ERG和鼠双微体2蛋白在前列腺癌组织中的表达及意义

刘家赵 孛茹婷 杨文君 刘玲玲 姬广海 郑 义 李 鹏 蔡 磊 陈志强

(宁夏医科大学总医院放射科，宁夏 银川 750004)

ERG和鼠双微体2蛋白在前列腺癌组织中的表达及意义

刘家赵1孛茹婷 杨文君2刘玲玲 姬广海 郑 义 李 鹏 蔡 磊 陈志强

(宁夏医科大学总医院放射科，宁夏 银川 750004)

目的 检测ERG蛋白和鼠双微体(MDM2)蛋白在前列腺癌组织中的表达情况，并探讨其相关性。方法 收集经病理学确诊为前列腺癌标本48例，良性前列腺增生10例，采用免疫组织化学二步法或SP法检测组织标本的ERG蛋白和MDM2蛋白的表达情况，采用χ2检验及Spearman等级相关分析ERG和MDM2表达与前列腺癌分级的关系。结果 前列腺癌组织中ERG和MDM2蛋白阳性表达率分别为33.3%和47.9%，在良性前列腺增生组未见表达，差异有统计学意义(P<0.05)。ERG和MDM2蛋白表达与前列腺癌Gleason评分分级不相关(P>0.05)；但ERG与MDM2蛋白在前列腺癌组织中的表达呈正相关(r=0.831，P=0.001)。结论 ERG和MDM2蛋白在前列腺癌组织中的高表达，与前列腺癌的发生、发展密切相关。前列腺癌中ERG蛋白表达与MDM2蛋白的异常表达密切相关说明这两个蛋白可能存在协同作用。

前列腺肿瘤；ERG；鼠双微体2

前列腺癌在欧美国家其发病率和死亡率分别居第二位和第六位〔1〕，在我国前列腺癌的发病率呈逐年上升趋势〔2〕，其病因机制的探究依然是相关研究人员关注的焦点。ERG为癌基因，是E26转录因子(ETS)的同源基因，ERG蛋白在血管的发生中起着重要作用，已有报道显示ERG蛋白在前列腺癌中高表达〔3〕，近年其与肿瘤的关系越来越受到关注。鼠双微体(MDM)2基因亦是一种原癌基因，是p53信号通路中的关键成员，在调控p53基因中发挥重要作用。MDM2在前列腺癌等多种肿瘤组织中都高表达〔4〕。那么，ERG与MDM2是否在信号通路中存在某种联系，明确二者在前列腺癌组织中的表达及其相互关系，将有助于揭示二者生物学功能机制和前列腺癌的发生、发展与转归机制。本研究采用免疫组化方法检测前列腺癌及良性前列腺增生标本的ERG和MDM2蛋白表达情况，探讨二者在前列腺癌中的表达情况及其相互关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 58例标本均来自我院病理科，2011年11月1日至2013年5月31日行超声引导下前列腺穿刺术或前列腺切除术后的前列腺组织蜡块。其中前列腺癌48例为病例组，平均年龄(72.17±6.82)岁；良性前列腺增生10例为对照组，平均年龄(65.20±7.77)岁。所有病例组中有吸烟史14例，饮酒史7例；所有对照组中有吸烟史4例，饮酒史2例。按2004年修订的Gleason评分系统进行病理分级：高分化组Gleason评分<7分14例，中分化组Gleason评分=7分23例，低分化组Gleason评分>7分11例。所有入选病例临床资料完整，术前均未进行放疗、化疗及内分泌治疗等，所有病例均排除泌尿系统其他疾病、内分泌系统疾病、冠心病和其他恶性肿瘤等。

1.2 主要实验试剂 兔抗人ERG、鼠抗人MDM2单克隆抗体及PV-6001二步法免疫组化检测试剂均为北京中杉金桥生物技术有限公司产品，SP系列试剂盒为ZYMED公司产品，HRP-DAB底物显色试剂盒为北京天根生化科技公司产品。

