例有效受试者。依据2013年中华急性胰腺炎诊治标准分为重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)组，其中男12例，女9例；平均年龄(48.53±10.14)岁，平均体质量(65.72±7.31)kg。轻性急性胰腺炎(mild acute pancreatitis，MAP)组，其中男17例，女13例；平均年龄(49.51±9.37)岁，平均体质量(71.62±12.31)kg。另选取门诊腹痛就诊的60例消化内科腹痛患者组作为腹痛组，排除胰腺炎患者和各种原因流失者24例，剩余36例有效受试者，平均年龄为(51.25±14.25)岁，平均体质量为(67.00±8.31)kg。选取正常健康人20例作为健康对照组(NC组)，因各种原因流失11例，剩余9例有效受试者，平均年龄为(53.58±15.45)岁，平均体质量为(68.45±13.15)kg。4组年龄、性别、体质量及美国麻醉师协会(ASA)分级差异无统计学意义(P>0.05)。排除标准：患有严重心肌梗死等严重疾病的患者；患有糖尿病等相关代谢性疾病的患者；患有肾功能不全等疾病的患者。

1.2 方法 标本采集：MAP组、SAP组受试者在入院时及入院12、24、48 h分别抽取肘静脉血5 mL；腹痛组和NC组受试者抽取肘静脉血5 mL，室温下放置30 min，2 000 r/min离心20 min，取上清液3 mL，分装放置于-70 ℃冰箱冷冻保存，待标本集齐后统一检测。检测方法： 血浆H2S水平的测定采用去蛋白的方法。首先在试管中加入0.5 mL 10 g/L醋酸锌，然后加入0.1 mL血浆标本，振荡混匀，再依次加入20 mmol/L对苯二胺盐酸盐和0.5 mL 30 mmol/L三氯醋酸，再加入2.5 mL蒸馏水补足体积至5 mL，充分混匀。6 000 r/min离心5 min，吸出上清液，用分光光度计在670 nm处检测吸光度。据H2S标准曲线计算其中H2S的水平。MAP组、SAP组受试者抽取肘静脉血，检测CRP、肝肾功能、电解质、淀粉酶等。并抽取动脉血检测血气分析，记录患者48 h内的各项检查结果，并进行Ranson评分。

2 结 果

2.1 各组H2S比较 SAP组、MAP组、腹痛组、NC组入院时H2S分别为(0.343±0.089)、(0.224±0.115)、(0.134±0.043)、(0.067±0.030)mmol/L，对4组受试者的H2S进行单因素方差分析发现4组受试者在入院时H2S差异有统计学意义(F=39.954，P=0.000)；进一步做事后检验：SAP组与MAP组、腹痛组、NC组比较差异也有统计学意义(P=0.000)，同时MAP组与腹痛组、NC组比较差异有统计学意义上(P=0.000)，而腹痛组和NC组差异无统计学意义(P=0.131)。

2.2 AP患者在入院时、12 h、24 h、48 h时H2S比较 所有AP患者在入院时、12 h、24 h、48 h时H2S分别为(0.263±0.116)、(0.211±0.095)、(0.123±0.113)、(0.048±0.084)mmol/L，对AP患者4个时间点的H2S进行重复测量的方差分析，由于不满足球形检验，采用greenhouse-geisser法校正结果后得到F=67.707，P=0.000，提示AP组在不同时间H2S的变化差异有统计学意义。进一步进行两两分析发现入院时、12 h、24 h和48 h两两之间比较差异均有统计学意义(P=0.000)。

2.3 AP患者入院时血清H2S与Ranson评分的相关性分析 AP患者入院时H2S与Ranson评分呈正相关，差异有统计学意义(r=0.578,P=0.000)。

3 讨 论

AP是以恶心、呕吐、急性腹痛伴血淀粉酶和脂肪酶升高的常见的急腹症，近年来，随着生活水平的提高和饮食结构的不合理，AP的发病率呈现出上升趋势。部分患者起病急，进展快，并发症多，甚至发展到SAP，这一部分患者约占AP总数的20%～30%，虽然近年来相关治疗取得进展，但是SAP的病死率仍然高达10%～30%[5-6]。故而AP的早期诊断，尤其早期的病程预测，对于减少病死率和改善预后均有十分重要的作用。现用于诊断AP的指标中，Ranson评分指标过多，操作复杂，缺乏评估的连续性和动态性，临床实用性差；影像评分中CTSI(computed tomography severity index)对AP发病早期病情严重程度评估不是很理想，还有造影剂的肾毒性等，使用受到限制。因此，血清生化指标由于其易获得性、灵敏性高在对AP的诊断和预测中受到重视。

