TAP联合K i-67对判断非小细胞肺癌患者预后的临床意义

姜 峰，杜 然

TAP联合K i-67对判断非小细胞肺癌患者预后的临床意义

姜 峰1，杜 然2

目的探讨肿瘤异常蛋白（tumor abnormal protein，TAP）和 Ki-67在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）中的表达，并分析其与 NSCLC临床病理特征关系及患者术后预后的意义。方法收集113例 NSCLC患者的临床资料和存档石蜡组织标本，按生存时间将患者分为 A组（生存时间 ＜5年）和 B组（生存时间≥5年）。免疫组化检测肿瘤组织中 Ki-67蛋白的表达，分析 TAP面积及Ki-67增殖指数与患者预后的关系。结果（1）TAP面积越大，生存时间越短。Ki-67增殖指数越高，生存时间越短；两者之间呈负相关。（2）A组 TAP面积阳性率为81.70%，明显高于B组（54.76%），且两组相比差异有显著性（P＜0.05），表明Ki-67增殖指数与患者的生存期成反比；A组 Ki-67增殖指数阳性率为76.06%，明显高于B组（57.14%），且两组相比差异有显著性（P＜0.05），表明 Ki-67增殖指数与患者的生存期成反比。（3）A组 TAP、Ki-67均 阳性 的比 率为57.75%，明显高于B组（35.71%），A组TAP、Ki-67均阴性的比率为9.86%，明显低于 B组（26.20%）；113例 NSCLC患者均阳性的比率为40.71%，均阴性比率为 15.93%，两组相比差异有显著性（P＜0.05），且比单项比较更为精确，表明 TAP联合Ki-67对患者预后判断更准确。结论TAP联合 Ki-67可作为判断 NSCLC患者预后的重要指标。

肺肿瘤；非小细胞肺癌；TAP；Ki-67；预后

原发性肺癌无论发病率和病死率均增长较快［1－3］，其中约 85% 为 非 小 细 胞 肺 癌 （non-small cell lung cancer，NSCLC）［4］，其预后也越来越引起人们的关注。Ki-67是一种与细胞周期相关的蛋白质，与肿瘤的增殖、浸润、转移潜能和预后密切相关［5］。肿瘤异常蛋白（tumor abnormal protein，TAP）是细胞中癌基因和抑癌基因突变后表达的产物，TAP高凝聚是癌细胞在异常增生过程中的共同特征［6］。近年来，TAP已被广泛应用于消化系统、肺癌、乳腺癌等早期筛查或临床治疗后效果评估。本实验检测113例 NSCLC患者的TAP凝聚情况及 Ki-67的表达，探讨 TAP面积和 Ki-67增殖指数与 NSCLC患者的预后关系。

1 材料与方法

1.1 材料收集2009年7月 ～2010年12月聊城市肿瘤医院术前行 TAP检测并术后病理学确诊的113例 NSCLC。淋巴结均无远处转移，术前均未接受放疗、化疗或其它抗癌治疗。术后均行放、化疗。113例NSCLC患者中临床资料完整，男性78例，女性35例；年龄32～73岁，中位年龄51岁；无吸烟史者52例，有吸烟史者 61例；腺癌 37例，鳞癌 59例，腺鳞癌17例；中央型肺癌68例，周围型肺癌45例；高分化19例，中分化46例，低分化 48例；生存时间＜5年者71例，≥5年者42例。肿瘤TNM分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期36例，Ⅲ期24例。按生存时间将患者分为A组（生存时间＜5年）和 B组（生存时间≥5年）。所有病例采取电话或门诊随访方式，随访截止日期2016年4月30日。

1.2 方法

1.2.1 制片 采指端末梢血，推至厚薄均匀的血片2张，干燥后移置操作水平净化台内（温度18～25℃）；相对湿度（45%～60%）约 10 min，使血片的温度和湿度达到工作条件。将凝聚助剂充分摇匀滴加 3滴（每滴约 50μL，液滴斑点直径10～12 mm）。1.5～2 h待血片上凝聚助剂自然干燥（TAP与凝聚助剂反应的过程）后，在滴过试剂的地方形成圆形“斑点”，即标本制作完成。