1.3 免疫组织化学染色 免疫组化方法分别用二步法(ERG抗体即用型)和SP法(MDM2抗体即用型)检测上述标本。石蜡标本常规切片(4 μm)；常规脱蜡至水，根据抗体要求，对抗原进行相应高压热修复；3%H2O2去离子水孵育10 min，消除内源性过氧化物酶活性，PBS冲洗；根据抗体要求，ERG抗体直接滴加一抗，37℃孵育2 h，PBS冲洗；滴加检测试剂(山羊抗兔IgG抗体-HRP多聚体)，37℃孵育30 min，PBS冲洗；DAB显色，自来水冲洗，苏木精复染、脱水、透明、中性树胶封片；MDM2抗体滴加试剂A，室温孵育20 min，弃去；滴加一抗，37℃孵育2 h，PBS冲洗；滴加试剂B，37℃孵育15 min，PBS冲洗；滴加试剂C，37℃孵育15 min，PBS冲洗；DAB显色，自来水冲洗，苏木精复染、脱水、透明、中性树胶封片，显微镜下观察。用已知阳性标本切片作阳性对照，PBS取代一抗作空白对照。

1.4 免疫组化结果判读标准 由两位经验丰富的病理科医师按照独立、双盲的原则阅片。ERG和MDM2以细胞核着黄色、棕黄色或棕褐色为表达阳性细胞。采用二次计分法对染色结果进行半定量判断。在400倍视野范围内随机选择3个不重复的视野，每个视野下计数100个肿瘤细胞，将各视野的平均阳性率作为该切片的阳性率。阳性细胞数≤10%计0分，11%～25%计1分，26%～50%计2分，阳性细胞数>50%计3分。染色强度阴性为0分细胞核无着色，弱阳性计1分为细胞核着黄色，中度阳性计2分为细胞核着棕黄色，强阳性计3分为细胞核着棕褐色。两者计分相乘：0分为阴性(-)，1～3分为弱阳性(+)，4～6分为阳性()，≥7分为强阳性()。定义阴性表达为(-)，阳性表达为(+～)。

1.5 统计学方法 采用SPSS20.0统计软件进行χ2检验及Spearman等级相关分析。

2 结 果

2.1 ERG蛋白在前列腺组织中的表达 前列腺癌组织中，ERG蛋白的阳性染色部位均位于细胞核，为黄色、棕黄色或棕褐色颗粒；ERG蛋白在病例组中的阳性表达率为33.3%(16/48)，且多为中度阳性或者强阳性。见图1。在对照组中未见表达，两者差异有统计学意义(P<0.05)。按Gleason评分分级，ERG蛋白在高分化组、中分化组和低分化组中的阳性表达率分别为21.4%，34.8%和45.5%，三组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2 MDM2蛋白在前列腺组织中的表达 前列腺癌组织中，MDM2蛋白阳性部位定位于细胞核，为黄色、棕黄色或棕褐色颗粒，见图1，其在病例组的阳性表达率为47.9%(23/48)，在对照组未见表达，二者差异有统计学意义(P<0.05)。MDM2蛋白在高、中和低分化组中的阳性表达率分别为50.0%、47.8%和45.5%，三组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

图1 ERG及MDM2在前列腺癌组织中的阳性表达(DAB，×400)

2.3 ERG蛋白与MDM2蛋白在前列腺癌组织中表达的相互关系 前列腺癌组织中16例ERG蛋白阳性表达者中8例MDM2蛋白表达阳性，32例ERG阴性表达者中15例MDM2蛋白表达阳性。Spearman等级相关检验表明：ERG蛋白与MDM2蛋白在前列腺癌组织中的表达呈正相关(r=0.831，P=0.001)。

3 讨 论

ERG〔5〕在参与细胞的增殖、分化、血管生成以及细胞间的相互作用过程中发挥重要作用。ERG蛋白不仅在正常的血管上皮细胞表达〔4〕，而且还在多种肿瘤细胞中高表达〔6，7〕，如急性髓性白血病，尤文氏瘤、前列腺癌等。本研究检测出有33.3%(16/48)的前列腺癌病例ERG蛋白高表达与前列腺癌不同病理分级无关，这与相关研究〔3，8〕结果一致。前列腺癌为实体肿瘤，其生长依赖肿瘤的血管生成，内皮细胞的凋亡贯穿新生血管的发生和重塑〔9〕，而ERG蛋白参与调控内皮特异性基因在血管形成、退化过程中的表达，对新生血管具有重要影响，此外ERG基因还可能影响细胞的表观遗传学状态〔10〕，进而影响肿瘤的发生。