有研究发现，H2S与气体分子NO、CO在部分生物学功能方面相似，被看做体内第三种的气体信号分子[7]，它具有调节炎性反应、舒张血管、抑制平滑肌细胞增殖等多种生理学功能。有通过注射NaHS的动物实验[8]表明，H2S可能是一种炎症介质，与多种疾病的发病过程有密切关系，尤其是在组织损伤中起着重要作用。近年来，越来越多的研究者也开始探讨其与AP发生发展的关系。Bhatia等[9]发现NaHS 在组织损伤中诱导胰腺细胞的凋亡，且可能参与增加细胞中P物质的产生，从而增加PPT-A和NI-IR的水平，由此加重胰腺组织损伤。国内学者陈尼维等[10]检测SAP患者血清H2S水平显著高于健康人组，并与AP上腹部X射线断层扫描严重指数呈正相关，表明SAP患者血清H2S与AP损伤程度有关。还有研究者通过给予H2S阻断剂PAG的动物实验，发现通过抑制和减少H2S的生成对减轻胰腺损伤是有明确效果的[11-12]。在本研究中，SAP组、MAP组与腹痛组、NC组H2S比较差异均有统计学意义(P<0.05)，提示在判断是否存在胰腺炎发生的可能上，H2S是有较为明确意义的，这一结果与黄惊鸿等[13]的研究结果相似。在临床工作中，笔者曾遇到有SAP患者发病时淀粉酶可以不升高3倍以上，给诊断带来混淆，这时可使用H2S进行补充诊断。

本研究对H2S作为判断胰腺炎程度的指标进行了一定探讨，结果发现，在入院时H2S的水平：SAP组>MAP组>腹痛组>NC组，且组间差异有统计学意义。入院时AP组H2S水平与其Ranson评分呈显著正相关，提示H2S的水平可以用来预测胰腺炎的严重程度，H2S水平越高，患者是SAP的可能性越大。从本研究的数据来看，当患者的血清H2S大于0.165 mmol/L(SAP组H2S 的M-2SD)时，患者存在SAP的可能性较大，应当给予患者足够重视，跟踪其病情。研究结果还发现非AP腹痛人群的H2S水平与常人无异，提示可以使用血清H2S与其他腹痛患者进行鉴别。另外，在AP患者入院时，12 h、24 h、48 h时H2S的方差分析结果显示，每个时段患者H2S是呈逐渐下降的，且时段间差异有统计学意义，提示在AP患者的病情变化中是具有灵敏性的，或可将H2S作为观察AP患者病情缓解的指标之一。

本研究发现，H2S与AP患者严重程度呈正相关，可用H2S水平来预测AP的严重程度。而患者H2S大于0.165 mmol/L时，提示患者存在较高SAP风险，应当加大对这部分患者的随访力度。这一结论尚未进行诊断标准灵敏性、特异性的进一步判别，结果应当被谨慎推论，但是这仍然为AP的诊断和判断预后提供了新的临床思路。笔者将在下一步的研究中继续探讨H2S水平作为鉴别MAP、SAP标准的可能性，并且将考察H2S水平作为观察患者病情缓解指标的有效性。

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The value of hydrogen sulfide in estimating the severity of acute pancreatitis

JiaLinping,LuHousheng,WangDan,ShenZhouli,XuMaotao,YuanXiaoying，YangGuang△

(DepartmentofGastroenterology,NinthPeople′sHospitalofChongqingcity,Chongqing400700,China)

[Abstract] Objective To explore the value of hydrogen sulfide(H2S) in the evaluation of severity of acute pancreatitis(AP).Methods Fifty-one patients with AP from February 2013 to December 2015 in this hospital were divided into severe acute pancreatitis (SAP,n=21) group and mild acute pancreatitis(MAP,n=30) group.Thirty-six non-pancreatitis abdominal patients and 9 healthy persons(NC) were chosen as compare groups.The peripheral venous blood samples from the four groups and the Ranson Score of AP group were obtained after admission,the venous blood samples of 12 h,24 h,48 h of AP group were also obtained.Blood samples were used to detect the concentrations of hydrogen sulfide with ELISA method.We compared the concentrations of H2S between the four groups with one-way ANOVA,and post hoc;compared the differences of concentrations of H2S in AP group between after admission,12 h,24 h and 48 h with repeated measures data ANOVA;and explored the relationship between the concentrations of H2S after admission and the Ranson scores in AP group with Spearman correlation analysis.Results The concentrations of H2S was significant higher in SAP group than MAP,abdominal,and NC group(P=0.000);the concentrations of H2S was also significant higher in MAP group than abdominal,and NC group(P=0.000);there is no significant difference between the abdominal and NC group(P=0.131).There is significant difference of H2S concentrations between the four times in AP group(P=0.000),decreasing gradually over time.The H2S concentrations in AP group after admission was significantly related with their Ranson scores(r=0.578,P=0.000).Conclusion There is certain value of the concentrations of H2S in the diagnosis of AP,the higher H2S level suggests the higher severity of the patients with acute pancreatitis.

pancreatitis, acute necrotizing; hydrogen sulfide；diagnosis, differential

贾丽萍(1975-)，副主任医师，硕士，主要从事肝胰疾病的诊断与治疗研究。△

，E-mail:tjdggsf@126.com。

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A

1671-8348(2017)04-0489-02

2016-09-29

2016-10-31)