1.2.2 检测 将标本置于图像分析仪的显微镜下，用 4×平场消色差物镜，在显示屏上依次扫描观察血片标本的3个斑点，寻找特异形态的凝聚物，有不规则类圆形晶体颗粒，颗粒呈淡绿色、淡黄色或棕色，中心有屈光性，四周因混合物较多而呈棕黑色或墨绿色为阳性，无上述颗粒检出为阴性。将有可疑图像的斑点转用高倍镜观察，在瑞生 TAP检测图文系统中采集 ＞80μg以上的特异凝集物，面积总和乘以0.62，所得数值为检测特异凝集物的最终数。

1.3 纳入标准按照WHO（2010）肺癌标准进行分类［7］，术前有 TAP检测结果，术后经病理确诊的NSCLC临床相关资料完整；病理资料中有 Ki-67免疫组化表达的结果。

1.4 结果判定TAP面积 0～121μm2为阴性；阳性包括：TAP异常／凝聚物较小，面积121～225μm2；TAP异常／凝聚物较大，面积≥225μm2。原发肿瘤组织Ki-67免疫组化结果，对相应病理切片免疫组化结果进行复阅，Ki-67按阳性细胞的百分比进行计数，以阳性细胞数≤20%为阴性，21%～60%为弱阳性，≥61%为强阳性。

1.5 统计学方法应用 SPSS 18.0软件进行统计学分析。计数资料采用 χ2检验；采用Kaplan-Meier法进行生存分析；关联分析采用 Spearman等级相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 TAP面积和 K i-67增殖指数与 NSCLC患者生存时间关系经Spearman等级相关分析显示，TAP面积和NSCLC患者生存时间呈显著负相关，差异有统计学意义（rs＝－0.903，P＝0.000）；Ki-67增殖指数大小与 NSCLC患者生存时间呈显著负相关，差异有统计学意义（rs＝－0.794，P＝0.000）；即TAP面积越大、Ki-67增殖指数越高，NSCLC患者生存时间越短。

2．2 A、B两组患者 TAP面积和 Ki-67增殖指数与 NSCLC患者术后生存时间的关系A、B组患者术后生存时间差异与患者的病理类型、分化程度、TNM分期及吸烟史无关，与患者性别、年龄有关（表 1）。A组患者TAP面积阳性率为81.70%，明显高于B组（54.76%），且两组相比差异有显著性（P＜0.05），表明 TAP面积与NSCLC患者生存时间成反比；A组 Ki-67增殖指数阳性率为 76.06%，明显高于B组（57.14%），且两组相比差异有显著性（P＜0.05），表明 Ki-67增殖指数与 NSCLC患者的生存时间成反比（表2）。

表1 两组患者的临床资料［n（%）］

表2 A、B两组TAP面积和 Ki-67增殖指数与NSCLC患者术后生存期的关系

2．3 联合 TAP、K i-67检测与 NSCLC患者生存时间的关系

A组 TAP、Ki-67均阳性的比率为 57.75%，明显高于 B组（35.71%），A组Ki-67、TAP均阴性的比率为9.86%，明显低于 B组（26.20%）；113例 NSCLC患者均阳性的比率为40.71%，均阴性比率为15.93%，两组相比差异有显著性（P ＜0.05），且比单项比较更精确，表明联合 TAP、Ki-67对患者预后判断更精确（表3）。

表3 联合 TAP、K i-67检测与 NSCLC患者生存时间关系

3 讨论

临床实践证明，肿瘤和肿瘤标志物没有严格意义上的一一对应关系，一种肿瘤可以产生多种肿瘤标志物，一种肿瘤标志物也可以出现在多种肿瘤中。TAP并不取决于恶性生成物的具体位置和组织结构，是各种肿瘤的共性物质，TAP检测在同一反应中可以将几十种肿瘤进行一次性组合检测、高度聚集，极大的放大肿瘤信号，大大提高肿瘤检测的灵敏度和准确性。另有研究表明，TAP与肿瘤大小无一定关系，在晚期肿瘤中的表达反而下降或阴性，认为此现象与终末期时癌细胞代谢下降、分泌的糖蛋白下降有关［8－9］。本组结果表明：随着TAP面积增加，生存时间总趋势越短，但亦有个例除外。