许多肿瘤中都有MDM2蛋白的表达，如肺癌、乳腺癌、消化道恶性肿瘤和前列腺癌等〔11～13〕。本研究中MDM2蛋白在前列腺癌中高表达，但在不同病理分级中，MDM2蛋白表达无显著差异。MDM2蛋白主要功能是与p53蛋白结合，通过特异性泛素蛋白连接酶(E3)促使p53蛋白降解，进而抑制p53对细胞周期的阻滞和凋亡。MDM2在诸多人类肿瘤中高表达与肿瘤的侵袭和转移及预后有关〔12〕。一般来说，肿瘤的恶性程度高与MDM2高表达提示肿瘤更容易转移和预后不良。本研究结果提示ERG和MDM2在前列腺癌的发生和发展中可能具有某些相互作用，在其信号通路上也可能存在某些联系，但具体机制还需要进一步研究。

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2 韩苏军，张思维，陈万青，等.中国前列腺癌发病现状和流行趋势分析〔J〕.临床肿瘤学杂志，2013；18(4)：330-4.

3 Tomlins SA，Rhodes DR，Perner S，etal.Recurrent fusion of TMPRSS2 and ETS transcription factor genes in prostate cancer〔J〕.Science，2005；310(5748)：644-8.

4 Lelievre E，Lionneton F，Mattot V，etal.Ets-1 regulates fli-1 expression in endothelial cells.Identification of ETS binding sites in the fli-1 gene promoter〔J〕.J Biol Chem，2002；277(28)：25143-51.

5 Shaikhibrahim Z，Ochsenfahrt J，Fuchs K，etal.ERG is specifically associated with ETS-2 and ETV-4，but not with ETS-1，in prostate cancer〔J〕.Int J Mol Med，2012；30(5)：1029-33.

6 Salek-Ardakani S，Smooha G，de Boer J，etal.ERG is a megakaryocytic oncogene〔J〕.Cancer Res，2009；69(11)：4665-73.

7 Zhu B，Kyprianou N.Transforming growth factor beta and prostate cancer〔J〕.Cancer Treat Res，2005；126(10)：157-73.

8 Xue L，Mao X，Ren G，etal.Chinese and western prostate cancers show alternate pathogenetic pathways in association with ERG status〔J〕.Am J Cancer Res，2012；2(6)：736-44.

9 Lelievre E，Lionneton F，Soncin F.Role of the ETS transcription factors in the control of endothelial-specific gene expression and in angiogenesis〔J〕.Bull Cancer，2001；88(2)：137-42.

10 Iljin K，Wolf M，Edgren H，etal.TMPRSS2 fusions with oncogenic ETS factors in prostate cancer involve unbalanced genomic rearrangements and are associated with HDAC1 and epigenetic reprogramming〔J〕.Cancer Res，2006；66(21)：10242-6.

11 李玉梅，吴 穷，秦叔逵.MDM2在恶性肿瘤中的研究进展〔J〕.临床肿瘤学杂志，2012；17(3)：277-81.

12 Chen H，Xie L，Liu B.Clinical significance of MDM2 as a tumor biomarker〔J〕.Chin German J Clin Oncol，2012；11(6)：356-60.

13 Chen T，Yi SH，Liu XY，etal.Meta-analysis of associations between the MDM2-T309G polymorphism and prostate cancer risk〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev，2012；13(9)：4327-30.

〔2015-11-23修回〕

(编辑 苑云杰/曹梦园)

宁夏自然科学基金资助项目(NZ13280；NZ1234)

陈志强(1971-),男,硕士,主任医师，硕士生导师，主要从事泌尿系统肿瘤的临床、影像、基础研究。 杨文君(1973-)，女，博士，教授，硕士生导师，主要从事肿瘤遗传研究。

刘家赵(1985-),男,在读硕士,主要从事前列腺肿瘤与病理研究。

R737.25

A

1005-9202(2017)05-1061-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.05.009

1 天津市海河医院超声科

2 宁夏医科大学生殖与遗传重点实验室