Ki-67是目前应用最广泛的增殖细胞标记之一，它的表达出现于G1中期到晚期，S期和 G2期逐渐增加，有丝分裂期达高峰，分裂后迅速降解或丢失抗原决定簇，到 G0期则不表达，半衰期为 1 h或更短［10］。Ki-67被认为涉及细胞增殖的维持，然而其发挥功能的机制尚未清楚。资料表明 Ki-67增殖指数高低与肿瘤分化程度、浸润转移以及预后密切相关［11］。所以在肿瘤的研究中是一种重要的参考依据。文献［12］还发现 Ki-67增殖指数越高，肿瘤分化程度越低，提示肿瘤的增殖指数往往代表肿瘤的恶性程度。本组结果也印证这一特征：Ki-67增殖指数越高，患者的生存时间越短。

综上所述，Ki-67和 TAP可以作为 NSCLC患者的独立预后因素，联合检测两者对 NSCLC患者术后预后判断更加准确，值得临床推广。

［1］ Belani C P，Liao J.Maintenance therapy for non-small cell lung cancer［J］.Lancet，2010，375（9711）：281－282.

［2］ Dahlberg SE，Sandler A B，Brahmer JR，et al.Clinical course of advanced non-small cell lung cancer patients experiencing hypertension during treatmentwith bevacizumab in co-mbination with carboplatin and paclitaxel on ECOG 4599［J］.J Clin Oncol，2010，28（6）：949－954.

［3］ Jemal A，CenterM M，Desantis C，etal.Global patterns of cancer incidence and mortality rates and trends［J］.Cancer Epidemiol Biom Prev，2010，19（8）：1893－1907.

［4］ Suresh S，Ramalingam M D，Taofeek K，et al.Lung cancer：new biological insightsand recent therapeutic advances［J］.CA Cancer JClin，2011，61（2）：91－112.

［5］ 武世伍，承泽农，俞 岚，等.p16和 Ki-67在非小细胞肺癌组织中的表达及其与预后的关系［J］.中国组织化学与细胞化学杂志，2011，20（6）：605－609.

［6］ 吴永梅，张霁雯，蔡 琰.肿瘤异常蛋白（TAP）检测在 Barrett食管及食管腺癌临床诊断中的意义［J］.现代消化及介入诊疗，2015，2：83－84.

［7］ Molina JR，Yang P，cassivi SD，etal.Non-small cell lung cancer：epidemiology，risk foctors，treatment，and survivorship［J］. Mayo Clin Proc，2008，83（5）：584－594.

［8］ Molina JR，Yang P，cassivi SD，etal.Non-small cell lung cancer：epidemiology，risk foctors，treatment，and survivorship［J］. Mayo Clin Proc，2008，83（5）：584－594.

［9］ Matsumura M，Niwa Y，Kato N，et al.Detection of alphafetoproteinm RNA，an indicator of hematogenous spreading hepatocellular carcinoma，in thecirculation：a possible predictor ofmetastatic hepatocellular carcinoma［J］.Hepatology，1994，20（6）：1418－1425.

［10］Schulter C，Duchrow M，Wohlenberg C，etal.Molecular cloing of the cell proliferation associated nuclear antigen defined by antibody Ki-67 an unique green coding for anew，PEST protein［J］.Cell Biol，1993，123（3）：513.

［11］冯志寅，王维娜，董娟娟，等.P53、P63、Ki67分子标志物与食管癌淋巴结转移相关性 Logistic回归分析［J］.新疆医科大学学报，2015，9：1091－1094.

［12］任秋华，肖明明，侯 慧，等.ER、PR、CerbB-2、p53和Ki67蛋白在乳腺癌中的表达及其意义［J］.中国肿瘤临床与康复，2010，1：13－5.

R 655.3

：B

1001－7399（2017）01－0104－03

10.13315／j.cnki.cjcep.2017.01.028

接受日期：2016－11－31

1山东省聊城市肿瘤医院胸外科 252000

2山东省聊城市人民医院病理科 252002

姜 峰，男，硕士，主治医师。E-mail：jiangfengyisheng＠163.com